Эпизоотологические особенности

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лошади. Осо­бенно опасны животные в период острого течения болезни и хроники в период обострения болезни, так как в это время вирус в организме лошадей находится в наибольшей концен­трации. Источниками инфекции могут быть также лошади с латентными формами болезни. Вирусоносительство у них может продолжаться 7-10 и даже 18 лет. Необходимо также учитывать возможность распространения возбудителя лошадьми при латентном течении инфекции. Факторами передачи возбудителя могут быть загрязненные выделениями боль­ной лошади корма, вода, навоз, предметы ухода и т.д. В организме восприимчивого живот­ного вирус попадает через кожу, слизистые оболочки и ЖКТ. Последний путь заражения, по наблюдениям многих авторов, не считается ведущим. Заражение ИНАН возможно при случке и конгенитально - жеребят больными кобылами. Передача вируса может про­изойти при проведении различных манипуляций с кровью, шприцем, при маллеинизации, искусственном осеменении и т.д.. Однако основной путь переноса возбудителя от боль­ных лошадей к здоровым - кровососущие насекомые: слепни, мухи-жигалки, комары, а так­же от кобылы к жеребенку - внутриутробно или с молоком. Установ­лено заражение при совместном содержании животных.

ИНАН характеризуется выраженной стационарностью, сезонностью и определенным ареалом. Болезнь чаще встречается в летне-осеннее время, в лесисто-болотистых с кислыми неполноценными почвами, в период массового размножения и лета жалящих насекомых (гнус). Массовое заболевание лошадей наблюдают преимущественно в годы с жарким и су­хим летом, а зимой и весной и в горных местностях - в виде спорадических случаев. Эпизо­отия может продолжаться от 3-5 мес. до 1-2 лет, протекая остро и подостро. Затем начинает преобладать хроническое (медленное) и латентное течение. Факторы, ослабляющие резистентность животного, - неполноценное кормление и сильное раздражение нерв­ной системы животного, вызванное укусами кровососущих насекомых.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях болеют лошади всех возрастов и пород, а также ослы и мулы Заболевшие жеребята часто погиба­ют. Ослы более устойчивы к вирусу ИНАН.

Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Болезнь развивается после периода инкубации в течение от 15 дн. до нескольких недель в природных условиях и от 10 до 20 дн. в эксперименте. Различают сверхострое, или септицемическое, острое, подострое и хроническое или латентное течение анемии. В развитии болезни характерна опреде­ленная цикличность с чередованием периодов обострения (рецидивов) и затухания (ремис­сий), что создает в конечном счете большое многообразие ее форм.

При сверхостром течении отмечают быстрый подъем температуры тела, геморрагиче­ский гастроэнтерит, асфиксию, сердечную слабость, атаксию, параличи задних конечностей и гибель животных через несколько часов или 1-2 дня.

Острое течение болезни также характеризуется лихорадкой (41-42°С), угнетением или легким возбуждением, гиперемией и отеком конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, нарушением сердечной деятельности, иногда кровавым поносом, исхуда­нием при сохраненном аппетите, набуханием и бледностью с наличием кровоизлияний обо­лочек третьего века, отеками в области живота, препуция, конечностей, шаткостью походки, одышкой, быстрым развитием анемии. Кровь становится водянистой (разжижение), количе­ство эритроцитов падает до 1 млн. в 1 см³. В крови появляются комплексы "инфекционный вирус - антитело" и отложение их в клубочках почек. Количество гемоглобина сни­жается до 20-30%, СОЭ ускорена (70-80 делений в первые 15 мин), отмечается гипергам-маглобулинемия и тромбоцитопения. В церебральной жидкости регистрируют увеличение количества белка и белых клеток крови. Продолжительность болезни 1-3 нед, иногда месяц, и животные погибают.

Подострое течение болезни длится 2-3 мес., сопровождается ремиссирующей лихорад­кой и такими же симптомами в период рецидива, что и при остром течении. В период ре­миссии указанные признаки постепенно исчезают, и животные выглядят здоровыми. Чем чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее истощаются защитные силы ор­ганизма, и животные в конце концов погибают.

Хроническое течение болезни чаще является продолжением подострого течения Оно отличается чередованием лихорадочных периодов (через 1-3 дн.) и продолжительными пе­риодами покоя (ремиссии) - до нескольких месяцев. Во время рецидивов наблюдаются те же симптомы, что и при остром течении болезни: утомляемость, одышка, сердцебиение, потли­вость, тремор мышц, исхудание В период ремиссий они исчезают.

Латентное течение ИНАН наблюдается обычно в стационарно неблагополучных пунк­тах у резистентных лошадей. Для него характерны резкие и кратковременные подъемы температуры. Такие животные внешне кажутся здоровыми, но являются вирусоносителями представляют большую опасность для окружающего поголовья, служат источником возбудителя инфекции. Болезнь может длиться годами, проявляясь иногда лишь заметным исхуданием, быстрым утомлением и учащенным сердцебиением на работе и при быстрой езде. Персистенция вируса в организме таких внешне здоровых животных может наблюдаться на протяжении 18 лет.

Патологические изменения варьируют в зависимости от тяжести и продолжительности течения болезни. Отмечают выраженный геморрагический диатез в виде многочисленных кровоизлияний на слизистых, серозных оболочках и в паренхиме органов, увеличение селезенки и лимфоузлов, дистрофические изменения в паренхиматозных органах. Картина вскрытия после острого течения болезни характеризуется септическими явлениями. Наблю­дают (непостоянно) исхудание животного, желтушные оттенки слизистых оболочек глаз, но­са, рта, с точечными кровоизлияниями, наиболее часто на третьем веке и слизистых губ. Подкожная и межмышечная клетчатка желтушна, пронизана кровоизлияниями, местами имеет студневидные серозно-геморрагические инфильтраты. Лимфоузлы, особенно пор­тальные и почечные, набухшие, сочны, покрасневшие, окружающая их ткань отечна. Ске­летные мышцы крестца и крупа кое-где серого или глинистого цвета, на разрезе рисунок сглажен. Селезенка сильно увеличена (спленомегалия), кровенаполнена, с кровоизлияниям под капсулой, пульпа дряблая. Печень увеличена, дрябловата, мозаичного цвета. Почки уве­личены, бледны, усеяны кровоизлияниями, граница слоев стушевана. Сердце увеличено, миокард серого или серо-глинистого цвета. В ЖКТ геморрагическое воспаление слизистой оболочки с кровотечением в полость. В легких кровоизлияния под плерву и в паренхиму. Кровь водянистая, светло-красного (алого) цвета. В головном и спинном мозге иногда нахо­дят полнокровие, кровоизлияния, отек и дряблость мозгового вещества.

Патологоанатомические изменения после хронического течения болезни характеризуют­ся отсутствием выраженных септических явлений, истощением, бледностью и желтушностью слизистых оболочек, наличием мелких кровоизлияний на серозных покровах кишеч­ника, сердца и в подкожной клетчатке, студневидных отеков клетчатки конечностей, под­грудка и брюшных стенок, увеличением селезенки и лимфоузлов, их плотной консистенци­ей Печень увеличена, плотная, имеет мускатный рисунок на разрезе. Почки увеличены, плотны, серо-желтоватого цвета Миокард в состоянии зернистой и жировой дистрофии с очагами склероза (серо-белые участки).

После латентного течения болезни в трупах не обнаруживают характерных изменений Иногда отмечают изменение цвета селезенки (пульпа ее приобретает светло-красное окра­шивание), следы старых кровоизлияний (пигментные пятна) на эндокарде, под серозньми оболочками и очаговые некрозы миокарда.

Гистологические изменения. Наиболее характерны и постоянны изменения со сторо­ны мезенхимы в виде пролиферации клеток мононуклеарно-макрофагальной системы и на­рушения обмена железа (гемосидерина). При остром течении болезни уже через 11-12 дн. после заражения в селезенке отмечают сильное инфильтрирование ткани незрелыми эрит­роцитами, уменьшение количества гемосидерина и хаотичное его расположение по всей пульпе, а не в присинусных зонах (как это бывает в норме), атрофию лимфофолликулов, набухание и пролиферацию ретикулярных клеток, увеличение числа лимфобластов, эозинофильных гранулоцитов.

Патогенез. Патогенез изучен недостаточно. Вирус, проникая в организм восприим­чивого животного парентерально с кровью, широко распространяется по органам и тканям. Чаще всего он выявляется в селезенке, лимфоузлах и печени. Методом ФА АГ вируса четко определяется в цитоплазме макрофагов в виде зерен или гранул. Возбудитель размножается в эритроцитах крови и кроветворных клетках костного мозга, сильно наводняя органы и ткани больного животного, достигая максимума в крови в период лихорадки. В это время он легко выявляется различными методами. В то же время в период ремиссии вирус можно обнаружить лишь путем заражения здоровой лошади. Наибо­лее характерный признак болезни - анемия - сопровождается резким уменьшением количе­ства эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением её свертываемости. Со­гласно современным представлениям, анемия может быть обусловлена двумя механизмами. Первый механизм связан с непосредственным действием вируса на кроветворный орган -костный мозг, вызывая угнетение его деятельности, нарушение эритропоэза, лизис эритро­цитов, снижение (или прекращение) усвоения железа Второй механизм, который считают главным в формировании анемии, связан с образованием противовирусных AT.

Показано, что 3-я фракция комплемента (СЗ) и AT, синтезирующиеся в организме в от­вет на проникновение вируса, покрывают зараженные эритроциты лошади, из-за чего по­следние становятся хрупкими, быстро и в большом количестве разрушаются и фагоцитируются макрофагами. Вирус вызывает раздражение клеток ретикулоэндотелия, вследствие чего происходит интенсивная пролиферация и накопление клеток мононуклеарно-макрофагальной системы в селезенке, печени, почках и других органах Селезенка утрачивает способность перерабатывать погибшие эритроциты, и эту функцию берут на себя дру­гие органы, в клетках которых откладывается большое количество гемосидерина. Исследо­вание пунктатов костного мозга показывает, что основной симптом болезни - анемия - воз­никает вследствие угнетения эритропоэза, а также лизиса эритроцитов, подвергшихся воз­действию вируса и фагоцитированных клетками РЭС. При остром течении болезни эригробластическая группа клеток уменьшается с 40 до 4,6%, а гистиоцитарная группа, клетки которой, обладая фагоцитарной функцией, пожирают эритроциты, увеличивается с 31 да 40%. Считают, что в развитии анемии играет роль снижение деятельности костного мозга.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз на ИНАН ставят комплексно Учитывают эпизоотологические особенности бо­лезни, результаты клинического, гематологического и лабораторного исследований, патологоанатомические и гистологические изменения. Эпизоотологические данные собирают непо­средственно в хозяйстве, учитывая давность и характер болезни, пути заноса инфекции, ди­намику заболеваемости и падежа лошадей за несколько предшествующих лет. Принимают во внимание, что массовые вспышки ИНАН наблюдаются исключительно летом и осенью, а спорадические случаи - в любое время года. Кроме традиционного подсчета эритроцитов, убедительным диагностическим методом является подсчет числа звездчатых лейкоцитов.

При клиническом обследовании учитывают различия в течении болезни, рецидивирующий тип лихорадки при подострой и хронической анемиях, кровоизлияния на слизистых оболочках, исхудание при нормальном аппетите, шаткость зада, отеки, повышенную возбу­димость сердца (аритмия, учащение пульса) Повышенную возбудимость сердца устанавливают функциональной пробой: пробег 50 м, подсчет пульса каждые 5 сек в течение 0,5 мин. Результат от деления первой цифры подсчета на последнюю цифру у больных анемией ло­шадей должен составлять 2,5-3. Гематологическим исследованием обнаруживают лимфоцитоз, анемию (уменьшение числа эритроцитов в 4-8 раз по сравнению с нормой), увеличен­ную СОЭ Убедительным диагностическим тестом является подсчет звездчатых лейкоцитов. Из патоморфологических изменений для острого течения болезни наиболее характерными являются бледность и желтушность слизистых и серозных покровов и подкожной клетчатки, точечные геморрагии в конъюнктиву, слизистую оболочку носа, увеличение селезенки, пе­чени, почек, усиление пролиферации лимфоидных клеток и гистиоцитов в этих органах и отложение гемосидерина в печени при одновременном уменьшении количества его в селе­зенке. Указанные изменения наблюдают в период рецидива болезни. В хронических случаях характерными признаками являются почти полное отсутствие гемосидерина в селезенке и накопление его в других органах, гломерулонефрит, эндо- и миокардит, интенсивная лимфоидно-гистиоцитарная реакция в селезенке, лимфоузлах, печени, почках в сочетании с некродистрофическими изменениями паренхиматозных клеток. Из серологических реакции для диагностики ИНАН вначале была предложена РСК, в которой первоначально использо­вали AT, полученный из селезенки больной лошади, а затем культуральный.

Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют для серологического ис­следования 5-6 мл сыворотки крови лошадей, которую консервируют мертиолятом 1:10000 или путем добавления антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл) и хра­нят при температуре 4-8°С. Сыворотки без консерванта хранят в замороженном состоянии. Для гематологического исследования направляют 10-12 мл. крови, стабилизированной 20%-ным р-ром лимоннокислого натрия. Кровь берут до поения и кормления животного. Дм гистологического исследования берут кусочки печени, селезенки, сердца, легких, лимфоуз­лов и почек от павших или убитых с диагностической целью лошадей. Материал помещают в 10%-ный р-р формалина. Толщина кусочков не должна превышать 2 см. Для постановки биопробы на жеребятах берут по 300-500 мл крови от наиболее подозрительных по заболе­ванию ИНАН лошадей во время подъема температуры.

Индикация и идентификация вируса. Биопроба. В сомнительных случаях для проверки особо ценных лошадей ставят био­пробу на жеребятах. При исследовании сывороток лошадей-продуцентов ставят групповую биопробу. С этой целью из благополучного хозяйства берут 2-х жеребят в возрасте 6-12 мес., 4-кратно, с интервалом 7 дн, их обследуют клинико-гематологически и серологически. За­тем жеребят заражают сывороткой крови или плазмой, полученной от больных лошадей Сыворотку крови и плазму предварительно проверяют на стерильность (на МПА, МПБ и МЛПБ) и безвредность (на 3-х белых мышах, вводя ее подкожно или внутривенно в дозе 1 мл.). Сыворотку вводят жеребятам подкожно или внутривенно в дозе 100-200 мл, дефибринированную кровь - только подкожно в той же дозе. За зараженными животными наблю­дают 90 дн, через каждые 10-15 дн проводят гематологические и серологические (в РДП) исследования. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят ха­рактерных клинических симптомов, рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических и гематологических исследований. Жеребят, давших сомнительные резуль­таты клинико-гематологических и серологических исследований, убивают и исследуют патологоанатомически и гистологически. При положительном результате обнаруживают серозно-геморрагическую инфильтрацию подкожной и межмышечной клетчатки, гиперемию и отек лимфоузлов, зернистую или жировую дистрофию скелетных мышц, миокарда, почек. Селезенка сильно увеличена вследствие кровенаполнения пульпы. Печень гиперемирована, увеличена, с выраженной дольчатостью на разрезе, паренхима имеет мускатный рисунок. Во всех органах появляется реакция ретикулоэндотелиоза. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни, отрицательных результатов се­рологических и гематологических исследований. Групповую биопробу проводят путем за­ражения двух жеребят смесью сыворотки (плазмы) крови 10-15 лошадей-продуцентов. Смесь вводят подкожно по 100-200 мл каждому жеребенку

Гистологические исследования. Приготовленные срезы органов окрашивают гематоксилин-эозином общепринятым методом. Срезы для исследования на гемосидерин окраши­вают по Перлсу. Характер и степень изменений зависят от стадии болезни, количества ре­цидивов, ремиссий и их продолжительности. Наиболее характерные изменения выражены в печени и селезенке. При остром течении болезни в капиллярах печени - скопление гистио­цитов, макрофагов и лимфоидных клеток. В макрофагах и клетках Купфера – гемосидерин. Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии. В селезенке красная пульпа переполнена кровью, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, крове­наполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или несколько выше. В почках и сердце - гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерстиция, слабые пролифераты гистиоцитарных лимфоидных клеток, жировая или зернистая дис­трофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоцитах. Лимфоузлы гиперемированы, с кровоизлияниями. Под плеврой - кровоизлияния.

Гематологические исследования. Включают определение количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ, лейкоцитарной формулы У больных животных отмечается лимфоцитоз, особенно при подостром и хроническом течениях болезни СОЭ резко увели­чена, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). Исследование крови проводят через каж­дые 3 дн. во время приступов лихорадки и не реже 1 раза в 10 дн. в период ремиссий. Коли­чество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева (или в электронном счет­чике) по общепринятой методике. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемометром Сали, полученный результат выражают в процентах. При анализе лейкоцитарной формулы следует учитывать, что у здоровых жеребят в возрасте до 4-6 мес. может иногда наблюдаться повышенный процент лимфоцитов (до 60 %). В начале болезни при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных ИНАН животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной. В качестве дополнительных методов диагностики ИНАН используют исследование костномозгового пунктата в динамике болезни - наиболее характерные изменения появляются во время лихо­радки резко уменьшается количество клеток эритробластической группы и увеличивается количество клеток гистиоцитарно-моноцитарной группы. Во время длительных ремиссий при хроническом течении болезни состояние клеток костного мозга не отличается от таково­го у здоровых лошадей.

Показатели крови здоровых и больных лошадей