 |
2.2.2. Требования к субстратам и средам
|
|
|
|
2. 2. 2. Требования к субстратам и средам
Все используемые химические реактивы и питательные среды заведомо должны соответствовать целевому назначению и проходить проверку при помощи адекватных средств контроля.
2. 2. 3. Активный контроль в процессе обработки
Особого внимания требуют следующие моменты:
i) Визуальный контроль суспензии, однородное окрашивание по Граму, рост культуры на неселективной среде.
ii) Агглютинация на предметном стекле со специфическими антисыворотками.
iii) Титрование бактерий методом нефелометрии или чашечного подсчета колоний.
iv) Проверка на эффективную инактивацию (убитая вакцина) посредством посева на неселективную среду либо использование среды, которая дает оптимальный шанс для восстановления, например, производственная среда с нейтрализацией инактивирующего соединения.
v) Титрование жизнеспособных бактерий (живая вакцина) до и после лиофилизации.
2. 2. 4. Испытания партии готового препарата
i) Стерильность/чистота
Тестирование биологических материалов на стерильность и отсутствие загрязнений подробно описано в главе 1. 1. 9 данного Руководства МЭБ по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных.
ii) Безопасность
Для того чтобы определить отсутствие вредных воздействий вакцины на привитых животных, можно использовать лабораторный тест, который ранее показал корреляцию с безопасностью для целевых видов. Каждая партия должна быть проверена на целевых видах с учетом рекомендаций по возрасту животных и способу введения вакцины. При этом используют, по меньшей мере, двойную полевую дозу для убитых вакцин и десятикратную дозу для живых вакцин. Ведут наблюдения за любыми неблагоприятными эффектами в отношении поведения и здоровья вакцинированных животных, а также получают оценку тканевой реакции в месте инъекции.
|
|
|
iii) Активность партии
Мощность оценивают, применяя анализ с вакцинной провокацией у мышей или других видов, включая (если это практично) целевые виды с учетом их иммунологической реакции. Многие вакцины Salmonella предназначены для использования у домашней птицы, таким образом, они обязательно должны проходить тестирование на мощность и безопасность.
2. 3. Требования к регистрации
2. 3. 1. Требования r безопасности
Некоторые убитые вакцины иногда способны вызывать аборт у беременных животных из-за содержания ЛПС, и, аналогичным образом, живые вакцины также необходимо использовать для беременных животных с осторожностью. Однако нередко возникает необходимость в вакцинации беременных самок, чтобы обеспечить материнский иммунитет для их потомства. Полезно включать в программу контроля безопасности
анализ на эндотоксины, чтобы выявить такой уровень, который сравним по безопасности с результатами анализов с двойной дозой вакцины. Вакцины также могут вызвать появление припухлости в месте инъекции, особенно при использовании адъюванта типа масляной эмульсии.
i) Безопасность целевых и нецелевых животных
Убитые вакцины оценивают в тесте с двойной дозой, а живые вакцины тесте с десятикратной дозой, что лучше всего анализировать на целевых видах. Для живых вакцин необходимо доказывать безопасность в отношении важных нецелевых видов, которые могут подвергаться воздействию вакцин, экскретированных привитыми животными.
ii) Возврат к вирулентности для аттенуированных/живых вакцин
В тестах на репликацию у целевых видов надо продемонстрировать, что живые вакцины не возвращаются к вирулентным штаммам при достаточно большом числе повторных репликаций. Для мутаций, особенно, неопределенных, надо продемонстрировать стабильность, причем проверку стабильности можно проводить при помощи молекулярных методов идентификационных отпечатков или секвенирования. Хотя риск невелик, разумно не использовать живые вакцины в той стране, где исходный штамм для вакцины был элиминирован.
|
|
|
iii) Внешнесредовые соображения
Живые вакцинные штаммы не должны реплицироваться или длительно выживать в окружающей среде.
2. 3. 2. Требования к эффективности
i) Для животноводства
Длительность иммунитета, вероятно, может значительно изменяться в зависимости от вакцинных продуктов, режимов вакцинации и привитых особей животных. Иммунитет в отношении Salmonella обычно специфичен для серовара или серогруппы. Консультации между коллегами позволяют предположить, что большинство убитых вакцин обеспечивают некоторую иммунную защиту в течение 6 месяцев, а некоторые живые вакцины, введенные посредством инъекций, способны вызвать более сильный иммунитет, который сохраняется в течение 1 года или более. Однако следует помнить, что сильная провокация, например, связанная с постоянно занятой территорией фермы или с зараженными грызунами, может преодолеть вакцинный иммунитет, а коммерческие живые вакцины могут быть ослаблены для меньшего выживания в окружающей среде, но это ослабление также уменьшает иммунную реакцию. Также не следует забывать о проблемах, связанных с возможной неэффективностью перорального ведения живых вакцин или возможной неточностью инъекций при введении убитых и живых инъекционных вакцин. Вакцины Salmonella предназначены для ограничения тяжести клинического заболевания у жвачных животных, свиней и инфекции S. Gallinarum у домашней птицы. По возможности, проверка мощности должна включать оценку эффективности вакцины для целевых видов, а для анализа производственных партий должны быть применены адекватные критерии. По возможности, надо оценивать убитые вакцины по вызываемой реакции антител O-H, хотя следует помнить, что сывороточные антитела представляют только часть защитного механизма хозяина против Salmonella. В альтернативном варианте мощность вакцины можно оценить по ее эффекту, производимому у привитых животных, при количественном и статистическом сравнении с непривитым контролем.
|
|
|
ii) Для сдерживания и искоренения инфекции
Вакцины Salmonella неспособны искоренить инфекцию в стадах или стаях животных, но могут увеличить порог восприимчивости для инфекции, снизить уровень выделения микроорганизма и уменьшить вертикальную передачу у домашней птицы, которая приводит к загрязнению инкубационных или употребляемых в пищу яиц. Следовательно, вакцинацию надо рассматривать как вспомогательное средство в комплексе мероприятий по сдерживанию и искоренению сальмонеллезной инфекции, включающем выбраковку животных, производство продукции по принципу all in – all out (использование птичника с однократным заполнением и последующей однократной реализации птицы), биологическую безопасность и гигиену ферм.
iii) Стабильность
Следует отметить недостаточность информации о стабильности убитых вакцин. На стабильность влияют условия хранения и присутствие загрязняющих микроорганизмов, дающих рост в вакцинном продукте. В убитые бактериальные вакцины часто включают в качестве консервантов химические вещества с противомикробной активностью, такие как тиомерсал, фенол или кристаллический фиолетовый. Для оценки стабильности используют анализы на мощность, повторяемые с определенной периодичностью. Стабильность живых вакцин можно оценить, выполнив подсчет количества жизнеспособных микроорганизмов, повторяемый с определенной периодичностью, а также при помощи тестов на генотипирование, позволяющих выявить генетические изменения в процессе ферментации. Не рекомендуется использовать живые вакцины, содержащие серовары Salmonella, которые неэндемичны в конкретном регионе, для контроля других сероваров (van Immerseel et al., 2013).
|
|
|
