 |
47. Реакции лизиса (бактериолиза и гемолиза).
|
|
|
|
47. Реакции лизиса (бактериолиза и гемолиза).
Для постановки реакции лизиса и реакции связывания комплемента (РСК) используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента термолабильна и полностью утрачивается при прогревании сыворотки в течение 30 мин при 56°С. При адсорбции комплемента на комплексе антиген — антитело его действие проявляется в реакции лизиса антигена, если это клетки, или не сопровождается никакими видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учета результатов данной реакции РСК вводят вспомогательную (индикаторную) гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика, полученной путем его иммунизации упомянутыми эритроцитами. Положительная РСК характеризуется задержкой гемолиза вследствие адсорбции комплемента системой антиген — антитело (рис. 60). Отрицательная РСК характеризуется наличием гемолиза, поскольку свободный комплемент связывается с системой эритроциты барана — гемолитическая сыворотка кролика. РСК обладает высокой чувствительностью й специфичностью, что позволяет использовать ее для серодиагностики многих заболеваний, а также для выявления антигенов в крови больного. Кроме того, ее применяют для идентификации бактерий, вирусов и других антигенов.
48. Реакция связывания комплемента.
Реакция связ-ния комплемента
Сущность РСК в том, что если в сыворотке, полученной от больного животного, есть АТ, то они со специфическими АГ могут образовать комплекс, связывая комплемент, и гемолиза не будет, реакя «+»
|
|
|
Компоненты:
1. Сыворотки – исследуемая, позитивная и нормальная – в разведении 1: 5 или 1: 10, инактивные.
2. Антиген в разведении согласно титру.
3. Гемолизин (гемолитическая сыворотка).
4. Комплемент.
5. Эритроциты барана.
6. Физиологический раствор.
Этапы постановки РСК:
1. разведение и титрование гемолизина
2. титрование комплемента в гем. и бакт. системе.
3. проведение основной реакции.
Главный опыт РСК
Комплимент+сыворотка больного+антиген
+
Гемолизин+эритроциты барана= гемолиза нет, реакция «+», животное больное
Оценка реакции
++++ полное осаждение, нет гемолиза
+++ жидкость над осадком желтовата
+ резко выражен гемолиз – реакция «-»
Стандартная схема постановки РСК предусматривает проведение первой фазы —соединение антигена, испытуемой сыворотки и комплемента при 37°С в течение 30 мин. При постановке РСК на холоду эту фазу проводят при 0—4°С в течение 18—20 ч, что повышает чувствительность реакции.
Стандартная схема постановки РСК предусматривает проведение первой фазы —соединение антигена, испытуемой сыворотки и комплемента при 37°С в течение 30 мин. При постановке РСК на холоду эту фазу проводят при 0—4°С в течение 18—20 ч, что повышает чувствительность реакции.
После добавления в каждую пробирку по 0, 4 мл гемолитической системы пробирки встряхивают и выдерживают 20—30 мин при 37°С. Результаты опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках (см. табл. 19): реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жвдкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной—при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая кровь»). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне.
49. Практическое приложение учения об иммунитете (серодиагностика, серотерапия, вакцино- профилактика).
|
|
|
Серодиагностика (от лат. serum — сыворотка и диагностика), метод распознавания заболеваний человека, животных и растений, основанный на способности антител сыворотки крови специфически реагировать с соответствующими антигенами. В медицине применяется для диагностики, в том числе экспресс-методами (иммунолюминесценция), инфекционных и некоторых неинфекционных заболеваний. К С. относятся также определение антигенов в биологических жидкостях (крови, моче и т. п. ) и тканях при помощи реакций связывания комплемента, торможения пассивной гемагглютинации и т. п., определение вида бактерий и вирусов, выделенных от больных, и установление видовой принадлежности белков и групп крови человека при помощи специфических сывороток. Особая разновидность С. — диагностика заболеваний путём регистрации характерных изменений сыворотки крови при воздействии на нее определенными неспецифическими реактивами (например, осадочные реакции с липидами при сифилисе, желатинизация сыворотки под воздействием формальдегида при лейшманиозе и т. п. ). См. также Серология, Иммунодиагностика.
В ветеринарии С. применяется для массовой диагностики инфекционных болезней животных. Позволяет диагностировать болезнь до появления клинических признаков. В зависимости от исследуемого материала и предполагаемого заболевания применяют реакции агглютинации, преципитации, связывания комплемента и др.; часто комбинируют с аллергическими реакциями.
Серотерапия (от лат. serum — сыворотка и терапия), метод лечения заболеваний человека и животных (преимущественно инфекционных) при помощи иммунных сывороток. Лечебный эффект основан на явлении пассивного иммунитета — обезвреживании микробов (токсинов) антителами (антитоксинами), содержащимися в сыворотках, которые получают путём гипериммунизации животных (главным образом лошадей). Для С. применяют также очищенные и концентрированные сыворотки — гамма-глобулины; гетерогенные (полученные из сывороток иммунизированных животных) и гомологичные (полученные из сывороток иммунизированных или переболевших людей). Сыворотки иммунные применяют при лечении дифтерии (преимущественно в начальной стадии болезни), ботулизма, при укусах ядовитых змей; гамма-глобулины — при лечении гриппа, сибирской язвы, столбняка, оспы, клещевого энцефалита, лептоспироза, стафилококковых инфекций (особенно вызванных антибиотикоустойчивыми формами микробов) и других заболеваний. Для предупреждения осложнений С. (анафилактический шок, сывороточная болезнь) сыворотки и гетерогенные гамма-глобулины вводят по специальной методике с предварительной кожной пробой. В ветеринарной практике иммунные сыворотки, в том числе гамма-глобулины, применяют при лечении сибирской язвы, геморрагической септицемии крупного рогатого скота, овец и свиней, анаэробной дизентерии ягнят, рожи свиней и т. п.
|
|
|
Вакцинопрофилактика
Эффект иммунологической памяти может быть достигнут при введении в организм т. н. ослабленных микробов, родственных микробов или их отдельных компонентов.
Вакцинами называются препараты, предназначенные для создания искусственного активного иммунитета. Некоторые вакцины применяют для лечения инфекционных заболеваний. Вакцины делят на живые и убитые, корпускулярные и химические. К вакцинным препаратам относятся также анатоксины.
Живые вакцины готовят из микроорганизмов, обладающих стойко сниженной вирулентностью, но сохранивших иммуногенные свойства. Убитые (температурой или действием химических веществ) корпускулярные вакцины содержат инактивированные микроорганизмы. Химические вакцины готовят из антигенов, экстрагированных из бактериальных клеток химическими методами. Анатоксины готовят из экзотоксинов, обезвреженных формалином.
Вакцины выпускают в жидком и сухом виде. Сухие вакцины состоят из микроорганизмов, высушенных методом лиофилизации.
В качестве вакцин используются антигены разного происхождения, это могут быть живые и убитые бактерии, вирусы, анатоксины, а также антигены, полученные с помощью генной инженерии и синтетические.
От состава вакцин во многом зависят их иммунобиологические свойства, способность индуцировать специфический иммунный ответ. Однако некоторые составные части вакцин могут вызвать и нежелательные реакции, что следует учитывать при проведении иммунизации.
|
|
|
Существующее многообразие вакцин можно подразделить на две основные группы: на живые и убитые (инактивированные) вакцины. В свою очередь какждая из этих групп может быть разделена на подгруппы
1. Живые вакцины - из аттенуированных штаммов возбудителя (штаммы с ослабленной патогенностью).
2. Убитые вакцины
- Молекулярные, полученные путем:
а) биологического синтеза;
б) химического синтеза.
- Корпускулярные:
а) из цельных микробов;
б) из субклеточных надмолекулярных структур.
В последние годы созданы синтетические молекулярные вакцины, а так же плазмидные (генные) вакцины.
Постановка вопроса о предпочтительном выборе либо живых, либо убитых вакцин нам кажется неоправданной, так как в каждом конкретном случае эти принципиально разные препараты имеют свои преимущества и свои недостатки.
Традиционные вакцины
а) инактивированные
Инактивированные вакцины получают путем воздействия на микроорганизмы химическим путем или нагреванием. Такие вакцины являются достаточно стабильными и безопасными, так как не могут вызвать реверсию вирулентности. Они часто не трубуют хранения на холоде, что удобно в практическом использовании. Однако у этих вакцин имеется и ряд недостатков, в частности, они стимулируют более слабый иммунный ответ и требуют применения нескольких доз (бустерные иммунизации).
б) живые аттенуированнные
Хотя живые вакцины требуют специальных условий хранения, они продуцируют достаточно эффективный клеточный и гуморальный иммунитет и обычно требуют лишь одно бустерное введение. Большинство живых вакцин вводится парентерально (за исключением полиомиелитной вакцины).
На фоне преимуществ живых вакцин имеется и одно предостережение, а именно: возможность реверсии вирулентных форм, что может стать причиной заболевания вакцинируемого. По этой причине живые вакцины должны быть тщательно протестированы. Пациенты с иммунодефицитами (получающие иммуносупрессивную терапию, при СПИДе и опухолях) не должны получать такие вакцины.
в) анатоксины
Многие микроорганизмы, вызывающие заболевания у человека, опасны тем, что выделяют экзотоксины, которые являются основными патогенетическими факторами заболевания (например, дифтерия, столбник). Анатоксины, используемые в качестве вакцин, индуцируют специфический иммунный ответ. Для получения вакцин токсины чаще всего обезвреживают с помощью формалина.
|
|
|
