 |
Цели применения серологических реакции
|
|
|
|
Серологическая диагностика – определение неизвестных Ат в сыворотке (или других биологических жидкостях) крови больного с помощью известного Аг (диагностикума):
а) неизвестные Ат – это искомые Ат сыворотки крови людей (больных, переболевших, носителей, вакцинированных);
б) диагностикум – это стандартные препараты, которые получают из чистых культур микроорганизмов определенных видов или их Аг. Микроорганизмы выращивают, затем инактивируют, стандартизируют (количество микробов в единице объема); инактивируют нагреванием, обработкой формалином, спиртом, ультразвуком и т.д. (диагностикум теряет патогенность, но сохраняет Аг свойства).
Серологические реакции виды
Серологические исследования применяют также для определения антигенов различных веществ, групп крови, тканевых антигенов, антигенов опухолей, а также уровня гуморального звена иммунитета. Для выявления иммунных комплексов, образовавшихся при специфическом взаимодействии антиген -антитело, также используют различные серологические реакции. Различают реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный). Перечисленные реакции отличаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.
Классификация
1.Простые (2-х компонентные: Ag + Ig) РА (с корпускулярным антигеном) РП (с растворимым антигеном)
2. Сложные (3-х компонентные): (Ag + Ig + C) – РСК.
3. С использованием метки: РИФ, ИФА, РИА, ИЭМ.
|
|
|
69 Реакции Агглютинации
Антиген – агглютиноген
Антитело – агглютинин
Иммунный комплекс – агглютинат
Этапы (стадии) РА
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ (невидимая) – взаимодействие Аг и АТ, формирование решетки (каркаса)
НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ (видимая) – выпадение решетки (каркаса) в осадок
Внешние проявления:
МЕЛКОДИСПЕРСНАЯ АГГЛЮТИНАЦИЯ – О – агглютинация (иногда видимая только в агглютиноскоп или даже микроскоп – реакция микроагглютинации)
КРУПНОХЛОПЧАТАЯ АГГЛЮТИНАЦИЯ – Н – агглютинация (при агглютинации жгутиконосных бактерий)
Способы постановки:
1. Прямая реакция агглютинации: - пластинчатая (ориентировочная) - объемная (развернутая) 2. Непрямая реакция агглютинации: эритроциты – гемагглютинация (РНГА, РОНГА); частицы латекса - латекс-агглютинация; стафилококки – коагглютинация;
На стекле (пластинчатая, ориентировочная) – чаще используется для идентификации антигена Компоненты (ингредиенты): чистая культура неизвестного микроба и агглютинирующие диагностические сыворотки (поли- и моновалентные)
В пробирке (объемная, развернутая) – чаще используется для обнаружения антител (серодиагностики) и определения их количества (титра); Повторение ее через 5-7 дней позволяет выявить нарастание титра антител у больного человека (метод парных сывороток); Компоненты (ингредиенты): сыворотка больного и диагностикумы.
Реакция гемагглютинации РНГА (РПГА) – цель серодиагностика. Компоненты (ингредиенты): сыворотка больного (неизвестные Ат) и эритроцитарный диагностикум (мелкодисперсные Аг адсорбированы на эритроцитах). РОНГА – цель сероидентификация. Компоненты (ингредиенты): неизвестные Аг (исследуемый материал) и эритроцитарные сыворотки (Ат адсорбированы на эритроцитах). РНГА (РПГА) РНГА (РПГА): внешние проявления отрицательная – «пуговка» положительная – «зонтик»
|
|
|
Реакция преципитации
Сущность осаждение (преципитация) антигена, находящегося в коллоидном состоянии, под воздействием специфических антител в растворе электролита. Основные термины • Преципитоген - антиген • Преципитин – антитело Преципитат – иммунный комплекс (осадок), образующийся в результате РП. Применение 1. диагностика инфекционных заболеваний 2. судебная-медицинская экспертиза определение видовой принадлежности белков – при анализе кровяных пятен, спермы и т.д. 3. санитарная практика выявление фальсификации рыбных и мясных изделий. Цель: сероидентификация. Способы постановки
В пробирке (кольцепреципитация, по Асколи)
В геле (иммунодиффузия)
Простая диффузия (линейная, радиальная по Манчини)
Двойная или встречная иммунодифузия (по Оухтерлони, реакция нейтрализации токсина антитоксином)
Усовершенствованные методы
иммуноэлектрофорез
иммуноблотинг
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: по Асколи В пробирке: высокочувствительная (как всякая РП)
Компоненты (ингредиенты) - последовательные разведения антигена экстрагированные из исследуемого материала – шерсти животного) наслаивают на стандартные разведения диагностической преципитирующей сыворотки; титр РП – максимальное разведение антигена, при котором наблюдается кольцо преципитации.
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: в геле ►преимущество по сравнению с пробирочной - гель, высокоочищенный агар, выполняет функцию локализации преципитата, т.к. он, в отличие от антител и антигенов, не может диффундировать в геле.
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: простая радиальная иммунодиффузия по Манчини
Цель - определение класса и концентрации Ig в сыворотке пациентов (сероидентификация).
Компоненты (ингредиенты) – гель, содержащая антиглобулиновую сыворотку (Ат против Ig человека) и сыворотка пациента (содержащая Ig), которая вносится в лунки. Визуально вокруг лунки с исследуемым материалом образуется преципитат в виде кольца.
Реакция лизиса. Бактркриолиз in viro и in vivo
РЕАКЦИИ ИММУННОГО ЛИЗИСА: Реакция гемолиза (Ag – эритроцит); Реакция бактериолиза (Ag – бактерии); Реакция цитолиза (Ag – клетка). РЕАКЦИЯ ГЕМОЛИЗА Цель: Для определения титра и активности системы комплемента (радиального гемолиза). Как индикатор для оценки РСК. Компоненты (ингредиенты) – Аг (эритроциты барана) + Ат (гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана) + комплемент (сыворотка крови морской свинки). Реакция иммунного прилипания 1 ФАЗА: клетки бактерий + антитела + комплемент активация комплемента C3b 2 ФАЗА: + клетки, имеющие рецепторы к C3b (эритроциты, тромбоциты, макрофаги) их прилипание к бактериальным клеткам
|
|
|
РЕАКЦИЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ подвижные бактерии + антитела + комплемент--> обездвиживание бактерий
БАКТЕРИОЛИЗ
Компоненты:1.Корпускулярный АГ от живых бактерий 2.АТ – бактериолизины
3. Система комплемента
Механизм: Растворение бактерий в присутствии специфических АТ-бактериолизинов и комплемента. Многие виды бактерий не способны к лизису поэтому р-я применяется редко
Методы постановки: Реакция бактериолизаin vitro. Ингредиент: живые бактерии, специфические к ним антитела (иммунная сыворотка), комплемент.
В опытную пробирку вносят взвесь живых бактерий, специфическую иммунную сыворотку и комплемент, в контрольную пробирку-те же бактерии, нормальную сыворотку (без специфических антител) и комплемент. После инкубации в течение 2 часов при 37°С из каждой пробирки делают высевы по 0,1 мл на чашки Петри с мясо-пептонным агаром. Опыт учитывают после суточной инкубации. На чашке с высевом из опытной пробирки колоний должно быть значительно меньше, чем в контроле (или они отсутствуют).
Внешние проявления: Сокращение кол-ва колоний
|
|
|
