 |
Хранение в высушенном состоянии на адсорбентах
|
|
|
|
Этот метод применяют главным образом для актиномицетов, микроскопических грибов и анаэробных бактерий, образующих споры. В качестве адсорбентов используют почву, кварцевый песок, силикагель, вату, фильтровальную бумагу.
Разработанной стандартной техники это способ не имеет. В самом общем виде все сводится к тому, что стерильный адсорбент, помещенный в ампулы, смешивают с густой суспензией клеток и высушивают под вакуумом или при комнатной температуре. Затем ампулы запаивают и хранят при комнатной температуре или в холодильнике. Имеются данные, что у актиномицетов после хранения в почве или в кварцевом песке восстанавливаются некоторые таксономические признаки (окраска воздушного и субстратного мицелия), которые были утрачены в процессе длительного культивирования в лаборатории.
Оценка жизнеспособности микроорганизмов после длительного хранения
Жизнеспособность микроорганизмов после различных сроков хранения определяют путем высева их на богатые питательные среды с последующим подсчетом выросших колоний. Процент выживаемости микроорганизмов определяют по отношению числа сохранившихся клеток к первоначальному числу жизнеспособных клеток (до начала хранения), принятому за 100%.
Питательные среды
Классификация питательных сред
По составу:
1) натуральные содержат продукты растительного либо животного происхождения неопределенного качественного и количественного состава;
2) синтетические содержат только химически чистые соединения в оптимальном количественном соотношении (например, глюкозо-солевая питательная среда).
Натуральные среды – эмпирически подобранные питательные среды природного происхождения, состав которых точно неизвестен (к ним относятся пептоны, приготавливаемые из частично гидролизованного белка, гидролизаты и экстракты растительного и животного происхождения).
|
|
|
Выбор питательной среды зависит в значительной степени от цели эксперимента. Многие исследователи (Герберт) настойчиво высказывались за повсеместное использование синтетических питательных сред. Однако следует признать, что они обладают рядом практических неудобств.
1) Микроорганизмы, выращенные на таких питательных средах, обычно фенотипически отличаются от выращенных на питательных средах естественного происхождения (например, по составу и по скорости деления).
2) Размножение микроорганизмов на таких средах обычно легче подавляется избыточной аэрацией или токсическими веществами; они также более чувствительны к нарушениям баланса между некоторыми составными частями питательной среды, особенно аминокислотами.
3) Многие бактерии нуждаются в большом числе факторов роста, и для некоторых из них до сих пор не найдены искусственные среды, на которых они могли бы размножаться.
Возможно, что все эти неудобства со временем будут преодолены, но пока среды неизвестного состава используются весьма широко, хотя они и вносят в эксперимент неконтролируемые факторы.
По назначению:
1) основные – служат для культивирования большинства микроорганизмов (МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода);
2) специальные – служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах;
3) элективные (избирательные) – служат для выделения определённого вида или группы видов микроорганизмов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов.
Элективные среды обеспечивают преимущественное развитие одного или целой физиологической группы микроорганизмов. Например, для преимущественного выделения грамотрицательных бактерий бывает достаточным добавления в питательную среду трифенилметановых красителей (кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый и т. д.). Для выделения стафилококков в среду может быть добавлен хлористый натрий в концентрации 7,5 %.
|
|
|
К элективным относят среды, содержащие антибиотики, соли, измененный pH, соли желчных кислот и др.;
4) дифференциально-диагностические – служат для идентификации определенных микроорганизмов на основании исследования их физиолого-биохимических особенностей.
Шоколадный агар с факторами роста
Шоколадный агар с добавлением смеси ростовых факторов предназначен для выделения и культивирования прихотливых микроорганизмов, принадлежащих к родам Neisseria, Haemophilus и Streptococcus (S. pneumoniae).
Цетримидный агар
Среда для селективной изоляции и идентификации Pseudomonas aeruginosa.
Среда Эндо
Среда для выделения Escherichia coli. В состав среды входит агар, лактоза (или сахароза) и индикатор конго-красный.
Среда Левина
Среда с эозином и метиленовым синим. Среда предназначена для дифферентации Enterobacteriaceae.
Селективная хромогенная среда для Salmonella
Хромогенная среда для E.coli
Хромогенный агар MМ для сальмонелл
Рост на среде Escherichia coli (зеленые), Salmonella серовара Enteritidis (с черным центром) и Citrobacter freundii (бесцветные)
По консистенции:
1) жидкие;
2) полужидкие;
3) твердые;
4) сыпучие.
Жидкие среды (мясопептонный бульон, сахарный бульон) уплотнитель не содержат,
плотные содержат уплотнитель в концентрации 1-2% (мясопептонный агар),
Полужидкие – в концентрации 0,2-0,7%.
Для получения плотной консистенции к жидкой среде добавляют обычно агар-агар - полисахарид, добываемый из красных морских водорослей, или желатин - вещество белковой природы животного происхождения.
|
|
|
