 |
Определение “сырого” протеина
|
|
|
|
(С помощью колбы Кьельдаля.)
Определение количества протеина в кормах основано на том, что во всех азотистых органических веществах находится примерно 16% азота.
Поэтому содержание протеина определяют по количеству азота, освобождающегося при разрушении органических веществ корма.
Разрушение ведут нагреванием с концентрированной серной кислотой (уд. вес 1,84);
при этом безазотистые органические вещества обугливаются.
Азотистые органические вещества окисляются до углекислоты и воды с выделением аммиака, который сразу же соединяется с серной кислотой, образуя сернокислый аммоний
2NH3 + H2SO4 = (NH4)2SO4
Затем на сернокислый аммоний действуют крепкой (33-процентной) щелочью, при этом снова выделяется аммиак по реакции
(NH4)2SO4 + 2NaOH «Na2SO4 + 2NH4OH
2NH4OH ® 2NH3 + H2O
Выделяющийся аммиак поглощается децинормальным раствором серной кислоты. Избыток кислоты титруется 0,1 N раствором щелочи. По количеству связанной серной кислоты определяют количество азота в корме, зная, что 1 мл 0,1 N раствора серной кислоты соответствует 0,0014 г азота. Полученный азот умножают на коэффициент 6,25 и находят количество “сырого” протеина в корме.
Ход определения
Записать номер колбы Кьельдаля.
2. В пробирку насыпать 0,5-1 г исследуемого корма и взвесить на аналитических весах.
3. Осторожно перенести навеску корма в колбу Кьельдаля, опустив пробирку глубоко в горло колбы.
4. Пустую пробирку после переноса из неё корма взвесить.
5. По разности массы пробирки с кормом и без него определить массу навески.
6. В колбу Кьельдаля осторожно налить 20 мл концентрированной серной кислоты, аккуратно перемешать, насыпать 0,5-1 г сернокислой меди и 3-5 г сернокислого калия.
|
|
|
7. Колбу с навеской корма в наклонном положении ставят для сжигания в специальном штативе в вытяжной шкаф. Сжигание проводят на слабом огне во избежании потери азота.
8. Сжигание органического вещества производится до полного осветления раствора.
9. После осветления жидкости колбу снять, остудить и осторожно небольшими (20-25мл) порциями в неё прилить 100-150 мл дистиллированной воды, омывая ею стенки колбы. Жидкость приобретает зеленовато-голубоватый цвет (медный купорос поглощает воду, в результате чего восстанавливается голубой цвет).
10. Осторожно перелить содержимое колбы Кьельдаля в колбу для отгонки. Колбу Кьельдаля сполоснуть несколько раз водой, сливая её в отгонную колбу (150-200 мл).
11. Пронумеровать приёмную колбу.
12. В приёмную колбу влить 50 мл 0,1 N раствора серной кислоты и 3-5 капель индикатора — метилоранжа. Затем приёмную колбу подставить под стеклянную трубку аппарата Кьельдаля таким образом, чтобы конец трубки был погружен в раствор.
13. В цилиндр отмерить 80 мл 33-процентного раствора едкого натрия и осторожно по стенке перелить в отгонную колбу, добавить немного пемзы для равномерного кипения.
14. Быстро закрыть колбу пробкой с каплеуловителем.
15. Содержимое колбы хорошо размешать. При этом начинает выделяться аммиак, который попадает в приёмную колбу.
16. Включить нагревательный прибор и начать отгонку.
17. Отгон производить до тех пор, пока красная лакмусовая бумажка, подставленная под стекающую каплю отгона, перестанет синеть. При хорошем кипении отгон длится 30-40 минут.
18. После отгона аммиака конец стеклянной трубки промыть дистиллированной водой и слить в приёмную колбу.
19. Содержимое приёмной колбы оттитровать 0,1 N раствором NaOH до лимонного цвета, (результат записать)
20. По разности между количеством 0,1 N раствора серной кислоты взятой в приёмную колбу (50 мл) и количеством 0,1 N раствора едкого натрия пошедшего на титрование, определить, сколько 0,1 N раствора серной кислоты связалось с аммиаком. Это количество умножить на коэффициент 0,0014 г, тем самым определяется количество граммов азота во взятой навеске корма.
|
|
|
21.Содержание “сырого” протеина в граммах определяют умножением количества азота на коэффициент 6,25.
22. Процентное содержание “сырого” протеина в воздушно-сухом веществе определяют по формуле: % сырого протеина в возд.-сух.вещ.= количество «сырого» протеина, г *100% / масса навески, г
Форма записи
| Показатели | Определения | |
| Номер колбы Кьельдаля | ||
| Масса пробирки с навеской корма, г | ||
| Масса пустой пробирки, г | ||
| Навеска корма, г | ||
| Взято в приёмную колбу 0,1 N раствора серной кислоты | ||
| Пошло на титрование 0,1 N раствора едкого натра | ||
| Связалось 0,1 N раствора серной кислоты с азотом | ||
| Количество азота в навеске, г | ||
| Содержание «сырого» протеина в воздушно-сухом веществе, г | ||
| Содержание «сырого» протеина в воздушно-сухом веществе, % | ||
| Среднее «содержание» сырого протеина в воздушно-сухом веществе, % | ||
| Содержание «сырого» протеина в корме с натуральной влажностью, % | ||
| Содержание сырого протеина в абсолютно-сухом веществе, % |
ОПРЕДЕЛЕНИЕ "СЫРОЙ" КЛЕТЧАТКИ
Метод определения клетчатки состоит в последовательной обработке навески корма сначала растворами серной кислоты и едкой щёлочи, а затем спиртом и эфиром. После воздействия перечисленных растворителей в остатке получают «сырую» клетчатку. «Сырой» её называют потому, что указанные реагенты не полностью удаляют сопутствующие клетчатке вещества: лигнин, гемицеллюлозы, пентозаны, минеральные вещества и др.
Ход определения
1. Пронумеровать химический стакан ёмкостью 300-500 мл.
2. Насыпать в пробирку 2-3 г исследуемого корма и взвесить на аналитических весах.
3. Перенести содержимое пробирки в пронумерованный химический стакан.
4. Взвесить пустую пробирку. По разности масс пробирки с кормом и пустой пробирки найти массу навески.
5. К образцу корма в стакане прилить 100 мл 4% раствора серной кислоты предварительно нагретой до 70-80 С. Отметить на стакане уровень жидкости восковым карандашом.
|
|
|
6. Смесь тщательно перемешать стеклянной палочкой с резиновым наконечником, нагреть на газовой горелке и кипятить 10 минут на медленном огне.
7. После кипячения стакан снять с газовой горелки и долить в него дистиллированной воды до метки.
8. В горячий раствор прибавить 25 мл 30% раствора едкого натра (для нейтрализации кислоты и образования в растворе 4% щёлочи)
9. Содержимое стакана вновь нагреть до кипения и кипятить в течение 10 минут, периодически помешивая, после чего стакан снять с горелки и добавить в него 125-150 мл, горячей дистиллированной воды, дать отстояться осадку.
10. Жидкость из стакана осторожно отсосать вакуумным насосом через воронку с плотным фильтром (капроновая ткань в два слоя). Часть клетчатки, прилипшей к фильтру смыть горячей водой из промывалки обратно в стакан, стараясь не потерять частичек клетчатки.
11. Затем в стакан с клетчаткой приливают горячую воду и, дав осесть клетчатке, снова отсасывают жидкость. Эти операции проделывают трижды, до полного удаления щёлочи (проба на красный лакмус)
12. После последнего отсасывания жидкости с тканевого фильтра тщательно смывают частицы сырой клетчатки обратно в стакан небольшими порциями горячей воды из промывалки с помощью стеклянной палочки с резиновым наконечником.
13. Записать номер бюкса (заранее в него вложить фильтр и высушить в сушильном шкафу при 100-105 С)
14. Взвесить бюкс с фильтром на аналитических весах.
15. Вынуть из бюкса фильтр, поместить его в воронку и содержимое стакана перенести на фильтр. При этом стакан несколько раз промывают горячей водой, чтобы все частички клетчатки перенести на фильтр
16. После стекания воды клетчатку на фильтре промыть 15 мл спирта и 15 мл эфира.
17. Промытый таким образом осадок вместе с фильтром перенести в тот же бюкс, из которого был взят фильтр, после чего сушить в сушильном шкафу при 100-1050С в течение 4 часов, охладить в эксикаторе и взвесить на аналитических весах.
18. Зная общую массу бюкса с фильтром и клетчаткой, а также массу бюкса с фильтром, по разности показателей определяют массу сырой клетчатки в воздушно-сухом веществе.
|
|
|
19. Содержание «сырой» клетчатки в воздушно-сухом веществе корма в процентах определяют по формуле:
% «сырой» клетчатки в в.с. в.= масса “сырой” клетчатки, г * 100
масса навески, г
Форма записи
| Показатели | Определения | |
| Масса пробирки с кормом, г | ||
| Масса пустой пробирки, г | ||
| Масса навески корма, г | ||
| Номер бюкса с фильтром | ||
| Масса бюкса с фильтром, г | ||
| Масса бюкса с фильтром и клетчаткой после высушивания, г | ||
| Масса клетчатки, г | ||
| Содержание клетчатки в воздушно-сухом веществе, % | ||
| Среднее содержание клетчатки в воздушно-сухом веществе, % | ||
| Содержание клетчатки в корме с первоначальной влажностью, % | ||
| Содержание клетчатки в абсолютно сухом веществе, % |
|
|
|
