 |
Биобезопасность при работе с лабораторными животными
|
|
|
|
Содержание лабораторных животных в питомниках и ЭБК создает потенциальную возможность взаимного инфицирования человека и животных (антропозоонозы), а также перекрестного инфицирования животных, во избежание чего необходимо строгое соблюдение правил личной гигиены работников.
Сотрудники, работающие с лабораторными животными, должны ежегодно проходить медицинское обследование по правилам, действующим для пищевой промышленности, носители патогенной для животных флоры, включая антропозоонозы, как и больные люди, к работе с животными не допускаются.
Рекомендуется проводить раз в 3 года медицинское обследование персонала, сходное с проводимым при приеме на работу, включающее сдачу образцов сыворотки.
Персонал питомника и ЭБК должен быть обеспечен требуемым количеством спецодежды, санитарная одежда должна быть персонально маркирована. Ее количество на одного работника «чистой» зоны в питомниках и ЭБК барьерного типа должно позволять стирку не реже, чем через 1 день и ежедневное автоклавирование. Комплект спецодежды для персонала предбарьерной (конвенциональной) зоны имеет тот же набор одежды, но в количествах, обеспечивающих возможность стирки не реже двух раз в неделю. Необходим утвержденный обязательный перечень спецодежды для работников «чистой» и «грязной» зон. Необходимый перечень спецодежды, а также комплектов первой помощи приведены в Руководстве по лабораторным животным и альтернативным моделям.[2]
Вход персонала в «чистую» зону помещения барьерного типа производится через санпропускник, работник снимает одежду, кольца, цепочки, серьги и др. и оставляет их в шкафу «грязной» раздевалки санпропускника, тщательно принимает душ, используя мыло, мочалку, банную щетку, вытирается досуха полотенцем и одевается в полный комплект стерильной одежды. Очки протираются дезраствором. В течение рабочего дня работник из чистой зоны не выходит. В случае экстренного выхода процедура входа в «чистую» зону через санпропускник полностью повторяется заново. Таким же образом входят в чистую зону сотрудники, выполняющие эксперимент на животных и при необходимости технические работники. Рабочий инструмент подвергается автоклавированию или дезинфекции и проводится через шлюзы.
|
|
|
Ответственность персонала
Работа с лабораторными животными требует соблюдения норм биобезопасности, так как существует опасность инфицирования человека болезнетворными бактериями и микроорганизмами. Человек может являться носителем микробов, способных передаваться животным.
На сотрудников возлагаются определенные обязанности по охране труда и технике безопасности, определяемые Правилами внутреннего трудового распорядка, с которыми сотрудники знакомятся при поступлении на работу. Сотрудник должен ознакомиться с инструкциями по охране труда и технике безопасности, стандартными операционными процедурами (СОП), выполнять правила безопасности и информировать руководителя и службу охраны труда о возникновении аварийной ситуации и случаях производственного травматизма, а также о не соблюдении правил техники безопасности другими сотрудниками.
В обязанность Руководителя лаборатории входит обеспечение информированности персонала по всем вопросам безопасности, поддержание связи со службой охраны труда и техники безопасности, принятие мер к выполнению рекомендаций данной службы.
Основные принципы проведения экспериментов
Проведение экспериментов на лабораторных животных должно соответствовать общемировым принципам гуманного обращения с животными, тщательно планироваться, результаты эксперимента должны тщательно фиксироваться и храниться.
|
|
|
Планирование эксперимента
Выбор животных. Исследователь должен быть уверен, что выбранные животные наилучшим образом соответствуют целям эксперимента. Необходимо учитывать генетические характеристики, отсутствие болезней, факторы содержания и кормления, а также другие факторы, способные оказать влияние на результаты эксперимента. После выбора биологического вида, необходимо убедиться, что животных достаточно для проведения эксперимента. При проведении эксперимента животные не должны испытывать боли и страданий, поэтому после отбора соответствующих видов и экземпляров животных для эксперимента, необходимо обратить внимание на все аспекты, включая поведенческие характеристики животных.
Стандартные операционные процедуры (СОП). Все действия и манипуляции как рутинные так и в рамках проведения исследования должны производится в соответствии со стандартными операционными процедурами организации (СОП). Конкретные примеры СОПов приведены в Руководстве по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских исследованиях[3]. Общие правила при составлении СОПов следующие. СОПы организации должны разрабатываться, храниться, распространяться и обновляться надлежащим образом в соответствии с принятыми стандартами организации.
Необходимый перечень СОПов при проведении доклинического исследования должен включать следующие позиции.
─ Животные: транспортировка, прием, идентификация, рандомизация, маркировка, обращение, взятие проб, наблюдение, эвтаназия, обращение с мертвыми животными.
─ Приборы: эксплуатация, техобслуживание, калибровка, очистка, допуск в эксплуатацию.
─ Реактивы: приготовление, маркировка, хранение, учет.
─ Записи: сбор данных, обработка данных, подготовка отчетов, архивирование.
─ Тест-система: подготовка помещений, условия окружающей среды, прием, передача материалов, размещение, установление характеристик, идентификация, уход, наблюдение, уничтожение.
─ Образцы: сбор, идентификация, обращение, вскрытие, гистопатология.
|
|
|
─ Лабораторные испытания: методы, валидация.
─ Управление и организация: система документооборота, обучение персонала,. аудит и инспекции, архивирование.
─ Компьютерные системы: проверка, эксплуатация, безопасность, резервирование, валидация.
Мониторинг. Ежедневно необходимо осуществлять наблюдение за здоровьем и поведением животных. Должны соблюдаться правила биобезопасности при работе с животными.
Записи. Исследователь должен ежедневно вести дневник экспериментальной работы, включающий детальное описание рутинных ежедневных процедур, условий окружающей среды и других факторов, не относящих к эксперименту, но которые могут влиять на результаты. Записи должны обеспечить возможность статистической обработки результатов эксперимента.
Консультации. При необходимости должны проводиться консультации с участием других научных сотрудников, ветеринаров, специалистов по лабораторным или диким животным. Участие ветврача необходимо в следующих случаях:
– использование транквилизаторов, аналгетиков и анестезии;
– премедикация, хирургия и после хирургическая помощь;
– использование паралитиков с анальгезией;
– длительное использование транквилизаторов, аналгетиков и анестезии.
Контрольный лист. После завершения планирования эксперимента исследователь должен перепроверить протокол для адекватного отражения следующих вопросов:
– Отвечает ли проект этическим и научным принципам?
– Могут ли быть достигнуты поставленные цели без использования животных?
– Есть ли какие-либо еще эксперименты, которые могут быть проведены параллельно для снижения количества используемых животных?
– Все ли средства и компетентный персонал имеются в наличии?
– Весь ли персонал оповещен о проведении эксперимента?
– Отобраны ли наиболее подходящие виды животных?
– Является ли подходящим биологический статус животных (генетический, микробиологический статус, способ кормления, общее состояние здоровья) для данного эксперимента?
– Подходят ли внешние условия (включая тип клеток, шум, освещение, температуру, влажность, вентиляцию, плотность содержания и социальную структуру)?
|
|
|
– Будут ли получены статистически достоверные результаты с минимальным количеством используемых животных?
– Если эксперимент связан с болью и дистрессом, то могут ли они быть минимизированы?
– Весь ли персонал обладает необходимой квалификацией для проведения манипуляций?
– Участвуют ли в эксперименте студенты и проинструктированы ли они?
– Какие мероприятия должны быть проведены для мониторирования состояния животных и их реакциям на манипуляции?
– Если подобные эксперименты уже проводились, то зачем проводить данный эксперимент?
– Если животные используются повторно, то, как минимизировать кумулятивный эффект?
– Могут ли быть использованы какие-либо другие методы без животных для получения аналогичных результатов?
Средства диагностики
Клиническая лаборатория. Исследования по клинической биохимии и гематологии проводятся согласно протоколу конкретного исследования, и не используются для диагностики заболеваний в программе мониторинга здоровья.
Некропсия и гистопатология. Патоморфологические исследования проводятся для диагностики патологических изменений органов и тканей животных, находившихся в конкретных исследованиях, где они запланированы в протоколе. При выявлении патоморфологических изменений органов контрольных животных исследователь сообщает результаты исследований ветеринарному врачу лаборатории.
Мониторинг здоровья животных проводится следующими методами:
– серологические исследования на антитела к вирусам – методами ELISA и IFA;
– микробиология взятых при вскрытии животных – методами ПЦР и рутинными культуральными исследованиями;
– паразитология – микроскопическое исследование на наличие экзо- и эндопаразитов, патоморфологические исследования.
Проведение эксперимента
Ограничение боли и страданий. Боль и дистресс у животных не могут быть оценены теми же методами, что у человека. Поэтому решение о самочувствии животных принимаются исследователем, исходя из предположения об их отсутствии. Необходимо предпринимать следующие меры:
– использование наиболее подходящих и гуманных методов;
– использование всех технических навыков и компетентного персонала;
– использование анальгезии;
– адекватное мониторирование появления боли и дистресса;
– составление четкого плана для устранения нежелательных последствий от манипуляций;
– использование незамедлительных мер для предотвращения боли и дистресса;
|
|
|
– использование анестезии, анальгезии и транквилизаторов, подходящих для выбранного вида животных и целей эксперимента;
– разработка плана эксперимента, снижающего боль и дистресс;
– проведение эксперимента в наиболее сжатые сроки;
– использование подходящих методов эвтаназии.
Использование общей или местной анестезии, анальгезии или транквилизаторов должно соответствовать виду животных, а также критериям, принятым в медицине, ветеринарии или практике лабораторного животноводства.
Эксперименты, результаты которых могут быть искажены, могут быть проведены без анестезии. Дистресса в ряде случаев можно избежать без медикаментозного вмешательства. Например, за счет хорошей адаптации животных к внешним условиям до момента начала эксперимента.
Мониторинг животных во время и после эксперимента должен быть постоянным и адекватным боли и дистрессу. Если боль или дистресс во время эксперимента становятся нестерпимыми, то необходимо немедленно оказать необходимую помощь. Если исследователь не может оказать помощь самостоятельно, то необходимо немедленно вызвать ветврача.
Если в процессе эксперимента произошла незапланированная гибель животного, об этом необходимо оповестить ветврача и отразить это событие в протоколе эксперимента.
Исследователь должен знать, каким образом животное, участвующее в эксперименте, сигнализирует о боли и дистрессе. Любые изменения в сне, кормлении, поении, почесывании, поведении должны быть описаны, оценены и учтены в будущем.
Мониторинг состояния животного. Необходимо постоянно наблюдать, не появилась ли острая боль или дистресс у животных. Это может выражаться следующим образом:
агрессивное и/или ненормальное поведение (некоторое виды становятся слишком тихими);
– ненормальная стойка или движение;
– ненормальные звуки;
– изменение сердечно-сосудистой и/или респираторной функций;
– ненормальный аппетит;
– быстрое снижение веса;
– снижение температуры тела;
– рвота; ненормальная дефекация или мочеиспускание.
Точки окончания эксперимента должны быть определены исследователем заранее. Смерть не должна изначально планироваться как точка окончания эксперимента. В качестве точек окончания эксперимента обычно принимают:
– если потери веса от первоначального превышают 20%;
– если произошла потеря в весе более чем 10% за 24 часа;
– если рост опухоли более чем на 10% превышает вес животного;
– если развился абсцесс;
– если температуры тела резко упала;
– если животное само себя покалечило;
– если животное не способно самостоятельно есть или вести нормальный образ жизни.
Все животные, отвечающие таким требованиям, должны быть подвергнуты эвтаназии, для избавления от боли и страданий.
Повторное использование животных в эксперименте. Обычно животных используют только в одном эксперименте. Однако в некоторых случаях можно повторно использовать животных, чтобы снизить общее количество животных в проекте и оградить от боли и страданий других животных. В этих случаях животных используют в процедурах, не связанных с болью и страданиями, или процедурах с небольшим биологическим стрессом, например изучение корма со взятием крови или неинвазивных процедурах. От одного эксперимента до следующего должно пройти достаточное количество времени для восстановления животного.
Длительность эксперимента ограничена целью исследования и должна быть максимально краткой, если связана с болью и страданиями животных.
|
|
|
