 |
Технология культивирования клеток м/о при получении препаратов нормофлоры. И т.д.
|
|
|
|
Необходимым условием производства пробиотиков является сохранение стабильности в течение длительного времени. М/о сохраняют жизнеспособность при полной потере воды, при этом обратимо замедляются или прекращаются обменные процессы. Для увеличения сроков жизнеспособности бактерий используют сублимационную сушку в условиях низкой температуры и глубинного вакуума. Укупорку препаратов проводят под вакуумом или в токе инертного газа.
Факторы, влияющие на выживаемость м/о в сухих препаратов эубиотиков при хранении:
· содержание остаточной влаги
· наличие защитных сред
· хранение сухих препаратов в бескислородной атмосфере.
Эубиотики легко разрушаются в кислой среде желудка, поэтому на таблетированные и капсулированные формы наносят ацидорезистентные покрытия или проводят иммобилизацию бактерии на сорбенте.
Общая схема производства пробиотиков.
1. подготовка производства: помещений, оборудования, посуды, персонала, вентиляционной системы.
2. подготовка и стерилизация сред:
· подбор качественного состава в-в
· оценка влияния отдельных компонентов на выход целевого продукта
· количественный подбор компонентов среды
· выбор наиболее дешевых компонентов
3. выращивание маточных и производственных культур. Маточную культуру выращивают из спец.штамма при температуре 370С, используя различные пит. среды. Из маточной культуры выращивают производственную культуру методом глубинного культивирования в реакторах с паровой рубашкой и лопастной мешалкой.
4. розлив жидкого полуфабриката во флаконы на спец. аппаратах или в ампулы с последующей запайкой.
5. сублимационная сушка. Ампулы помещают в морозильные камеры под углом 750. Содержимое замораживается при температуре -400С 18-24 ч.
|
|
|
6. укупорка. Ампулы запаивают, флаконы укупоривают.
7. маркировка, упаковка. Ампулы маркируют и упаковывают в пачки по 10 штук.
8. контроль качества готовой ЛФ.
Ведущее место по численности среди микрофлоры кишечника занимают молочнокислые бактерии. Они относятся к грамположительным истинным бактериям.
Нормальная микрофлора кишечника формирует колонизационную устойчивость организма. Один из главных механизмов защиты от колонизации условно патогенными и патогенными м/о - присутствие достаточного кол-ва полезной имикрофлоры. Представители нормофлоры в кишечнике конкурируют с патогенной микрофлорой за аргинин, аспарагиновую кислоту и серин, а также за область обитания.
В процессе жизнедеятельности м/о образуются органические кислоты, которые снижают рН среды толстой кишки до 5,3-5,8, лизоцим и другие антибиотикоподобные вещества. Снижается хроническое отравление организма продуктами гнилостного распада в кишечнике (фенол, индол, скатол).
Бактериальные протеазы гидролизуют белки и пептиды, которые затем распадаются до аминокислот и пептидных остатков. Метаболизируются азот- и углеродсодержащие соединения, мочевина за счет уреаз. Участие в деградации липидов и их синтезе. Нормофлора принимает участие в рециркуляции желчных кислот и влияет на холестериновый и билирубиновый обмен.
Бифидо- и лактобактерии, бактероиды, эубактерии способствуют всасыванию кальция, витамина Д, железа. Эшерихии, бифидо-, лакто- и эубактерии выполняют витаминообразующую функцию (синтез и всасывание витаминов К, группы В, биотина, никотиновой кислоты), способствуют синтезу незаменимых аминокислот. Метаболиты бифидо- и лактобактерий препятствуют микробному декарбоксилированию гистидина и повышению количества гистамина. Лактобактерии образуют молочную кислоту, продуцируют лизоцим, лизин, ацидофилин. Кишечная палочка способствует синтезу иммуноглобулинов, вырабатывает канцеролитические вещества.
|
|
|
Анаэробы продуцируют БАВы, медиаторы, которые влияют на функции ЖКТ, печени, сердесно-сосудистой системы, кроветворение и обменные процессы.
Нормофлора способна утилизировать не переваренные пищевые субстраты, образуя органические кислоты, аминокислоты, нормализующие обмен в организме.
Положительные функции нормофлоры:
7. колонизационная резистентность.
8. синтетическая (способность продуцировать витамины, гормоны, антибиотики).
9. поддержание высокого уровня содержания лизоцима, секреторных иммуномодулинов, интерферонов.
10. детоксикация экзогенных и эндогенных субстратов и метаболитов.
11. обменная (участие в обмене в-в).
12. пищеварительная (морфокинетическое влияние на слизистые оболочки, абсобцию абиотических компонентов, транзит нутриентов, газовый состав, мышечный тонус кишечника, перистальтику кишечника, эвакуацию кишечного содержимого).
Частная технология препаратов нормофлоры.
Лактобактерин.
Штамм бактерий Lactobacillus plantarum. Растут в атмосфере кислорода, углекислого газа, азота.
Лактобактерин сухой (Lactobacterium siccum) получают по общей схеме.
1. приготовление и стерилизация пит. сред.
а) приготовление гидролизованного молока..
б) приготовление дрожжевого аутолизата.
в) приготовление среды (к гидролизованному молоку добавляют дрожжевой аутолизат, навески магния и кальция сульфата, цитрата аммония, глюкозы).
г) приготовление аутолизата казеина.
д) приготовление казеиново-дрожжевой среды.
е) приготовление защитных сред высушивания (желатин, сахароза, молоко, цитрат натрия и вода).
2. получение маточной культуры. 6 пассажей в пробирках, чашках Петри, флаконах или бутылях в течение 9 суток.
3. выращивание производственной культуры. В реакторах с жидкой пит. средой при 370С в течение 8-12 часов. В 1 мл микробной суспензии производственного штамма должно быть не менее 6 млрд. живых клеток. К полученной микробной суспензии добавляют защитную среду высушивания – сахарно-желатозную
4. розлив лактобактерина в ампулы (флаконы). Доза зависит от концентрации живых микробных клеток.
|
|
|
5. лиофильная сушка. Замораживание в течение 18-24 часов при температуре -400С и угле в 750. Лиофилизация – глубокий вакуум в течение 68-70 часов.
6. ампулы запаивают в атмосфере азота; флаконы укупоривают.
7. контроль качества.
а) описание – кристальная или пористая масса желтовато-белого цвета, кисломолочного запаха и вкуса.
б) подлинность – наличие характерных морфологических, культуральных и биохим. св-в в производственных штаммах лактобацилл.
в) показатель рН – должен составлять 5,5 + 0,5.
г) остаточная влажность – ампулы/флаконы – не более 3,5%, таблетки/капсулы – более 5%.
д) растворимость – сухой препарат должен растворяться в воде (1 мл на 1 дозу препарата), в течение 5 мин образовывать гомогенную взвесь желтовато-бежевого цвета. Проверяется визуально.
е) бактериальная контаминация – бактериоскопически (мазки, окрашенные по Граму) и бактериологически (посев на пит. среды и инкубация).
ж) специфическая активность – по кол-ву жизнеспособных клеток лактобацилл в одной дозе препарата и активность кислотообразования.
з) специфическая безвредность – должен быть безвредным для белых мышей при введении его внутрь в кол-ве одной дозы.
и) определение компонентов стабилизирующей среды высушивания и других в-в, входящих в состав препарата.
8. упаковка, маркировка.
Сухую микробную массу протирают через мет. сито в бутыли с азотом.
Таблеточную массу готовят с добавлением к сухой микробной массе вспомогательных в-в в шаровых мельницах. Определяют кол-во живых лактобактерий и рассчитывают массу таблетки. Таблетирование путем прямого прессования. Влажность воздуха не более 50%. Таблетки фасуют во флаконы. Препарат должен находиться в вакууме, атмосфере азота или стерильного воздуха.
Продолжительность процесса производства в ампулах и таблетках составляет соответственно 42 и 66 суток.
Хранят препарат в сухом, темном месте при 5 + 30С. Срок годности 12 месяцев (если в 1 дозе содержится 4 млрд и более живых лактобацилл) и 6 месяцев (при содержании 2-4 млрд). К концу срока годности должно содержаться 1 млрд живых лактобацилл.
Номенклатура препаратов нормофлоры.
1. Монокомпонентныые пробиотики
а) бифидосодержащие:
· бифидумбактерин
· бифидин
б) лактосодержащие:
· биобактон
в) препараты из апатогенных представителей рода Ваcillus:
· споробактерин
2. Комбинированные и поликомпонентные побиотики.
а) бифилиз – препаратс лизоцимом.
б) биофлор жидкий – с экстрактом сои, овощей, прополиса.
в) иммобилизованные на сорбенте – бифидумбактерин форте.
г) бактисубтил – на основе устойчивых к действию желудочного сока спор бактерий.
|
|
|
