 |
Типовые и индикаторные культуры набора Абботта и Шеннона для колициногенотипирования шигелл Зонне.
|
|
|
|
| Типовые колициногенные культуры | Индикаторные культуры | |||
| Наименование штамма | Колициногенотип | Наименование штамма | Оригинальный № по схеме Абботта и Шеннона | Регистрационный № по списку Интернационального центра по шигеллам в Лондоне |
| S. sonnei | 1A | S. sonnei | ||
| S. sonnei | 1B | S. sonnei | ||
| S. sonnei | S. sonnei | |||
| S. sonnei | S. sonnei | 2M | ||
| S. sonnei | 3A | S. sonnei | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 56/56 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 56/98 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | R 1 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | R 6 | ||
| S. sonnei | S. dysenteriae 2 | M 19 | CTC8218 | |
| S. sonnei | S. sonnei | 2/7 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 2/64 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 2/15 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | R5 | ||
| S. sonnei | E. coli K-12 | ROW | ||
| S. sonnei | ||||
| S. sonnei |
Схема колициногенотипирования шигелл Зонне по Абботту и Шеннону.
| Индикаторные культуры | |||||||||||||||
| 2M | 56/56 | 56/98 | R 1 | R 6 | M 19 | 2/7 | 2/64 | 2/15 | R5 | ROW | |||||
| 1A | + | + | + | - | - | + | + | - | - | + | - | - | - | - | + |
| 1B | + | + | + | - | - | + | + | - | + | + | - | - | - | - | + |
| - | + | + | - | - | - | - | - | + | - | - | - | - | - | + | |
| + | + | + | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | |
| 3A | + | + | + | - | + | + | + | + | + | - | + | + | + | + | + |
| + | + | + | V | + | - | - | + | + | - | + | + | + | - | + | |
| + | + | + | V | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | + | |
| - | + | - | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - | - | + | |
| - | - | + | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| + | - | + | - | + | - | - | + | - | - | - | - | + | - | + | |
| + | + | + | - | V | + | + | + | + | - | - | - | + | - | + | |
| + | + | + | - | + | + | + | + | + | + | - | - | + | - | + | |
| - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | |
| + | + | - | - | + | + | + | + | + | - | - | - | + | - | + | |
| - | + | + | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - | - | + | |
| + | + | + | V | + | + | + | + | + | - | + | + | + | - | + | |
| + | - | + | + | + | - | - | + | - | - | + | + | + | + | + |
Обозначения: + наличие зоны торможения индикаторных штаммов,
- отсутствие зоны торможения,
V – вариабельные результаты.
|
|
|
Занятие 8.
Дата________
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
(продолжение).
План занятия.
А. Микробиологический диагноз пищевых токсикоинфекций (окончание).
1. Учет результатов посева на среды "пестрого ряда" и микроскопия выделенной культуры.
2. Разбор серологической классификации сальмонелл.
3. Агглютинация выделенной культуры на стекле с адсорбированными монорецепторными 0- и Н-сыворотками.
Б. Микробиологический диагноз дизентерии (продолжение).
I. Изучение результатов посева, сделанного на предыдущем занятии. Посев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда".
В. Микробиологический диагноз эшерихиозов.
1. Посев испражнений больных эшерихиозом детей на среды Эндо и Левина.
Методические указания.
A. Микробиологический диагноз пищевых токсикоинфекций (окончание).
§ 1. Зарегистрировать результаты посева выделенной культуры на среда "пестрого ряда", промикроскопировать посевы на МПА и зарисовать. На основании изучения биохимизма и морфологии выделенной культуры решить вопрос о ее принадлежности к роду сальмонелл и записать в тетради.
§ 2. Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной серологической классификации сальмонелл (демонстрация схемы).
§ 3. Поставить реакцию агглютинации выделенной культуры на стекле с адсорбированными монорецепторными 0- и Н-сыворотками.
Результаты реакции агглютинации зарисовать и записать в тетради.
Б. Микробиологический диагноз дизентерии (продолжение).
§ 1. Внимательно рассмотрев посевы на дифференциально-диагностических средах Левина и Плоскирева, найти колонии, подозрительные на дизентерийные (бесцветные, прозрачные). Часть колонии промикроскопировать с окраской по Граму и зарисовать, а оставшуюся часть засеять на скошенный МПА, среду Ресселя, среду Пешкова для определения подвижности и среды "пестрого ряда".
|
|
|
B. Микробиологический диагноз эшерихиозов.
§1. Произвести посев испражнений ребенка, больного эшерихиозом, на чашки с дифференциально-диагностическими средами Эндо и Левина.
Биохимические свойства культуры, выделенной от больного токсикоинфекцией.
| Культура | Глю-коза | Лактоза | Манит | Сахароза | Индол | H²S | Молоко | Среда Пешкова |
Предварительное заключение: _____________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________
Контрольные вопросы.
Какие микроорганизмы являются основными представителями нормальной кишечной микрофлоры?
Какое значение имеет кишечная микрофлора для организма человека?
В каких случаях возникает дисбактериоз?
Рисунок 1. Микроскопия выделенной культуры сальмонелл. Окраска по Грамму.
Рисунок 2. Реакция агглютинации выделенной культуры сальмонелл с монорецепторными О- и Н-сыворотками.
Заключение____________________________________________________________________________________________________________________________________
Рисунок 3. Бактерии из колонии, подозрительной на дизентерийную. Окраска по Грамму.
Какие препараты применяют для восстановления состава нормальной микрофлоры кишечника?
Почему кишечную палочку считают санитарно-показательным микроорганизмом при загрязнении внешней среды?
Что такое коли-титр и коли-индекс?
Каково антигенное строение кишечной палочки?
Как выделяют чистую культуру диареегенной кишечной палочки?
Какой антиген (0 или К) определяют в реакции агглютинации с живой культурой?
Как обнаруживают специфический 0-антиген у кишечной палочки?
По какому антигену окончательно судят о принадлежности бактерий к патогенному серовару?
Что собой представляют колицины и какое значение имеет определение их типа?
На какие категории и по каким признакам подразделяют диареегенные кишечные палочки?
Какими факторами патогенности обладают энтеротоксигенные кишечные палочки? Каков генетический контроль их синтеза?
Чем обусловлена патогенность энтеропатогенных кишечных палочек?
Чем обусловлена патогенность энтероинвазивных кишечных палочек?
|
|
|
Чем объясняется некоторое антигенное и патогенное сходство энтероинвазивных кишечных палочек и шигелл?
Бактериологическое исследование испражнений при эшерихиозах.
Рисунок 4.
С чем связана патогенность знтерогеморрагических кишечных палочек?
Каков генетический контроль биосинтеза шигаподобных экзотоксинов у энтерогеморрагических вариантов кишечной палочки?
Каков механизм действия термостабильных и термолабильных энтеротокоинов?
Какова молекулярная структура энтеротоксинов?
Каковы основные способы заражения диареегенными кишечными палочками?
Какие категории диареегенных кишечных палочек чаше всего вызывают внутрибольничные вспышки?
Можно ли отличить колонии диареегенных кишечных палочек от колоний непатогенных кишечных палочек на дифференциально-диагностических средах? Если можно, то в каких случаях?
Приложение к занятии 8
А. Семейство кишечных бактерий объединяет группу родственных видов, среди которых много патогенных и условно патогенных представителей. Важнейшими представителями семейства являются бактерии из рода эшерихиа, рода сальмонелла и рода шигелла. Все они - мелкие грамотрицательные аспорогенные палочки, с закругленными концами, размером 0,5-0,8x1,5-3,0 микрона, подвижные или неподвижные, факультативные анаэробы, нетребовательны к питательным средам, ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа или только кислоты, восстанавливают нитраты в нитриты, в большинстве не обладают протеолитическими свойствами, индофенолоксидазоотрицательны; место обитания - кишечник; механизм заражения - фекально-оральный.
Б. Факторы патогенности диареегенных E.coli.
| Факторы | Международное название | |
| Полное | Символы | |
| Термостабильный энтеротоксин | ||
| Термолабильный энтеротоксин | ||
| Цитотоксины: | ||
| Шигаподобный токсин | ||
| Vero - токсин | ||
| Инвазивность٭ | ||
| Факторы колонизации٭ | ||
| Фактор адгезии энтеропатогенных E. coli к клеткам Hep-2 | ||
| Адгезия к клеткам Henle-407 |
٭ - имеются в виду CFA/I, CFA/II, CFA/III, CFA/IV. Известны и другие факторы адгезии и колонизации.
|
|
|
В. Классификация диареегенных Escherichia coli.
| Категория | Серогруппы | Серовары |
| ETEC – энтеротоксигенные E. coli | 06, 08, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0115, 0128ас, 0139, 0148, 0153, 0159, 0167. | 06:Н16, 08:Н9, 011:Н27, 015:Н11, 020:Н-, 025:Н-, 027:Н7, 063, 078:Н11, 0128:Н7, 0148:Н28, 0149:Н10, 0159:Н20, 0167. |
| EIEC – энтероинвазивные E. coli | 028ас, 029, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164, 0167. | 028ас:Н-, 0112ас:Н-, 0124:Н, 0124:Н32, 0136:Н-, 0143:Н-, 0144:Н-, 0152:Н-, 0159:Н-, 0164, 0167:Н4, 0167:Н5, 0124:Н30. |
| EPEC – энтеропатогенные E. coli | Класс 1. 055, 086, 0111, 0119, 0125, 0126, 0127, 0128ав, 0142. Класс 2. 018, 044, 0112, 0114. | 018ас:Н7, 020ав:Н26, 026:Н-, 026:НII, 028ас:Н-, 044:Н34, 055:Н-, 055:Н6, 055:Н7, 086а:Н-, 086а:Н34, 0111ав:Н12, 0114:Н10, 0114:Н32, 0119:Н-, 0119:Н6, 0125ас:Н21, 0126:Н-. 0126:Н7, 0127:Н-, 0127:Н9, 0127:Н21, 0128ав:Н2, 0128ас:Н12, 0142:Н6, 0158:Н23, 0159. |
| EHEC – энтерогеморрагические E. coli | 0157, 026, 0111, 0145. | 0157:Н7 |
| EAEC – энтероадгерентные E. coli | Не выяснены (провизорная группа) |
Г. Классификация сальмонелл (Salmonella).
Род сальмонелл включает свыше 2000 серовариантов.
На основе нумерической таксономии и ДНК-связей в нем выделен единственный вид Salmonella choleraesuis с 6 подвидами: S. choleraesius, S. salamae, S. arisonae, S. diarisonae, S. houtenae, S. bonhori.
| Основные биохимические признаки | Подроды | |||||
| Подвиды | ||||||
| S. choleraesius | S. salamae | S. arisonae | S. diarisonae | S. houtenae | S. bonhori | |
| Лактоза | - | - | + | + | - | |
| Салицин | - | - | - | - | + | |
| Дульцит | + | + | - | - | - | + |
| Желатин | - | + | + | + | + | |
| d-тартрат | + | -или× | -или× | -или× | -или× | |
| Малонат | - | + | + | + | - | |
| KCN | - | - | - | - | + | + |
| Тест на β-галактозидазу | - | -или× | + | + | - | + |
Примечание: × - ферментация поздно.
Занятие 9.
Дата________
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
(продолжение).
План занятия.
A. Микробиологический диагноз дизентерии (окончание).
1. Учет результатов посева на среды "пестрого ряда".
2. Агглютинация выделенной культуры с дизентерийными сыворотками.
3. Колициногенотипирование и определение колициночувствителъности шигелл Зонне. Демонстрация. Опыт зарисовать.
Б. Микробиологический диагноз эшерихиозов (продолжение).
1. Изучение выросших колоний и агглютинация их на стекле со смесью ОК-сывороток.
2. Посев агглютинирующей колонии на скошенный МПА для получения чистой культуры.
B. Микробиологический диагноз холеры.
1. Изучение морфологии и биохимических свойств холерного и холероподобного вибрионов.
2. Исследование испражнений холерного больного: микроскопия, посев на щелочную пептонную воду и щелочный МПА.
3. Ускоренная диагностика холеры (демонстрация).
4. Исследование воды на наличие холерного вибриона (разбор методики).
|
|
|
Методические указания.
A. Микробиологический диагноз дизентерии (окончание).
§ 1. Учесть и зарегистрировать в таблице результаты посева на средах "пестрого ряда", промикроскопировать с окраской по Граму выросшую культуру на МПА, зарисовать ее и сделать ориентировочное заключение о предполагаемом виде бактерий.
§ 2. Определить вид и тип выделенных дизентерийных бактерий с помощью реакции агглютинации на стекле со специфическими видовыми и типовыми дизентерийными агглютинирующими сыворотками. Результаты записать в тетради.
Б. Микробиологический диагноз эшерихиозов (продолжение).
§§ 1-2. Проверить выросшую на среде Эндо или Левина колонию кишечной палочки в ориентировочной реакции агглютинации с поливалентными ОК-сыворотками ОКА,ОКВ,ОКС,ОКД и ОКЕ на стекле. Учет результатов производится по четырехкрестной системе. При отрицательной реакции капля остается гомогенно мутной. Оставшуюся часть колонии, давшей положительную реакцию агглютинации с одной из поливалентных сывороток, необходимо пересеять на скошенный МПА и среду Эндо (Левина). Если агглютинация не происходит, то прежде чем дать отрицательный ответ, в реакции агглютинации на стекле с поливалентными сыворотками ОК испытать не менее 10 различных колоний.
B. Микробиологический диагноз холеры.
§ 1. Приготовить препараты-мазки из чистой культуры водного вибриона, окрасить их по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства холерного и холероподобных вибрионов по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда".
§ 2. Приготовить и промикроскопировать с окраской по Граму препарат-маэок из испражнений "холерного" больного, обратить внимание на наличие вибрионов, зарисовать. Одну петлю испражнений засеять на пептонную воду в пробирке, другую петлю испражнений засеять на пластинку щелочного МПА так, чтобы получить изолированные колонии.
§ 3. Для исследования воды без предварительной фильтрации берут ее не менее 1 л, определяют рН, доводят ее насыщенным раствором соды до 7,6-7,8. Затем добавляют к 900 мл воды 100 мл основного раствора пептона (пептона 10 процентов, хлористого натрия 5 процентов, азотнокислого калия 1 процент и углекислого натрия 20 процентов).Засеянную однопроцентную пептонную воду (первая среда обогащения) разливают в колбы и флаконы по 250 мл и ставят в термостат на 5-8 часов. Дальнейшее исследование проводят по обычной схеме.
|
|
|
