Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!
МегаЛекции

Бактериологические исследования




 

Бактериологические исследования проводятся культуральными методами с использованием дифференциальных и обогащенных питательных сред с последующей биохимической идентификацией бактерий и серологическим типированием.

Среди паразитарных болезней можно выделить болезни, вызываемые клещами, гельминтами, простейшими и грибами. Данные заболевания относятся к антропозоонозам. Методы обнаружения эктопаразитов включают макроскопический осмотр, прямой стереомикроскопический осмотр, микроскопия соскобов кожи, идентификация обнаруженных паразитов. Методы исследования на наличие эндопаразитов включают полное вскрытие животного, макроскопический осмотр вскрытых органов и их содержимого, микроскопию нативных препаратов, метод декантирования, флотации, метод приготовления постоянно окрашенных препаратов и их микроскопию, идентификацию паразитов. С появлением полимеразной цепной реакцией (ПЦР) отпала необходимость в выделении возбудителя и очистке его ДНК – для анализа можно использовать очень небольшое количество неочищенного биологического материала хозяина. Преимущества и недостатки основных методов диагностики, используемых в современной клинической практике, приведены выше (Таблица 2).

 

Генетический мониторинг

 

Лабораторных животных используют для проведения исследований в области онкологии, токсикологии, вирусологии, иммунологии, трансплантологии, физиологии, сравнительной генетики и многих других областях биологии и экспериментальной медицины. Очевидно, что для решения таких разнохарактерных задач, необходимо иметь животных с определенными биологическими особенностями – для каждой задачи своими. Выведение инбредных линий позволило получить таких животных. Основным достоинством инбредной линии является то, что все животные внутри этой линии гомозиготны и однородны по генотипу. Использование инбредных животных в эксперименте позволяет получать воспроизводимые результаты и повышает эффективность и надежность биологических исследований.

Генетическая однородность животных в пределах одной инбредной линии поддерживается путем применения специальной методики разведения таких линий. Но, даже при тщательном соблюдении всех правил, при разведении инбредных животных существует опасность нарушения гомозиготности. Причиной этого могут быть спонтанные мутации или случайные скрещивания (генетическая контаминация). И если мутации приводят к образованию новых линий или сублинейной дивергенции, то случайное скрещивание ведет к необратимой потере гомозиготности, то есть к потере инбредного статуса и соответствующих фенотипических качеств каждого отдельно взятого животного. Опасность генетической контаминации особенно велика, когда в одном помещении содержатся несколько линий с одинаковой окраской шерсти.

Эффективным инструментом контроля генетической однородности животных инбредных линий являются ДНК-маркеры, основанные на методе полимеразной цепной реакции. Основными преимуществами таких маркеров является их высокая степень диспергированности по геному, независимость от возраста и физиологического состояния животного, а также простота, надежность и воспроизводимость лабораторных манипуляций, необходимых для выявления таких маркеров. При амплификации геномной ДНК мышей разных линий с определенными праймерами образуется уникальный для каждой линии электрофоретический спектр продуктов амплификации, характеризующий геномную конституцию. Эти данные можно использовать для мониторинга генетической стандартизации инбредных линий. Микробиологический статус лабораторных животных необходимо строго контролировать. В настоящее время растет количество инфекционных агентов, которые можно диагностировать с помощью ПЦР, в том числе вирусы, бактерии, простейшие микроорганизмы.

Последовательность генома мыши была опубликована в декабре 2002 г. Это имеет большое значение, т.к. геном мыши составляет такое же число генов, как и геном человека, причем 99% этих генов, по-видимому, идентичны, а 96% расположены в том же порядке. Это значит, что гены болезней, идентифицированные у мыши, могут быть перенесены на генную карту человека. Можно провести экспериментальные скрещивания между мышами с различными признаками, а затем очень быстро начать изучение полученного потомства. Можно получить мутантных мышей с определенными генными дефектами, фенотип которых можно потом изучать.

За последние годы было получено большое количество мышей – мутантов, у которых мутации, вызывающие потерю или приобретение какой-либо функции, находились в специфических генах, представляющих интерес с точки зрения медицины. Эти так называемые «нокаут» – или «нокин» – мутанты были сконструированы методами генной инженерии. В результате мутации инактивируется один единственный ген. Так были созданы многие полезные модели моногенных болезней, включая синдром Леш-Нихана, кистозный фиброз, b-талассемию и синдром слабой Х-хромосомы.

В других случаях с использованием антисмысловой РНК и аналогичных подходов был достигнут эффект утраты функции генов. Модель диабета была получена путем специфичной экспрессии рибозима, направленного против мРНК глюкокиназы в b-клетках поджелудочной железы мыши.

Болезнями, вызываемые доминантными мутациями, приводящими к приобретению функции, могут быть моделированы просто переносом гена с эквивалентной мутацией в геном мыши с помощью обычных технологий переноса генов. Например, мышиные модели болезни Альцгеймера были получены суперэкспрессией гена белка – предшественника амилоида, а модель синдрома Вернера (преждевременного старения) – путем экспрессии доминантно-негативного мутанта гена WRN. Одним из первых примеров моделирования болезни, связанной с приобретением функции, – экспрессия в мышах мутантной формы прионного белка, моделирующая нейрогенеративный синдром Герштмана – Штресслера – Шейнкера (GSS).

 

Поделиться:





Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...