 |
Нейротрофические факторы пиявочного секрета
|
|
|
|
Данный аспект проблемы связан с воздействием ССЖ на нервные окончания и нейроны. Впервые эта проблема была поднята нашими исследованиями и история вопроса существенно отличается от того, как она изложена в работе ([1], стр.133).
Остановимся кратко на открытии нейротрофических факторов (НТФ) МП.
Впервые эта идея возникла как следствие результатов лечения детей с диагнозом: детский церебральный паралич (ДЦП) [32], лечение больных с миопатией [33].
В 1995г. 5-ый канал Петербургского телевидения показал программу «Теледоктор» («Российская энциклопедия», Режиссер Тимофеева Г.Н., 11.11.95, ГТРК «Петербург - 5 канал»), в который были показаны документальные кадры лечения больных ДЦП на протяжении 10 месяцев. У больных детей были отмечены значительные положительные изменения по лечению спастического напряжения скелетных мышц. Ребенок, который до лечения мог передвигаться только на «четвереньках», через несколько месяцев после лечения МП мог передвигаться на собственных ногах.
Этот фильм, как научный документ хранится на нашей кафедре и используется в учебном процессе последипломного усовершенствования врачей по курсу «Актуальные проблемы гирудотерапии».
Принципиальные результаты по снижению спастики у детей с ДЦП при лечении МП, у больных, перенесших мозговой инсульт были получены к 1994 г. Вот тогда и возникла идея обратится к д.б.н. Чалисовой Н.И., сотруднице Института физиологии им. И.П. Павлова РАН (Санкт-Петербург) с предложением исследовать возможность наличия у МП нейротрофических факторов, поскольку она владела методикой контроля за ростом нейритов в культивируемых органо-типических эксплантатах спинальных ганглиев куриных эмбрионов.
|
|
|
Будучи организатором IV Конференции Ассоциации гирудологов России (Санкт–Петербург - Зеленогорск, 1994) я предложил ей выступить с докладом «Роль нейротрофических факторов в восстановительных процессах в нервной системе» с предложением использовать органотипическую культуру сенсорных ганглиев для тестирования активности нейротрофических факторов при лечении с помощью МП заболеваний, обусловленных дегенеративными изменениями нервно-мышечных тканей [34].
Нейротрофические факторы – низкомолекулярные белки, которые секретируются тканями-мишенями, участвуют в дифференциации нервных клеток и ответственны за рост их отростков. Нейротрофические факторы играют большую роль не только в процессах эмбрионального развития нервной системы, но и во взрослом организме. Они необходимы для поддержания жизнеспособности нейронов.
Для оценки нейрит-стимулирующего эффекта используется морфометрический метод, позволяющий измерять площадь ганглия вместе с зоной роста, состоящей из нейритов и глиальных элементов, после добавления в питательную среду препаратов, стимулирующих рост нейритов по сравнению с контрольными эксплантатами.
Использование этого метода тестирования активности НТФ для анализа водных экстрактов из головной области лиофильно высушенных МП, из хвостовой области и экстрактов из цельных пиявок позволило обнаружить такую активность только в экстракте из головной области.
Максимальное увеличение нейротрофической активности по сравнению с контролем составило 44% при концентрации белка 400 нг/мл культуральной среды. Прогревание при 100ºС в течение 20 минут лишало экстракт нейротрофической активности [35,45].
Полученные результаты свидетельствовали о нейротрофической активности, обусловленной БАВ, присутствующими в головной области МП, очевидно в секрете ее слюнных желез. Какие компоненты секрета обеспечивают его нейротрофическую активность, необходимо было выяснить, используя доступные индивидуальные биологически активные соединения. Через два года было установлено, что нейротрофический эффект был связан по крайней мере с одним из компонентов ССЖ - с высокоочищенным препаратом дестабилазы-М, но это уже была другая группа исследователей [36].
|
|
|
В дальнейшем группе И.П. Басковой удалось показать, что нейрит-стимулирующий активностью обладает и бделластазин и бделлин В [37].
Заслуживает внимания факт наличия у дестабилазы способности усиливать рост нейритов при исключительно низком ее содержании в культуральной среде (0,01 и 0,05 нг/мл), особенно в сравнении с известными литературными данными, касающимися концентраций ряда нейротрофических факторов, при которых в культуре ткани проявляется их максимальный нейрит-стимулирующий эффект (1, стр.135).
Нейрит-стимулирующее действие дестабилазы, высокоспецифической гидролазы, не является исключительным явлением. Поскольку известно, что жизненно важные функции гидролаз реализуются в процессах развития, репарации и атрофии тканевых структур. В то же время внутриклеточные и внеклеточные белки защищены от нежелательного расщепления протеазами ингибиторами протеолитических ферментов. Не является исключением и нервная система, где формирование, поддержание и элиминирование синапсов регулируется локально экспрессированными протеазами и их ингибиторами, воздействующими на определенные участки синоптической мембраны [38]. В связи с этим важное значение приобретают экзогенные гидролазы-протеазы и ингибиторы протеолитических ферментов.
Нейротрофические факторы, выделяющиеся из иннервируемых тканей-мишеней и необходимые для выживания и дифференцирования нейронов во время эмбриогенеза, проявляют высокую нейрит-стимулирующую активность в культуре ткани.
Известно, что нейротрофический фактор мозгового происхождения (brain-derived neurotrophic factor - BDNF), а также нейротрофины -3,4 стимулируют экспрессию тканевого активатора плазминогена в культуре клеток коры головного мозга [39], и сам активатор плазминогена, протеаза ограниченного спектра действия, направленного на превращение плазминогена в плазмин, проявляет нейрит-стимулирующий эффект [40].
|
|
|
Для выяснения механизма действия ингибитора протеаз – бделлина-ВМБ, была сделана попытка сравнить его нейрит-стимулирующее действие с таковым для фактора роста нервов (ФРН), который усиливает рост и выживание холинэргических нейронов при их развитии и регенерации (38). При их совместном добавлении к культуральной жидкости ФРН не увеличивал индекс площади эксплантатов по сравнению с увеличением этого показателя, вызванным каждым препаратом в отдельности (41), то есть не наблюдалось потенцирующего действия ФРН на нейрит-стимулирующую активность бделлина-ВМБ. На этом основании можно предположить общность механизмов действия этих соединений.
Поскольку известно (38), что действие ФРН осуществляется через специализированные высокоаффинные рецепторы (trk А – рецепторы), возможно, бделлин-ВМБ действует на те же самые рецепторы.
Полученные нам результаты по лечению алалии (неговорения) и дизартрии у детей методом ГТ (42), а также результаты суперпозиционного сканирования мозга совместно с Камыниным Ю.Ф. позволили зафиксировать ускоренное созревание нейронов речедвигательной коры головного мозга у таких детей (неопубликованные данные).
Данные о высокой нейрит-стимулирующий активности компонентов ССЖ объясняют специфическую эффективность ГТ у неврологических больных. Более того, способность ингибиторов протеиназ МП модулировать нейротрофические эффекты обогащает арсенал ингибиторов протеолитических ферментов, которые в настоящее время рассматриваются в качестве перспективных терапевтически препаратов при широком круге нейродегенеративных заболеваний.
Продуцируемые медицинскими пиявками БАВ обеспечивают известные к настоящему времени биологические эффекты:
1 - антитромботическое действие, т.е. блокирует тромбоцитарно-сосудистое и плазменное звенья внутреннего механизма свертывания крови, а также плазменное звено гемостатического процесса на более поздних стадиях его развития и препятствует, таким образом тромбообразованию;
|
|
|
2 - тромболитическое действие. Механизм растворения тромбов таков, что БАВ воздействуют только на сформировавшиеся («старые») фибриновые сгустки, в которых полимеры фибрина «прошиты» изопептидными связями.
Не лишена практических оснований гипотеза, что дестабилазный комплекс адсорбируется и на новообразующихся («молодых») тромбах, стимулируя их прочное закрепление на сосудистой стенке и быструю стабилизацию; и лишь впоследствии начиная плавное растворение сформированного
тромба (8);
3 - гипотензивное действие (нормотензивное) БАВ, обусловленное, в первую очередь, низкомолекулярными веществами простагландиновой природы, впервые обнаруженными в МП;
4 - репаративное воздействие на поврежденную стенку кровеносного сосуда; восстановление атромбогенной поверхности кровеносного русла;
5 - антиатерогенное действие. БАВ активно влияют на процессы обмена липидов, приводя его к нормальным условиям функционирования; снижают уровень холестерина и триглицеридов в крови, обеспечивают регресс атероматозных бляшек;
6 - антигипоксическое действие. Повышение процента выживаемости лабораторных животных в условиях пониженного содержания кислорода (модель гипобарической гипоксии);
7 - иммуномодулирующее действие (иногда неверно обозначается как иммуностимулирующее). Активация защитных функций организма на уровне макрофагального звена, системы комплимента и других уровнях иммунной системы человека и животных;
Впервые мы обращаем внимание и на неизученное до настоящего времени свойство гирудотерапии - аутогемогирудотерапию и предлагаем этот термин для обозначения нового лечебного фактора гирудотерапии.
Органотипическая культура спинальных ганглиев куриного эмбриона.
|
|
|
