Задания для самостоятельной работы

Задания для самостоятельной работы

1. В тетрадях для самостоятельной работы (объемом не менее 48 листов) выпишите основные знаменательные даты в истории кафедры гистологии с курсом эмбриологии Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова:

- год основания кафедры;

- где и кем впервые в России началось преподавание гистологии и эмбриологии;

- в каком году и кем было издано первое руководство по гистологии;

- имя российского ученого – автора унитарной теории кроветворения;

- кто из ученых-гистологов кафедры является основоположником эволюционной гистологии;

- современное направление научной деятельности кафедры.

 

Литература

1. Данилов Р.К. Гистология. Эмбриология. Цитология. Учебник для студентов медицинских вузов. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. – С.12-14, 22-27.

2. Гистология, эмбриология, цитология: учебник / Ю.И.Афанасьев, Н.А.Юрина, Е.Ф.Котовский и др.; под ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной. – 6-е изд. перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. – С.17-19, 37-50.

 

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ.

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

Цель за­ня­тия

Знать устройство микроскопа и правила работы с ним. Ознакомиться с методами исследования живых и фиксированных клеток и тканей. Иметь представление об основных этапах приготовления гистологического препарата.

Ра­бо­та с пре­па­ра­та­ми. Ори­ен­ти­ро­воч­ная ос­но­ва дейст­вий

 

Задание 1. В гистологической научной лаборатории ознакомиться с основными этапами изготовления гистологического препарата, которые заключаются в следующем.

1. Взятие материала и его фиксация с помощью различных фиксирующих жидкостей (12% формалин, бихромат калия, различные фиксирующие смеси).

2. Обезвоживание материала в серии спиртов возрастающей крепости (от 70° до 100°).

3. Уплотнение гистологического материала с помощью парафина, целлоидина или некоторых других веществ для облегчения приготовления тонких срезов.

4. Приготовление гистологических срезов с помощью специальных приборов (микротом или ультратом).

5. Монтирование срезов на предметном стекле и их окрашивание гистологическими красителями.

Гистологические красители подразделяются на основные, кислые и нейтральные. Основные красители (гематоксилин, тионин, сафранин) окрашивают базофильные структуры клетки (к ним относится, например, ядро, рибосомы гранулярной эндоплазматической сети, полирибосомы). Кислые красители (эозин, фуксин, ауранция) окрашивают оксифильные структуры клетки (например, содержимое цитоплазмы). Большинство гистологических учебных препаратов окрашено гематоксилином и эозином. При этом ядро окрашивается гематоксилином в сине-фиолетовый цвет, а цитоплазма окрашивается эозином в розовый цвет. Нейтральные красители (например, нейтральный красный) содержат как основный, так и кислый красящие компоненты.

Одним из способов окраски является метод импрегнации срезов, который основан на выявлении тех структур клеток и тканей, которые способны удерживать или восстанавливать соли тяжелых металлов (серебра, осмия, свинца). Метод импрегнации используется, в частности, для выявления нейронов и ряда эндокринных клеток. Отдельную группу составляют так называемые элективные красители. Они избирательно окрашивают определенные структуры в клетках. Например, судан-III окрашивает жировые включения в желтый или оранжевый цвет, муцикармин окрашивает слизь в буро-фиолетовый цвет, орсеин элективно окрашивает эластические структуры в коричнево-кирпичный цвет. Некоторые структуры в клетках обладают свойством метахромазии, т.е. окрашиваются в цвет, который несколько отличается от цвета самого красителя. Например, гранулы базофильных лейкоцитов крови обладают свойством метахромазии. В целом способности клеточных и тканевых структур окрашиваться красителями определенным образом называются тинкториальными свойствами.

6. Для длительного сохранения гистологический препарат следует заключить в прозрачную смолу (кедровый или пихтовый бальзам) и поместить под покровное стекло.

Задание 2. Под руководством преподавателя при­готовить гистологический препарат «Печень млекопитающе­го» (окраска – гематоксилин и эозин).

Задание 3. Получить представление об основных способах документации гистологического препарата: гистологический ри­сунок, гистологическая схема, описание препарата, составление графа логической структуры препарата, микрофотография, электронная микрофотография (см. приложения).

Задание 4. Используя учебный микроскоп (приложение 1) и гистологический пре­парат «Нервные клетки чувствительного (спинномозгового) узла» (окраска - гематоксилин и эозин) (рис. 1), базисные знания по устройству микроскопа и навыки микроскопирования, полученные на кафедре биологии. Рассмотреть препарат вначале при малом, а затем - при большом увеличении. При большом увеличении микроскопа зарисовать один псевдоуниполярный нейрон - клетку округлой формы. На рисунке обозначить ядра, ядрышки, цитоплазму и цитолемму. Уяс­нить, в чем заключается преимущество комплексной окраски сре­зов гематоксилином и эозином перед раздельной окраской одним из красителей.

 

Описание препарата

Чувствительные (спинномозговые) узлы, или спинальные ганглии, представляют собой органы периферической нервной системы, расположенные по ходу задних корешков спинного мозга. Рассматривая препарат при малом уве­личении, обнаруживаем большое количество крупных нервных клеток шаровидной формы, которые часто располагаются в виде скоплений. Детали строения спинномозгового узла будут изучены в курсе частной гистологии. На данном занятии следует обратить внима­ние только на нервные клетки, которые нужно изучить и зарисо­вать при большом увеличении. Необходимо помнить, что отростки нейронов при этой окраске не видны. Ядро нервной клетки спинномозгового узла характеризуется довольно круп­ными размерами, сферической формой, располагается почти в центре клетки. Отсутствие ядра в сечениях некоторых клеток объясня­ется тем, что разрез прошел или над ядром, или под ним. Отметим также, что каждая нервная клетка спинального ганглия окруже­на слоем вспомогательных клеток с хорошо прокрашенными ядрами овальной формы.

ДЕМОНСТРАЦИОННЫЕ ПРЕПАРАТЫ

Препарат 1. «Общая морфология клетки. Клетки печени аксолотля» (окраска гематоксилин и эозин).Аксолотль – половозрелая личинка амбистомы, имеет крупные клетки, что очень удобно для знакомство с животной клеткой. Обратите внимание на округлое ядро, расположенное в центре полигональной клетки и окрашенное гематоксилином в темно-синий цвет.

Препарат 2. «Реакция на фермент сукцинатдегидрогеназу по Гомори» (поперечные срезы волокон скелетной мышцы крысы). При малом увеличении сопоставить интенсивность реакции в различных волокнах (быстрых и медленных) передней большеберцовой мышцы.

Препарат 3. «Метод авторадиографии с введением 3Н-тимидина» (эпителий кожи спины крысы).При большом увеличении определить над ядрами клеток эпителия и соединительной ткани кожи спины треки (черные точки зерен восстановленного серебра), которые являются показателями включения в ядра тимидина, меченного по тритию. Тимидин – азотистое основание, которое используется в ядре клетки при репликации ДНК (синтезе дочерней ДНК на матричной ДНК), происходящей в S-периоде клеточного цикла.

Препарат 4. «Щелочная фосфатаза во всасывающей каемке кишки» (метод Гомори). При большом увеличении во всасывающей каемке (апикальная часть клеток) эпителиоцитов тонкой кишки видны многочисленные мелкие зернистые структуры черного цвета. Это места локализации фермента.

Препарат 5. «Цитохромоксидаза в митохондриях клеток канальцев почки» (обработка по Нахласу). При большом увеличении в местах локализации дыхательного фермента цитохромоксидазы в митохондриях видны гранулы фиолетового цвета.

Препарат 6. «Неорганические включения в клетках (железо в макрофагах селезенки)» (обработка берлинской лазурью по Перлсу). Выявленные с помощью реакции Перлса включения с неорганическим железом окрашены в синий цвет.

Препарат 7. «Комплекс Гольджи в нервных клетках» (а - световая микроскопия, б - трансмиссионная микроскопия, в – конфокальная микроскопия).

Материалы для самоконтроля

1. Современные методы гистологических исследований.

2. Основные этапы приготовления гистологического препарата.

3. Понятие о гистологических красителях.

4. Какие требования предъявляются к гистологическому рисунку?

Контрольные тесты

Методика решения тестов приведена в приложении 4 данного практикума.

 

Вопрос 1. Как называется способность структур окрашиваться в цвет, отличающийся от цвета красителя в растворе?

1. Оксифилия.

2. Нейтрофилия.

3. Метахромазия.

4. Базофилия.

5. Полихроматофилия.

Вопрос 2. Окрашивание гистологического препарата производится с целью:

1. Повысить разрешающую способность микроскопа.

2. Обеспечить сохранность препарата.

3. Обеспечить контрастность гистологических объектов.

4. Зафиксировать препарат.

Вопрос 3. Разновидности электронной микроскопии:

1. Люминесцентная.

2. Ультрафиолетовая.

3. Трансмиссионная (просвечивающая).

4. Сканирующая.

5. Поляризационная.

 

Вопрос 4. Гематоксилин:

1. Является гистологическим красителем.

2. Окрашивает цитоплазму в розовый цвет.

3. Служит для выявления базофильных структур.

4. Окрашивает ядра клеток в сине-фиолетовый цвет.

Учебно-исследовательские задачи

1. В ходе диагностического исследования заболевания печени у пациента получен биопсийный материал. Как быстро приготовить гистологический препарат (срез печени)?

2. Препарат хорошо просматривается при малом увеличении мик­роскопа, но не фокусируется при большом увеличении. Какая ошибка допущена при его микроскопировании?

 

Задания для самостоятельной работы

1. Нарисуйте схему строения микроскопа и схему хода лучей в микроскопе.

2. Проранжируйте (перечислите в правильной последовательности) основные этапы приготовления гистологического препарата: заключение в специальные смолы или бальзам, окрашивание, приготовление срезов, обезвоживание, фиксация, накрыть покровным стеклом, взятие материала для исследования, уплотнение.

Литература

1. Данилов Р.К. Гистология. Эмбриология. Цитология. Учебник для студентов медицинских вузов. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. – С.15-21.

2. Гистология, эмбриология, цитология: учебник / Ю.И.Афанасьев, Н.А.Юрина, Е.Ф.Котовский и др.; под ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной. – 6-е изд. перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. – С.21-36.

 

СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ТКАНЕВЫХ КЛЕТОК. ИНТЕРФАЗНОЕ ЯДРО.
Деление соматических клеток

Цель занятия

Знать строение интерфазного клеточного ядра и его роль в передаче наследственной информации; морфофизиологические изменения в ходе интерфазы, профазы, метафазы, анафазы и телофазы митоза. Уметь объяснить ультраструктуру ядра в связи с его функциональной активностью; диагностировать фазы митоза. Иметь представления о механизмах передачи генетической информации из ядра в цитоплазму, роли различных форм РНК и их участии в синтезе белков цитоплазмы. Иметь представления об атипических митозах, эндорепродукции, полиплоидизации.

Ра­бо­та с пре­па­ра­та­ми. Ори­ен­ти­ро­воч­ная ос­но­ва действий

Задание 1. Препарат (см. рис. 1) «Нервные клетки чувствительного (спинномозгового) узла» (окраска - гематоксилин и эозин). Найти крупные нервные клетки и при большом увеличении обратить внимание на светлые сферические ядра, расположенные в центре клетки. Основная масса гетерохроматина расположена по периферии ядра. Хорошо выявляется интенсивно окрашенное ядрышко. Зарисовать клетку и обозначить: ядро, гетерохроматин, ядрышко, цитоплазму, вспомогательные клетки.

Задание 2. Изучите электронные микрофотографии: а) ядро клетки в интерфазе, б) ядрышко, в) ядерная оболочка. Обратите внимание на особенности субмикроскопического строения этих структур.

Задание 3. Электронная микрофотография ядра. Обратить вни­мание на особенности строения ядерной оболочки. Найти наружную ядерную мембрану и внутреннюю ядерную мембрану, ядерные поры и перинуклеарное пространство. Рассмотреть нуклеоплазму, ядрышко, эухроматин и гетерохроматин. Сделать схематический рисунок и обозначить все вышеперечисленные ультраструктурные компоненты ядра.

Задание 4. Препарат «Митоз в растительных клетках корешка лука» (окраска - железный гематоксилин). Изучить препарат. Найти митотически делящиеся клетки.

Описание препарата

В клетках высших растений митоз протекает сходно с тем, что наблюдается в животных клетках. Удобным объектом для изучения митоза служат быстро растущие части расте­ний, в частности – кончики корня. Отчетливее всего митотически делящиеся клетки видны в участке, расположенном несколько вы­ше кончика корня. Интерфазные клетки прямоугольной формы с четко выраженной двухконтурной оболочкой содержат сферическое ядро с одним или двумя крупными ядрышками, мелкозернистым гетерохроматином. У клеток, находящихся в профазе, хромосомы расположены в виде клубка, ядерная оболочка и ядрышко исчезают. В метафазе хромо­сомы собираются на экваторе клетки, формируя метафазную плас­тинку, или материнскую звезду. Анафаза выявляется по расхожде­нию хроматид к противоположным полюсам клетки. Телофаза характеризуется цитотомией, в формирующихся ядрах дочерних клеток хромосомы располагаются в виде клубка.

Задание 5. Электронная микрофотография митотически делящейся клетки. Рассмотреть электронную микрофотографию и определить фазу митоза, в которой находится эта клетка.

ДЕМОНСТРАЦИОННЫЕ ПРЕПАРАТЫ

 

Препарат «ДНК в ядрах клеток» (методФельгена).При большом увеличении рассмотреть крупные нервные клетки спинномозгового ганглия кошки, а в ядрах - мелкие глыбки ДНК, окрашенные в различные тона красного цвета, расположенные в ядре неравномерно. Цитоплазма и ядрышко остаются неокрашенными.

 

 

Материалы для самоконтроля

1. Ультраструктура и функции интерфазного ядра клетки.

2. Какое строение имеет интерфазная хромосома?

3. Понятие о митотическом цикле и его отличии от жизненного цикла клетки.

4. Митоз и его фазы.

5. Какова роль клеточного центра при митозе?

6. Чем характеризуются обновляющиеся, растущие и стационарные клеточные популяции?

7. Регуляция митотической активности клеток.

8. Эндорепродукция. Атипические митозы.

 

Контрольные тесты

Вопрос 1. Ядрышко образовано:

1. Гранулярным компонентом.

2. Фибриллярным компонентом.

3. Гетерохроматином.

4. Нуклеолеммой.

 

Вопрос 2. В состав интерфазного ядра не входит:

1. Везикулярные тельца.

2. Хромосомы.

3. Нуклеоплазма.

4. Эухроматин.

 

Вопрос 3. Спирализация и конденсация хроматина характерна для:

1. Метафазы.

2. Анафазы.

3. Профазы.

4. Интерфазы.

Вопрос 3. Какие компоненты транспортируются через ядерные поры в цитоплазму?

1. Гетерохроматин.

2. Субъединицы рибосом.

3. Фрагменты ДНК.

4. Эухроматин.

 

Учебно-исследовательские задачи

1. Ядро клетки имеет крупное ядрышко, мало гетерохроматина. С каким функциональным состоянием клетки это связано?

2. В каком периоде жизненного цикла находится каждая из двух тетраплоидных клеток, если одна из них малодифференциро­ванная, а другая - высокодифференцированная?

 

12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: