Характеристика возбудителя

Вирусную природу ИНАН лошадей впервые установили Карре и Балле в 1904-1906 гг.

Морфология и химический состав. Вирус имеет внешний оболочечный гликопротеин gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45. В настоящее время консервативные эпитопы белков gp90 и gp45 служат основной целью поисков компонентов вакцины против ИНАН.

Вирус ИНАН имеет конический капсид длиной около 120 нм и шириной 60 и 20 нм со­ответственно на широком и узком конце. В его структуре обнаружено 6 основных бел­ков с мол.м. от 9 до 90 кДи 4 минорных полипептида. В состав наружного слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина - gp90 и gp45.

Устойчивость. Вирус устойчив к действию трипсина, РНК- и ДНК-азы, чувствите­лен к эфиру; термолабилен, при 60°С теряет вирулентность за 30 мин. Кипячение разрушает его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют за 1-3 ч При 0°С до -2°С сохраняется до 3-х лет, в глицерине - 7 мес., в моче и навозной жиже - до 2,5 мес., в высушенной крови в комнатных условиях - 7 мес., в стерильной воде - до 160 дн. Инфицированное сено и паст­бища безопасны через 9 мес. после заражения В осенне-зимний период в овсе вирус теряет патогенные свойства только через 8,5 мес. Устойчив к высушиванию и гниению. В лиофилизированном состоянии при комнатной температуре сохраняет вирулентность в течение 7 мес. Замораживание на его активность не влияет. При биотермической обработке навоза ви­рус инактивируется через 30 дн, 2-4%-ный р-р NaOH убивает его за 20 мин, 35%-ный р-р креалина - через 30 мин, 20%-ная хлорно-известковая смесь, содержащая 29,5% активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах за 3 сут. Вирус относительно устойчив к воз­действию химических средств. Глицерин частично инактивирует его в течение 4 нед и пол­ностью - за 7 мес., 2%-ный р-р формалина инактивирует вирус за 5 мин, но через 5 мин можно реактивировать его р-ром аммиака.

Антигенная структура. У вируса ИНАН описаны 3 группы АГ р29, р12 и р14. АГ р29 представляет собой белок, обозначенный как G-AT Он находится внутри вириона, освобо­ждается при обработке вируса эфиром, является общим для всех штаммов вируса ИНАН и обнаруживается в РСК, РДП и РИФ Помимо общего специфического G-AT, вирус содержит поверхностные АГ р12 и р14, различающиеся в опытах перекрестного заражения гомологичными и гетерологичными штаммами. Кроме 2-х негликолизированных вирусных пептидов (р29 и р12), вирионы ИНАН со­держат гликопротеины gp77/79 (основной гликопротеин вириона) и gpl0 AT вирусной обо­лочки gp77/79 ответственен за продукцию ВНА и подвержен АГ-изменчивости под влияни­ем AT. Установлено, что наиболее АГ- активная область белка gp45 (оболочечного гликопротеина) располагается на аминном конце и лежит между гидрофобными доменами слия­ния и трансмембранным доменом. В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, р15, р11, р9), однако основная масса состоит из белков р26 и р15. Известно, что штаммы возбудителя ИНАН различаются в 1 РН и перекрестной защиты на лошадях. Установлено, что в процессе инфекции происходят изменения поверхностных АГ вируса, что сопровождается появлением антигенных вариан­тов, т.е. большое разнообразие вариантов вируса ИНАН может генерироваться в организме инфицированных животных. Установлено быстрое появление новых АГ вариантов ви­руса в процессе персистентной инфекции. Существенная изменчивость генов поверхностных гликопротеинов gp20 и gp45 в процессе инфекции у одного и того же животного выявляется с помощью монАТ.

Антигенная вариабельность и родство. Штаммы вируса ИНАН, выделенные в раз­личных частях земного шара, в АГ-отношении идентичны Они различаются в РН, но име­ют общий АГ, выявляемый в РСК, РЗСК и РДП Помимо того, вирус ИНАН дает перекрест­ные серологические реакции с вирусом ВИЧ (СПИД), но не дает таких перекрестов со всеми другими ретровирусами животных. У лошадей, экспериментально зараженных клонирован­ным вирусом ИНАН, развивается хронически протекающая болезнь с периодическими ре­цидивами лихорадки, сопровождающаяся виремией. Изоляты вируса, выделенные во врем приступов лихорадки, были неодинаковы по АГ-свойствам и отличались друг от друга в РН и ЭФ-ПААГ, но не в РСК и РДП.

Локализация вируса. Вирус проникает в организм восприимчивых животных, глав­ным образом, парентерально и разносится по всем органам и тканям. Особенно интенсивно размножается в костном мозге и крови, вызывая угнетение эритропоэза и гемолиз части эритроцитов во время приступа лихорадки. Наиболее высокие титры вируса наблюдают у зараженных лошадей во время первого подъема температуры. Затем титр вируса снижается, но в период повышения температуры вновь возрастает. У лошадей без симптомов болезни титр вируса низкий, иногда его даже невозможно выявить (в культуре лейкоцитов). ИНАН - лимфопролиферативная болезнь с непрерывной виремией при наличии AT. Это можно объ­яснить повреждением лимфоцитов, вызванным вирусом, в результате чего защитный кле­точный иммунный процесс нарушается. Возбудитель в крови находится в виде комплекса вирус-АТ. У большинства лошадей наблюдают гипергаммаглобулинемию и снижение в сы­воротке крови количества комплемента С-3. При изучении локализации вирусного АГ с по­мощью ИФ у экспериментально зараженных лошадей установлено следующее. Через 6-38 дн. после заражения животных АГ обнаруживали в цитоплазме клеток селезенки, лимфоуз­лов, печени, почек, легких, костного мозга, зобной железы, головного мозга, мозжечка, ги­пофиза и желудка. Он обычно находился в единичных клетках или в макрофагах в виде не­больших капелек, включенных в цитоплазму.

Вирусовыделение. Из организма больной лошади вирус выделяется с мочой, калом, носовой слизью, секретом конъюнктивы, молоком. Загрязненные выделениями больных корма, навоз и другие субстраты могут быть факторами передачи инфекции.

Антигенная активность. У инфицированных лошадей образуются AT к гликопротеинам оболочки и мажорному протеину сердцевины (р26) вирионов Однако гликопротеины оболочки вирионов очень вариабельны, что является одним из основных механизмов защи­ты возбудителя от элиминирующего воздействия факторов иммунитета. В организме инфи­цированных лошадей в процессе персистенции возбудителя образуется большое количество различающихся по гликопротеину антигенных вариантов вируса КСА у больных животных впервые обнаружены в 1966 г. Сыворотка экспериментально зараженных лошадей стано­вится положительной в РСК с 14-го по 29-й день после инокуляции и удерживается в таком значении в течение нескольких недель Величину КС-титра у больных животных можно разделить на 4 стадии предшествующую - перед развитием AT, раннюю - увеличение титра с высоким плато, снижающую - с уменьшением титра, и позднюю стадии болезни. Специфические ПА появляются в крови лошадей в течение 45 дн. после заражения Ос­новные симптомы болезни, включая анемию, тромбоцитонемию и гломерулит, являются следствием развития специфического иммунного ответа. ПА к группоспецифическому АГ выявляют РИД, используя АГ из зараженные культур клеток или тканей селезенки или из очищенного вируса ПА обнаруживают на 14-38-й день после заражения; они могут со­храняться до 7 лет. Преципитины более постоянно обнаруживают в сыворотках крови хро­нически больных животных. В селезенке больных лошадей выявлен АГ, участвующий в ре­акции преципитации с AT сыворотки крови больных животных. Сыворотка крови заражен­ных лошадей содержит антивирусные AT, реагирующие как в РСК, так и в РЗСК Выделен­ный IgG реагировал в РСК, в то время как иммуноглобулин IgG(T) ингибировал РСК и свя­зывался в РЗСК В РЗСК AT выявляли с 28-го по 120-й день после заражения животного.

АГ детерминанты для индукции ВНА расположены в вариабельной области gp90. Основная гуморальная реакция направлена против высоко АГ домена, представленного 83 аминокислотами. Низкие титры ВНА и высокий уровень антигликопротеинной активности сывороток свидетельствует о том, что иммунный ответ направлен прежде всего не на ней­трализующие эпитопы, а на вирусные гликопротеины. Большинство иммуногенных сайтов на поверхности вириона не чувствительно к нейтрализации. Нейтрализующей активностью обладает фракция IgG, которую обнаруживают через 40 дн после заражения животного. У некоторых лошадей она сохраняется в течение всей болезни и действует на поверхностные АГ вириона, т. е. реагирует с типо-, но не группоспецифическим компонентом вируса ИНАН. Опыты показали, что 99% инфекционного вируса циркулирует в сыворотке больных живот­ных в комплексе с AT.

Экспериментальная инфекция. Подкожное или внутривенное введение 20-50 мл, а часто даже 0,01 мл крови или сыворотки, вызывает у лошадей, в частности у жеребят, через 9-93 дня остро или хронически протекающую болезнь или только вирусоносительство. Заражение per os удается с трудом даже при введении массивных доз вируса. Требуется по­вторная дача большого количества инфицированных крови или мочи. Ослов и мулов заразить искусственно удает­ся не всегда Удавалось заражать свиней, в их организме вирус находился 30-197 дн.

Культивирование. Вирусразвивается в переживающей ткани селезенки, надпо­чечников и лимфоузлов жеребят, в культурах эмбриональных тканей лошади, но без при­знаков ЦПД, в культуре клеток лошадиных лейкоцитов, а также клеточной линии кожи лошади.

ГА свойства. Вирус обладает ГА активностью в отношении эритроцитов морской свин­ки ГА АГ вируса типоспецифичны и отличаются от АГ, выявляемых в РН. ГА не отделим от вирусных частиц. Рецепторы эритроцитов разрушаются протеолитическими ферментами и формальдегидом, но устойчивы к нейраминидазе, дезоксихолату натрия и перйодату ка­лия. В сыворотке больных лошадей содержатся анти-ГА. В РТГА вирус каждого штамма ингибируется только гомологичной антисывороткой. Появление в сыворотках крови анти-ГА предшествует появлению у них ВНА. Вирус ИНАН адсорбируется на лошадиных эрит­роцитах, гемолиз их происходит после инкубации со свежей сывороткой крови лошади или морских свинок при 37°С Эритроциты, обработанные 4 ед. ГА и неразведенной свежей сы­вороткой лошади, лизируются на 20%, в то время как при обработке 4 ед комплемента морской свинки - на 100%. Специфическая сыворотка лошади подавляет способность вируса агглютинировать эритроциты, но гемолиз не тормозит. Добавление специфической сыво­ротки к вирусу, уже прикрепившемуся на эритроцитах, усиливает гемолиз.

Гемадсорбирующие свойства. Наблюдали адсорбцию эритроцитов морской свинки на инфицированной вирусом культуре клеток кожно-мышечной ткани эмбриона лошади.