 |
69. Возбудитель паратуберкулеза. Морфология, культивирование, биохимические свойства. Устойчивость во внешней среде. Патогенез. Микробиологическая диагностика. Иммунитет.
|
|
|
|
66. Возбудитель листериоза. Морфология, культивирование, биохимические свойства. Факто ры патогенности. Антигенная структура. Устойчивость к низкой температуре и другим факторам. Восприимчивость сельскохозяйственных животных. Патогенез. Микробиологи ческая диагностика. Иммунитет. Биопрепараты.
Листериоз – инфекционная болезнь, характеризующаяся у животных поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами и маститами.
Классификация возбудителя:
Род: Listeria
Вид: L. mоnоcytogenes
Восприимчивые животные:
все виды сельскохозяйственных животных, включая птиц; болеет человек.
Патогенез и факторы вирулентности:
заражение происходит алиментарным путем;
возбудитель распространяется гематогенным и лимфогенным путями, вызывая дегенеративные изменения в паренхиматозных органах, поражает нервную и половую системы.
Листериоз (Listeriosis) — инфекционное заболевание животных и человека, характеризующееся септическими явлениями, поражением центральной нервной системы и генитального аппарата. Болезнь регистрируют в большинстве стран мира у разных домашних и диких животных. Наиболее часто болеют овцы.
Возбудитель (Listeria monocytogenes) — полиморфная грамположительная подвижная палочка с закругленными концами. Спор и капсул не образует, длина ее 0, 6—22 мкм, ширина 0, 3—0, 5 мкм. Встречаются кокковидные, ововидные и нитчатые формы. Известны и фильтрующиеся формы листерий. Факультативные аэробы растут на обычных питательных средах (оптимум рН 7, 0—7, 4) и в широком диапазоне температур от минус 1 до плюс 46, 5°С, оптимальная температура роста 36—38 °С.
Свойство листерий размножаться при 4°С используют при выделении из загрязненного материала. Молоко не свертывают. Сбраживают с образованием кислоты без газа глюкозу, рамнозу, салицил, сахарозу, лактозу, мальтозу, сорбит, маннозу. Не образуют индол и сероводород. Выделяют каталазу и обладают гемолитической и лецитиназной активностью. У листерий сложная антигенная структура: известно 15 соматических термостабильных О-антигенов (I-XV) и 4 жгутиковых термолабильных Н-антигена (А, В, С, D).
|
|
|
В зависимости от сочетания антигенных факторов листерий делят на 5 основных серотипов, причем 1, 2 и 3 — составляют первую, а 4 и 5 — вторую серогруппы.
Листерий отличаются высокой устойчивостью в окружающей среде. В почве, навозе, прудовой воде они сохраняют жизнеспособность до года, в сене — до 20 дн., в мясо-костной муке — до 4 мес, в комбикорме — до 7 мес, в трупах грызунов — до 4 мес. Основным местом обитания листерии считают почву, богатую гумусом, и относят листериоз к сапрозоонозам. Они могут размножаться в поверхностных слоях силосной массы. Листерии чувствительны к ряду антибиотиков: пенициллину, стрептомицину, хлорамфениколу, эритромицину, ампициллину и сульфаниламидным препаратам.
Эпизоотологические данные. Источник листерии — больные животные и листерионосители, выделяющие их в окружающую среду с абортированными плодами и истечениями из половых путей, носа., с фекалиями, мочой и молоком. Здоровые животные, как правило, заражаются алиментарным путем при поедании контаминированного листериями корма, возможно и аэрогенное заражение при попадании возбудителя в дыхательные пути и на конъюнктиву. Инфекция может передаваться иксодовыми, гомазовыми клещами, а также кровососущими насекомыми.
Патогенез. В зависимости от ворот инфекции листерии распространяются в организме гематогенным, лимфогенным и нейрогенным путями. Различают септическую и нервную формы болезни. При септической форме, которую наблюдают чаще у молодняка, возбудитель заселяет все органы и ткани организма, вызывая дегенеративные изменения в паренхиматозных органах. Нервная форма проявляется менингоэнцефалитом, при этом листерии обнаруживают только в головном и спинном мозге, особенно часто в продолговатом. У беременных животных листерии вызывают гибель плодов и аборты. Инфекционный процесс может развиваться без клинического проявления. Патогенное действие листерии связано с выделением ими экзо- и эндотоксинов.
|
|
|
Клинические признаки. Инкубационный период при спонтанном листериозе в пределах 7—60 дн. Овцы заболевают, как правило, в стойловый период. Заболеваемость овец в отарах от 1—6%, смертность 1, 5—3%, летальность 76—100%. У взрослых овец чаще отмечают нервную форму болезни. Наблюдают общее угнетение, отсутствие аппетита, светобоязнь, истечение серозно-слизистой жидкости из носа, анатоксию. Животные совершают круговые движения; отмечают судороги, нарушение зрения, дрожь, парезы и параличи, неестественное искривление шеи. У ягнят чаще регистрируют септическую форму болезни: высокая температура тела, общее угнетение, снижение аппетита, поносы.
У крупного рогатого скота болезнь проявляется отсутствием аппетита, повышением температуры тела, у коров — снижением удоя, атонией преджелудков, потерей зрения. Нередко отмечают нервные явления, судороги, коматозное состояние.
Септическую или нервную форму болезни регистрируют у свиней. При первой отмечают лихорадочное состояние, слабость, затрудненное дыхание, кашель, синюшность кожи ушей, живота, поносы. Нервная форма характеризуется возбуждением, движением назад, атаксией, парезами тазовых конечностей, искривлением туловища.
У норок наблюдают аборты без видимых предшествующих признаков, патологические роды, рождение мертвых щенков и гибель самок. Аборты, патологические роды, задержание последа, мумификацию плода, гангренозный метрит, гибель абортировавших маток и молодняка чаще отмечают у кроликов. Болезнь у птиц проявляется сонливостью, отсутствием аппетита, нервными явлениями, парезами и параличами.
|
|
|
Патологоанатомические изменения при листериозе не характерны и зависят от формы и длительности течения болезни. При нервной форме отмечают гиперемию сосудов, отечность мозга и мозговых оболочек с наличием кровоизлияний, в субдуральном пространстве и полостях желудочков мозга — скопление жидкости (иногда гнойного характера), обнаруживают также размягченные участки и абсцессы в мозговой ткани. Изменения при септической форме наблюдают в паренхиматозных органах (гиперемия и отек легких, кровоизлияния на эндо- и эпикарде; печень, почки, селезенка, лимфатические узлы увеличены, полнокровны, содержат множественные кровоизлияния и некротические узелки). Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта с признаками воспаления, точечными и полосчатыми кровоизлияниями. У беременных животных наблюдают изменения в матке, характерные для метритов.
Диагноз и, дифференциальный диагноз основаны на анализе эпизоотологических, клинических данных, бактериологических и серологических исследований. Высевы проводят из головного мозга, паренхиматозных органов, трубчатой кости, абортированных плодов и др. Для выявления листерионосителей сыворотки крови животных исследуют в РА, МФА, РСК. Листериоз следует дифференцировать от бешенства, болезни Ауески, энцефаломиелита овец, ценуроза, эстроза, рожи свиней, болезни Тешена, гиповитаминозов и кормовых отравлений.
Иммунитет и средства специфической профилактики. Переболевшие животные приобретают относительный иммунитет, который можно преодолеть большими дозами вирулентных листерий. Для профилактики болезни применяют сухую живую вакцину из штамма АУФ. После однократного ее введения у овец, свиней, крупного рогатого скота создается иммунитет продолжительностью до года, у норок, кроликов — до 6 мес.
Профилактика и меры борьбы направлены на охрану благополучных хозяйств от заноса в них листерий и проведение ограничительных и оздоровительных мероприятий в очаге инфекции. Всех животных неблагополучной фермы обследуют клинически с измерением температуры тела: с признаками болезни убивают, а температурящих, слабых, истощенных изолируют и лечат. Молоко и мясо используют после стерилизации. Остальное поголовье иммунизируют сухой живой вакциной из штамма АУФ. Животноводческие помещения дезинфицируют 10 %-ной хлорной известью или 2 %-ным раствором каустической соды. Навоз обеззараживают биотермическим методом.
|
|
|
Методы диагностики
Бактериологический метод:
Материал для исследования:
трупы мелких животных, паренхиматозные органы, головной мозг, абортированные плоды.
Микроскопия:
методы окраски:
простой метод, по Граму
микрокартина:
полиморфные палочки до 3 мкм, располагаются одиночно, попарно, часто располагаются в виде римской цифры V
грамположительные;
спор не образуют;
капсулу не образуют;
подвижны в молодых культурах, выращенных при комнатной температуре.
Культивирование:
посев на питательные среды, обогащенные МПА и МПБ;
особенности выделения возбудителя:
факультативные аэробы;
оптимальная температура 37oС;
срок культивирования (ежедневный просмотр) до 3-4 сут.
культуральные свойства:
на МПБ помутнение среды с образование осадка;
на МПА – мелкие, круглые, прозрачные колонии.
биохимические свойства:
обладают сахаролитическими свойствами – расщепляют салицин;
не разжижают желатин, не образуют индола и сероводорода;
выделяют каталазу;
обладают гемолитическими свойствами.
Биопроба:
заражают внутрибрюшинно или внутривенно белых мышей или кроликов, кератоконъюнктивальная проба.
Серологический метод:
РА и РСК с сывороткой крови исследуемых животных;
РА – для дифференциации выделенных листерий (микробная культура и поливалентная листериозная сыворотка).
67. Возбудители туберкулеза. Морфология, культивирование, биохимические свойства. Пато- генность; Антигенная структура. Патогенез. Микробиологическая диагностика. Иммунитет. Дифференциация видов микобактерий. Биопрепараты.
Туберкулез (Tuberculosis) — болезнь, вызываемая микобактериями туберкулеза. Характеризуется образованием в разных органах и тканях специфических гранулем (бугорков-туберкулов), подвергающихся в дальнейшем казеозному некрозу.
Mycobacterium bovis
M. avium
Слож. среды, длит. рост
Яичная
Картоф-глицериновая
Туберкулез - инфекционная, хронически протекающая болезнь человека, животных, в том числе птиц. Патологоанатомически характеризуется образованием туберкул и творожисто-перерожденных туберкулезных очагов.
Восприимчивые животные
Крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи, лошади, кошки, собаки, олени, маралы, куры, индейки, цесарки, фазаны, павлины, голуби, утки и др.
|
|
|
Патогенез и факторы вирулентности:
основные пути заражения: алиментарный, аэрогенный;
при аэрогенном заражении первичный инфекционный очаг развивается в легких, а при алиментарном - в мезентериальных лимфатических узлах, из первичных фокусов микобактерии могут попасть в кровь, что приводит к генерализации процесса;
факторам вирулентности являются эндотоксины-туберкулины. Жирные кислоты способствуют распаду тканей. Корд-фактор нарушает дыхание и фосфорилирование клеток;
доказана персистенция L-форм, которые обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии.
Возбудитель — зернистые, палочки с закругленными концами, прямые или слегка изогнутые, отличаются полиморфностью (зависит от вида возбудителя, условий обитания и возраста культуры). Длина палочек 0, 8—5, 5 мкм, ширина 0, 2—0, 5 мкм. По преимущественности паразитирования у человека и разных видов животных различают 3 основных вида возбудителя туберкулеза: человеческого (М. tuberculosis), бычьего (М. bovis) и птичьего (М. avium). Последний по современной номенклатуре отнесен к III группе атипичных микобактерии — комплексу avium — intracellulare.
В то же время отмечены нередкие случаи заражения людей и животных не свойственными им видами возбудителя туберкулеза; свиньи в равной степени восприимчивы ко всем трем видам возбудителя.
Микобактерии способны сохраняться в почве до 5 лет, в навозе, подстилке — до 1, 5 лет, в речной воде до 10 мес, в фекалиях животных на пастбище в жаркое время года до 2 мес, в холодное — до 5 мес. В молоке, хранящемся на холоде, в масле возбудитель остается живым до 10 мес, в замороженном мясе — до года, в мягких сырах — до 19 мес. Прямой солнечный свет убивает микобактерии через 4—5 ч, рассеянный — через 30—40 дней.
Эпизоотологические данные. К туберкулезу восприимчивы практически все виды млекопитающих и птиц, из сельскохозяйственных животных в наибольшей степени крупный рогатый скот, свиньи и куры. Источник возбудителя болезни — больные животные, выделяющие микобактерии с фекалиями, мокротой, молоком, иногда с мочой, спермой. Вторичным источником становятся контаминированные возбудителем корм, вода, подстилка, почва, предметы ухода за животными. Заражение — алиментарное и аэрогенное, реже — через повреждения кожи, сосковый канал вымени, внутриутробно и при случке. При оптимальных условиях содержания и кормления, особенно в пастбищный период, туберкулезный процесс у зараженных развивается медленно, перезаражение в стаде происходит в длительные сроки. Болезнь быстро и широко распространяется при постоянном стойловом содержании большого количества животных на ограниченных площадях, на фоне несбалансированного кормления и при благоприятных условиях передачи возбудителя (общие поилки, транспортерная раздача кормов).
Патогенез. Микобактерии, попавшие в организм, захватываются макрофагами и разносятся в разные органы и ткани. У высоковосприимчивых видов животных они способны размножаться в макрофагах. Заражение не всегда сопровождается развитием болезни, возможно длительное нахождение возбудителя в организме без образования патологических изменений (латентный микробизм). Возможно длительное персистирование его в организме в L-форме.
Часто бессимптомное течение болезни (носительство) наблюдают у телят с последующим ее проявлением в двух-трехлетнем возрасте. В связи с этим использование для пополнения стад телят, полученных от больных коров, приводит к постоянному поддержанию инфекции в хозяйстве. По этой же причине отмечают широкое распространение болезни в неблагополучных по туберкулезу районах, где созданы межхозяйственные комплексы по выращиванию нетелей.
Туберкулезом могут поражаться все органы и ткани, за исключением роговых, однако у животных разных видов отмечают преимущественно поражение определенных органов. Так, у крупного рогатого скота наиболее часто обнаруживают изменения в легких, бронхиальных и средостенных лимфатических узлах, а у свиней — в брыжеечных и заглоточных, у кур — в печени, селезенке, нередко в костях.
Клинические признаки. Болезнь часто протекает без клинических признаков. При значительных поражениях органов отмечают истощение, периодическое повышение температуры тела, снижение аппетита, при изменениях в легких — кашель, увеличение и болезненность предлопаточных лимфатических узлов, при поражении кишечника — диарею. Туберкулез вымени характеризуется образованием в нем уплотнений, увеличением надвымянных лимфатических узлов.
Патологоморфологические изменения. В месте внедрения возбудителя образуется бугорок специфического клеточного строения с некротическим центром. Из первичного очага возбудитель попадает в регионарный лимфатический узел, где также развивается туберкулезный процесс. В ранних стадиях бугорок имеет вид серого, полупросвечивающегося образования величиной от булавочной до спичечной головки, состоящего из эпителиоидных, гигантских и лимфоидных клеток, пространство между которыми заполнено экссудатом с фибрином. Со временем происходят казеозное (лат. caseosus — творог, сыр) перерождение бугорка и пропитывание казеозных масс известью. Вокруг очага создается соединительнотканная капсула. В таком бугорке микобактерии могут сохраняться длительное время и при прорыве барьера распространяться в организме, вызывая поражение других органов и тканей.
Диагноз. Применяют внутрикожную туберкулиновую пробу. Свиней исследуют одновременно двумя туберкулинами — для млекопитающих и для птиц. В благополучных хозяйствах результаты туберкулиновой пробы считают ориентировочными, а в неблагополучных — реагирующих на туберкулин животных считают больными. Основные, решающие методы диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота — патологоанатомическое исследование и биопроба на лабораторных животных, у свиней — лабораторное исследование материала с идентификацией возбудителя, у кур — патологоанатомическое исследование с микроскопией мазков-отпечатков из пораженных органов на микобактерии. При первичной постановке диагноза применяют также симультанную аллергическую пробу с видовыми аллергенами и серологическое исследование (РСК) с целью отбора животных для диагностического убоя.
Туберкулезные поражения представляют собой в основном плотные очаги серо-желтого цвета, заполненные творожистой массой. Содержимое их вылущивают с трудом, после этого остается капсула с шероховатой поверхностью, что отличает туберкулезные бугорки от сходных изменений, вызванных другими причинами. Вокруг крупных очагов обычно располагаются мелкие узелки. Поражения легких могут быть в виде многочисленных милиарных (milium — просо) узелков (или величиной с горошину, вишню), нередко сливающихся между собой и захватывающих участки или целые доли легкого (лобулярная и лобарная пневмонии). В кишечнике у крупного рогатого скота обнаруживают язвы различной величины с твердым дном, покрытым сухой творожистой массой, у кур — в виде узлов под серозной оболочкой величиной иногда до куриного яйца. На серозных оболочках выявляют округлые блестящие образования с перламутровым оттенком (жемчужница); пораженные лимфатические узлы увеличены, бугристы.
При обнаружении у крупного рогатого скота на вскрытии характерных для туберкулеза изменений диагноз считают установленным, при их отсутствии материал направляют в лабораторию.
Иммунитет и средства специфической профилактики. У зараженных животных развивается состояние относительной невосприимчивости и экзогенной инфекции. Иммунизирующими свойствами обладают в определенной степени также атипичные микобактерии. Иммунитет клеточный, нестерильный, сохраняется на период нахождения микобактерии в организме. В отдельных районах страны используют вакцино- и химиопрофилактику туберкулеза телят с помощью вакцины БЦЖ и изониазида.
Методы диагностики
Бактериологическая диагностика
Материал для исследования:
молоко, моча, слизь, пораженные органы и ткани.
Микроскопия.
методы окраски:
по Граму, по Цилю-Нильсену.
микрокартина:
прямые или слегка изогнутые палочки с закругленными краями длиной от 1, 5 до 4, шириной от 0, 2 до 0, 5 мкм;
грамположительны;
спор не образуют;
капсул не образуют;
неподвижны;
кислото-спирто-щелочеустойчивые.
Культивирование.
посев на питательные среды:
МПГБ, глицериновый картофель, Петраньяни, Гельберга, Сотона, Моделя.
особенности выделения возбудителя:
аэробы;
оптимальная температура культивирования:
37-38 oС для M. tuberculosis;
38-39 oС для M. bovis;
39-41 oС для M. avium;
срок культивирования 7-30 дней и более.
культуральные свойства:
на жидких питательных средах характеризуется наличием рыхлой, матовой, крошкоподобной или сплошной, морщинистой, блестящей пленки соответствующего цвета;
на плотных средах микобактерии растут в виде S- или R-форм крошкоподобных мелких либо крупных, блестящих или матовых единичных обособленных колоний или же сплошных скоплений, а также в виде морщинистогоналета белого или белого с желтоватым оттенком, или же другого цвета.
вирулентные культуры Mycobacterium bovis на питательных средах растут очень медленно в виде сферических, гладких и шероховатых колоний, чаще в виде сухих крошек. Mycobacterium tuberculosis также растут в виде сферических колоний, которые встречаются как в R-, так и в S-форме. Mycobacterium avium растут гладкими, мелкими, круглыми, белыми, блестящими, с ровными краями колониями, располагающимися как единично, так и скоплениями или в виде сплошного слизистого налета.
биохимические свойства:
- тесты для биохимической дифференциации микобактерий: ниациновый тест, реакция восстановления нитратов, амидазная проба, каталазная и арилсульфатазная активность, рост на среде с салицилатом натрия, разрушение салицилата натрия, ПАСК, использование нитрата как единственного источника азота, устойчивость к 5 %-ному хлориду натрия, пикриновой кислоте, сахаролитическая активность, гиролиз твина-80 и др.
Биопроба.
Заключается в определении патогенности культуры для морских свинок, кроликов, птиц и других лабораторных животных, которые по-разному чувствительны к различным микобактериям туберкулеза. Для этого используют двух кроликов массой не менее 1, 5-2 кг которым в краевую вену уха вводят суспензию культуры микобактерий на физиологическом растворе. Первому вводят 0, 1; второму - 0, 01 мг бактериальной массы.
Mycobacterium bovis на протяжении 3 мес вызывает генерализованное поражение бугорковой формы. При заражении Mycobacterium tuberculosis за этот же период возникают нетипичные туберкулезные очажки регрессивного характера.
Mycobacterium avium вызывает у кроликов септическую форму болезни без образования специфических патологоанатомических изменений с летальным исходом в течение 2-3 нед.
Заражение двух морских свинок такими же дозами культуры позволяет дифференцировать Mycobacterium avium, к которым они нечувствительны, от Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis, которые вызывают у них прогрессивные туберкулезные изменения.
У кур, зараженных внутривенно дозой в 1 мг бактериальной массы, Mycobacterium avium вызывают туберкулезные поражения селезенки, печени и кишечника. Куры к Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis менее чувствительны.
Устойчивость.
Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к химическим и физическим воздействиям. В высушенной мокроте, кусочках пораженной ткани, пыли микобактерии жизнестойки от 2 до 7 мес и более. В воде микроб выживает 5 мес, в почве - 7 мес, при гниении материала – 76-167 дней и дольше. Под воздействием прямых солнечных лучей в мокроте возбудитель погибает через 1, 5-2 ч. Во влажной среде микобактерии гибнут при 60 oС в течение 1 ч, при 65oС - через 15 мин, при 70-80oС - через 5-10 мин. В свежем молоке возбудитель туберкулеза сохраняется 9-10 дней. 5 %-ный раствор фенола и 10 %-ный раствор лизола разрушают микобактерии по истечении 24 ч, 4 %-ный формалин - после 12 ч. BДля проведения дезинфекции при туберкулезе рекомендуют следующие растворы:
15 %-ный раствор смеси, приготовленный из равных частей серно-карболовой кислоты и 16 %-ного раствора гидроокиси натрия, воздействие до 4 ч;
3 %-ный щелочной раствор формальдегида при 3-кратном нанесении на объект и 3-часовой экспозиции;
хлорную известь в виде порошка, растворов и взвесей, содержащих не менее 5 % активного хлора при экспозиции не менее 3 ч;
3-5 %-ный раствор хлорамина Б, гипохлор, 1 %-ный раствор глутарового альдегида, 5 %-ный фенолят натрия, 8 %-ную эмульсию феносмолина из расчета 1 л/м и экспозиции 3 ч.
Иммунитет.
При туберкулезе иммунитет нестерильный. Фагоцитоз имеет незавершенный характер и фагоцитированные микобактерий не погибают.
В 1924 г. французские ученые Кальметт и Герен предложили вакцину против туберкулеза. Штамм этот назван культурой BCG (Bacterium Calmett - Guerin), по русски БЦЖ.
В ветеринарной практике вакцину БЦЖ применяют в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. Необходимо иметь в виду, что микобактерии вакцинного штамма БЦЖ в организме вакцинированных животных подвергаются L-трансформации.
Серологическая диагностика:
используют реакцию связывания комплемента (РСК) с антигенами УНИИЭВ и СибНИВИ;
реакцию пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА);
реакцию кольцепреципитации;
реакцию диффузной преципитации в геле (РПГ).
Аллергическая диагностика:
Для изготовления туберкулинов для млекопитающих используют штаммы только вида Mycobacterium bovis.
Применяют сухой очищенный туберкулин (протеин-пурифиед-дериват - ППД). В ветеринарии используют стандартизированный сухой очищенный туберкулин для млекопитающих, который содержит в диагностической дозе 10 000±2000 туберкулиновых единиц (ТЕ - 0, 2 мг препарата, растворенного в 0, 2 мл растворителя). Диагностическая доза альттуберкулина в том же объеме составляет 18000 ТЕ.
Сухой очищенный туберкулин (ППД) для птиц готовят по той же технологии, что и ППД для млекопитающих, из культурального фильтрата микобактерий туберкулеза птичьего вида и применяют для диагностики у птиц и свиней.
Туберкулин инъецируют крупному рогатому скоту, буйволам, зебу, верблюдам, оленям в толщу кожи в области средней трети шеи, свиньям на наружной поверхности основания уха, курам в толщу кожи бородки.
Учитывают реакцию через 72 ч по результатам измерения толщины кожной складки с учетом характера образовавшейся припухлости. Положительная реакция проявляется в виде разлитого отека размером 35х45 мм и больше, без строго очерченных границ, тестообразного, повышенной теплоты и чувствительности. Кожная складка увеличивается на 3 мм и более. Размер увеличения кожной складки устанавливают с помощью кутиметра путем определения разницы между показателем измерения возникшей припухлости и показателем складки неизмененного участка кожи.
Курам туберкулин вводят внутрикожно в одну бородку, вторая служит контролем. Реакцию учитывают через 30-36 ч. Положительная реакция проявляется в виде опухания бородки, она утолщена, тестообразна, горяча и отвисает книзу.
Существуют неспецифические реакции животных на туберкулин при их инфицировании Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium avium. К ним относят парааллергические и псевдоаллергические реакции.
Парааллергические реакции - результат сенсибилизации крупного рогатого скота атипичными микобактериями, псевдоаллергические - результат воздействия возбудителей паразитарных болезней и других факторов.
68. Возбудитель сибирской язвы. Морфология, культивирование, биохимические свойства. Ус тойчивость во внешней среде. Факторы патогенности. Антигенная структура. Патогенез. Микробиологическая диагностика. Иммунитет. Биопрепараты.
Сибирская язва (Anthrax) - зооантропоноз. К ней восприимчивы животные многих видов, особенно травоядные, и человек. Болезнь протекает преимущественно остро с явлениями септицемии или с образованием различной величины карбункулов. Регистрируют в виде спорадических случаев, возможны энзоотии и эпизоотии.
Возбудитель сибирской язвы - Bacillus anthracis (Cohn, 1872) - относится к семейству Bacillaceae.
Морфология.
Bacillus anthracis неподвижная, грамположительная (в молодых и старых культурах встречаются и грамотрицательные клетки), образующая капсулу (в организме или при культивировании на искусственных питательных средах с большим содержанием нативного белка и СО2) и спору палочка, размером 1-1, 3 х 3, 0-10, 0 мкм. При температуре ниже 12 и выше 42 оС, а также в живом организме или невскрытом трупе, в крови и сыворотке животных споры не образуются. В окрашенных препаратах из крови и тканей больных или погибших от сибирской язвы животных бактерии располагаются одиночно, попарно и в виде коротких цепочек по 3-4 клетки; концы палочек, обращенных друг к другу, прямые, резко обрубленные, свободные - слегка, закругленные. Иногда цепочки имеют форму бамбуковой трости. В мазках из культур на плотных и жидких питательных средах палочки располагаются длинными цепочками.
Культивирование.
Bacillus anthracis по способу дыхания относят к факультативным анаэробам, хорошо растет на универсальных средах (МПБ, МПА, МПЖ, картофеле, молоке). Оптимальная температура роста на МПА 35-37oС, в бульоне 32-33oС. При температуре ниже 12 и выше 45oС не растет. Оптимум рН сред 7, 2-7, 6. На поверхности МПА в аэробных условиях при температуре 37oС 17-24-часовые культуры состоят из серовато-беловатых тонкозернистых с серебристым оттенком, похожих на снежинки колоний, имеющих шероховатый рельеф и характерных для типичных вирулентных штаммов (R-форма). Диаметр колоний не превышает 3-5 мм. На сывороточном агаре и свернутой лошадиной сыворотке в присутствии 10-50% углекислоты колонии гладкие полупрозрачные (S-форма), а также слизистые (мукоидные), тянущиеся за петлей (М-форма), состоящие из капсульных палочек. В МПБ Bacillus anthracis через 16-24 ч на дне пробирки образует рыхлый белый осадок, надосадочная жидкость остается прозрачной, при встряхивании бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья (R-форма). При посеве в столбик желатина на 2-5-е сут появляется желтовато-белый стержень. Культура напоминает елочку, перевернутую верхушкой вниз. Постепенно верхний слой желатин начинает разжижаться, принимая сначала форму воронки, затем мешочка. Bacillus anthracis при росте в молоке вырабатывает кислоту и через 2-4 дня свертывает его и пептонизирует сгусток. Возбудитель хорошо размножается в 8-12-суточных куриных эмбрионах, вызывая их гибель на 2-4 дней с момента заражения.
Биохимические свойства.
Ферменты Bacillus anthracis: липаза, диастаза, протеаза, желатиназа, дегидраза, цитохромоксидаза, пероксидаза, каталаза, лецитиназа и др. Ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, сахарозу, трегалозу, фруктозу и декстрин. На средах с глицерином и салицином возможно слабое кислотообразование. Арабинозу, рамнозу, галактозу, маннозу, раффинозу, инулин, маннит, дульцит, сорбит, инозит не сбраживает. Утилизирует цитраты, образует ацетилметилкарбинол (реакция Фогеса - Проскауэра положительная). Выделяет аммиак. Редуцирует метиленовый синий и восстанавливает нитраты в нитриты. Некоторые штаммы образуют сероводород.
Токсинообразование.
Bacillus anthracis образует сложный экзотоксин, состоящий из трех компонентов: эдематогенный фактор (ЕF), протективный антиген (РА) и летальный фактор (LF) или факторы I, II, III. Эдематогенный фактор вызывает местную воспалительную реакцию - отек и разрушение тканей. Протективный антиген - носитель защитных свойств, обладает выраженным иммуногенным действием. Летальный фактор в смеси со протективным вызывает гибель крыс, белых мышей и морских свинок. Каждый из трех факторов обладает выраженной антигенной функцией и серологически активен. Инвазивные свойства микроба обусловлены капсульным полипептидом d-глутаминовой кислоты и экзоферментами.
Антигенная структура.
В состав антигенов Bacillus anthracis входят неиммуногенный соматический полисахаридный комплекс и капсульный глутаминполипептид. Полисахаридный антиген не создает иммунитета у животных и не определяет агрессивных функций микроорганизма.
Устойчивость.
В невскрытом трупе вегетативная клетка микроба разрушается в течение 2-3 сут, в зарытых трупах сохранятся до 4 дней. В замороженном мясе при минус 15oС жизнеспособна 15 дней, в засоленном мясе - до 1, 5 мес. В навозная жиже, смешанной с сибиреязвенной кровью, погибает через 2-3 ч, споры же остаются в ней вирулентными в течение месяцев. В запаянных ампулах с бульонными культурами могут оставаться жизн9еспособными и вирулентными до 63 лет, в почве - более 50 лет. Спирт, эфир, 2 %-ный формалин, 5 %-ный фенол, 5-10 %-ный хлорамин, свежий 5 %-ный раствор хлорной извести, перекись водорода разрушают вегетативные клетки в течение 5 мин. Этиловый спирт 25-100 % убивает споры в течение 50 дней и более, 5 %-ный фенол, 5-10%-ный раствор хлорамина - от несколько часов до нескольких суток, 2 %-ный раствор формалина - через 10-15 мин, 3%-ный раствор перекиси водорода - через 1 ч, 4 %-ный раствор перманганата калия - через 15 мин, 10 %-ный раствор гидроокиси натрия - через 2 ч. Вегетативные клетки при нагревании до 50-55oС гибнут в течение 1 ч, при 60 oС - через 15 мин, при 75 oС - через 1 мин, при кипячении - мгновенно. При медленном высушивании наступает спорообразование и микроб не гибнет. При минус 10oС бактерии сохраняются 24 дня, при минус 24oС - 12 дней. Воздействие прямого солнечного света обезвреживает бактерии через несколько часов. Сухой жар при температуре 120-140oС убивает споры через 2-3 ч, при 150oС - через 1 ч, текущий пар при 100oС - через 12-15 мин, автоклавирование при 110oС - за 5-10 мин, кипячение - через 1 ч. Возбудитель сибирской язвы проявляет высокую чувствительность к пенициллину, хлортетрациклину и левомицетину, а также к лизоциму. Бактериостатическим эффектом на протяжении 24 ч обладает свежевыдоенное молоко коров.
Патогенность.
К возбудителю сибирской язвы восприимчивы все виды млекопитающих. Чаще болеют овцы, крупный рогатый скот, лошади, козы, буйволы, верблюды и северные олени, могут заражаться ослы и мулы. Свиньи менее чувствительны. Среди диких животных восприимчивы все травоядные. Известны случаи заболевания собак, волков, лисиц, песцов, среди птиц - уток и страусов.
Патогенез.
Заражение животных происходит преимущественно алиментарно. Через поврежденную слизистую пищеварительного тракта микроб проникает в лимфатическую систему, а затем в кровь, где фагоцитируется и разносится по всему организму, фиксируясь в элементах лимфоидно-макрофагальной системы, после чего снова мигрирует в кровь, обусловливая септицемию. Капсульное вещество ингибирует опсонизацию, в то время как экзотоксин разрушает фагоциты, поражает центральную нервную систему, вызывает отек, возникает гипергликемию и повышается активность щелочной фосфатазы. В терминальной фазе процесса в крови снижается содержание кислорода до уровня, несовместимого с жизнью.
Лабораторная диагностика.
Для лабораторного исследования на сибирскую язву направляют ухо павшего животного.
Бактериоскопия. Из патологического материала для микроскопии готовят мазки, часть красят по Граму и обязательно на капсулы по Михину и Ольту. Обнаружение типичных по морфологии капсульных палочек является важным диагностическим признаком. Посев на питательные среды. Исходный материал засевают в МПБ и на МПА (рН 7, 2-7, 6), инкубируют посевы при температуре 37oС в течение 18-24 ч, при отсутствии роста их выдерживают в термостате еще 2 сут. Биологическая проба. Осуществляется на белых мышах, морских свинках, кроликах, одновременно с посевом материала на питательные среды. Белых мышей заражают подкожно в заднюю часть спины (по 0, 1-0, 2 мл), морских свинок и кроликов - под кожу в область живота (по 0, 5-1, 0 мл). Мыши погибают через 1-2 сут, морские свинки и кролики - через 2-4 сут. Павших животных вскрывают, делают мазки и посевы из крови сердца, селезенки, печени и инфильтрата на месте инъекции исследуемого материала. Идентификация. Возбудителя сибирской язвы следует дифференцировать от сапрофитных бацилл: B. cereus, B. megaterium, B. mycoides и B. subtilis на основе главных и дополнительных признаков. К главным признакам относятся патогенность, капсулообразование, тест «жемчужного ожерелья», лизабельность фагом, иммунофлюоресцентный тест. Дополнительными являются подвижность, отсутствие гемолиза, лецитиназная активность, образование фосфатазы.
Лечение. Применяют гипериммунную противосибиреязвенную сыворотку, гамма-глобулин, антибиотики (пенициллин, стрептомицин, левомицетин, биомицин) или их сочетания в соответствующих дозах. При карбункулезной форме проводят также местное противовоспалительное лечение.
Иммунитет. В результате переболевания сибирской язвой у животных возникает стойкий и длительный иммунитет. Л. Пастер (1881) и Л. С. Ценковский (1883) приготовили вакцины из ослабленных штаммов возбудителя. Однако эти ослабленные микробы образовывали капсулу, и в связи с этим вакцины обладали значительной реактогенностью. В дальнейшем были созданы эффективные ж
|
|
|
