 |
Методы микробиологической диагностики дизентерии.
|
|
|
|
А. Бактериологический.
Рисунок 8.
Б. Аллергический.
Внутрикожная проба с дизентерином (проба Цуверкалова).
По каким признакам идентифицируют возбудителей дизентерии?
Каково различие между типовыми и групповыми диагностическими агглютинирующими дизентерийными сыворотками?
Для чего необходимо серологическое типирование возбудителей?
Какова методика кератоконьюктивальной пробы и каково ее значение?
Каковы методика и цель определения чувствительности дизентерийных бактерий к антибиотикам?
В каких случаях и как применяют дизентерийный бактериофаг?
В чем заключается сущность методов определения чувствительности бактерий Зонне к колицинам и типов колицинов, продуцируемых шигеллами?
Как ставится аллергическая проба Цуверкалова?
Чем обусловлена вирулентность дизентерийных бактерий?
Приложение к занятию 7.
А. Ферментативные типы шигелл Зоне.
| Типы | Ферментация | |
| рамнозы | ксилозы | |
| + | - | |
| (+) | - | |
| + | + | |
| + | (+) |
Обозначения: + ферментация в первые сутки,
(+) ферментация замедленная,
- отсутствие ферментации.
Б. Метод колициногенотипирования.
Метод колициногенотипирования разработан английскими исследователями Абботом и Шенноном (1958) и основан на определении колициногенотипов шигелл Зонне по действию этих бактерий на 15 индикаторных культур, из которых 13 принадлежит к виду шигелл Зонне, 1 - s. dysenteriae 2 (Штуцера-Шмитца) и 1 - Escherichia сoli К-12 ROW.
С помощью этого набора индикаторных культур в настоящее время выявлено 17 колициногенных типов бактерий Зонне.
Испытываемую культуру сеют на МПА с генцианвиолетом двумя линейными штрихами параллельно диаметру чашки. После инкубирования при 37° в течение 48 часов выросшую культуру убивают парами хлороформа и удаляют с поверхности среды узким краем стерильного шлифованного предметного стекла. На поверхность агара наносят свежие культуры индикаторных штаммов в виде линейных штрихов, пересекающих линии посева исследуемой культуры. Посевы индикаторных штаммов инкубируют 18-20 часов при 37° и производят учет результатов по наличию или отсутствию зон торможения роста индикаторных культур и их размерам.
|
|
|
Регистрируют результаты следующими условными обозначениями:
++++ - зона торможения 15-20 мм;
+++ - зона торможения 10-15 мм;
++ - зона торможения более 5 мм;
+ - зона торможения 4-5 мм;
± - зона торможения меньше 4 мм;
- - отсутствие зоны торможения.
Полученный спектр действия исследуемой культуры на индикаторные штаммы сопоставляют со стандартной схемой титрования и присваивают этой культуре соответствующий колициногенотип.
Классификация бактерий рода Shigella.
| Подгруппа и ее характеристика | Вид и серовары | Подсеровары | Антигенная формула | |
| Типовой антиген | Групповые антигены | |||
| Подгруппа А. Не ферментирует маннита. Серологически каждый серовар отличается от других. | S. dysenterica | |||
| Подгруппа В. Обычно ферментируют манит. Серологически серовары родственны друг другу. | S. flexneri | 1а | 2,4 | |
| 1в | 1:S | 6:2,4 | ||
| 2а 2в | 3,4 | |||
| 7,8 | ||||
| 3а 3в 3с | 6:7,8 | |||
| 6:3,4 | ||||
| 4а 4в | В:3,4 | |||
| В:6:3,4 | ||||
| 7,8 | ||||
| (3,4) | ||||
| Некоторые штаммы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа | 2,4 | |||
| Вариант X | - | 7,8 | ||
| Вариант Y | - | 3,4 | ||
| Подгруппа С. Обычно ферментируют манит. Серологически серовары отличаются друг от друга. | S. boydii Серовары 1-18 | |||
| Подгруппа D. Обычно ферментируют манит, поздно лактозу и сахарозу. | S. sonnei Обычно вырастают колонии двух фаз – мелкие (имеют плазмиду), крупные, плоские (не имеют плазмиды) |
|
|
|
Методика колицинотипирования при помощи колициногенных штаммов.
Определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам проводят при помощи эталонных колициногенных штаммов Фредерика:
| Наименование штамма | Тип продуцируемого колицина | |
| E. coli | Ca-18 | B |
| E. coli | Ca-23 | D |
| E. coli | Ca-38 | E + I |
| E. coli | Ca-42 | F |
| E. coli | Ca-46 | G |
| E. coli | Ca-53 | I |
| E. coli | Ca-62 | J + I |
| E. coli | Ca-235 | K |
| E. coli | Ca-7 | V |
| E. freundii | Ca-31 | A |
| S. boydii | p-1 | S1 |
| S. dispar | p-15 | S4 |
| S. dispar | p-14 | S5 |
| S. sonnei | p-9 | S3 + 1 |
Схема определения колицингенотипов шигелл Зонне.
Рисунок 9.
Колицинотипирование, т.е. определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам, определяют следующим образом.
Свежие эталонные колициногенные штаммы Фредерика, выросшие на среде Ресселя, сеют уколом петли в соответствующие квадраты чашки с 1,5%-ным МПА, подкрашенным генцианвиолетом, и инкубируют при 37º в течение 24 часов. Выросшие колонии бактерии убивают парами хлороформа, и поверхность агара заливают 2,5 мл расплавленного 0,7%-ного МПА, содержащего 2 капли 6-часовой испытуемой бульонной культуры шигелл Зонне. После 20-часового роста при 37° производят учет результатов опыта. При наличии чувствительности к колицинам испытуемого штамма бактерии Зонне вокруг колоний колициногенных культур образуются зоны задержки роста подобно зонам задержки роста вокруг дисков с антибиотиками. Культура считается чувствительной к колицину, если ширина задержки роста бактерий более 2 мм. Результаты регистрируют плюсами: + - зона задержки 2 мм; ++ - зона задержки 2-5 мм, +++ - зона задержки 5-10 мм, ++++ - зона задержки более 10 мм.
В.
Вирулентность дизентерийных бактерий обусловлена наличием у них факторов адгезии и колонизации, инвазии. (Эти факторы патогенности контролируются главным образом плазмидами). Кроме того, шигеллы способны вырабатывать 2 типа экзотоксинов: цитотонины (термолабильный и термостабильный) и цитотоксины (способностью вырабатывать цитотоксины шигеллу наделяют конвертирующие умеренные фаги).
|
|
|
Патогенность шигелл определяется с помощью кератоконъюнктивальной пробы на морской свинке.
|
|
|
