 |
Клинико–диагностическое значение определения ферментов. Методы исследования
|
|
|
|
Ферменты (Энзимы) – спец. белки, роль – биокатализаторов (ускорителей хим. реакций) делятся на - простые (сост.только их аминокислот); - сложные – двукомпонентные – белковый компонент + апофермент, простетическая группа + кофермент – таких ферментов большинство. К этой группе относятся – трансаминазы, ЛДГ, ПДГ, транскетолазу.К простетической гр. в молекуле энзима (фермента) + витамины, нуклеотиды, углеводы, некатор. металлы, ост. фосфорн. кислоты и др. соединения.
Ингибиторы – подавляют ферментативную реакцию.
Активаторы – повыш.скорость ферм.реакций.(Са+, Мg+, К+, Na+,
Сl - (анион) и др.)
В печени содерж. - АЛТ, АСТ, ЛДГ, ЛАП, ЩФ;
В сердце – КК, ЛДГ, АСТ;
В поджелуд. жел. – а – амилаза (диастаза), липаза, ЛДГ;
В костной ткани – ЩФ;
В предстательной жел. – КФ
Методы исслед.:
1.Колориметрические – инкубац.сывор.с субстрактом в буфере, опред.время, реакцию останавливают и образующие продукты при помощи химической реакции определяют, либо замеряют количество оставшегося субстракта.
2.Спекторофотометрические – (кинетические) - непрерывно или периодически в ходе ферментативной реакции определяют потребление субстракта или кофермента, либо образование продукта.
КДЗ – ферментная диагностика используется для:
- для распознавания наследственных нарушений обмена веществ (первичные наслед.энзимопатии)
- для диагностики и дифференциальной диагностики приобретенных заболеваний (вторичн. приобрет. энзимопатии) – можно выявить особенность протекания болезни почти на молекулярном уровне.
Повышение активности ферментов – за счет выхода фермента из органов или тканей в кровяное русло.
Определение активности аминотрансфераз, клинико-диагностическое значение
|
|
|
Аминотрансферазы – это ферменты, осуществ. процессы межмолекулярного переноса аминогрупп, т.е. трансаминирование (переаминирование) - процесса. Трансаминирование играет ключев. Роль в промежуточном обмене, обеспечивает синтез и разрушение отдельных аминокислот в организме. АСТ и АЛТ.
Методы определения активности аминотрансфераз в сыворотке крови делятся на 2 основные группы:
Колориметрические (конечной точки.)
Кинетические (спекторофотометрические)
КДЗ – для диагностики
инфаркта миокарда АСТ, который не диагносцируется электрокардиографом (кардиограмма)
- (гемолиз Er – не искажает результат);
забол. печени АЛТ (гемолиз Er – искажает результат т.к. в 6 раз превышает содержание внутриклеточно)
(вирусный, токсич. Гепатит), мышечной патологии и др.
В N АСТ –до 31 Е/л
В N АЛТ –до 32 Е/л
Определяется на «Хитачи»
Клинико-диагностическое значение определения активности фосфатаз
Фосфатазы – ферменты отщепляющие остаток фосфорной кислоты от ее органических эфирных соединений.
ЩФ – содержится практически во всех тканях человека, прежде всего в костной тк., паренхиме и стенках желчных протоков печени, канальцев почек, предстательной и молочной железе, клетках слизистой оболочки кишечника, плаценте. Особенно много в растущих костях, желчи и плаценте, в биологических жидкостях тела (мочу, кал, слюну…).
КФ – кислая фосфатаза - фермент – содержится главным образом в предстательной железе, активность её в 1000 раз больше чем в костной ткани, печени, селезенке и почках.
Колориметрические (конечной точки.)
Кинетические (спекторофотометрические) в N ЩФ у муж.0,90 – 2,29; у жен. 0,74 – 2,10; у детей 1,20 – 6,30.
КДЗ – возрастание активности ЩФ – 2 вида патологий: костные заболевания, связан.с пролиферацией остеобластов, и заб. сопровожд. явлениями холестераза (заб.печенит – желтуха, закупорка желчных протоков камнями, спайками,опухолью, лейкимия с разрушением L и выход фермента в кровь)
|
|
|
Снижение активности ЩФ – при замедл. росте детей, при гипотиреозе, авитаминозе С, старч.остеопарозе, при накоплении радиоактивн.в - в в костях.
Повыш.активности КФ –указ на новообразования в предст.железе (в N ЩФ), после операт.вмеш. на предст.жел., биопсия.
Определение активности а - амилазы в сыворотке крови и моче, принцип метода
а - амилаза (диастаза) – фермент - осущ. гидролитическое расщепление полисахаридов (крахмал, гликоген, амилозы и др.продуктов содержащих остатки глюкозы) до декстринов и мальтозы.
Метод определения активности а - амилазы по Каравея (микрометод)
Метод базируется на колориметрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза.
В N в сыворотке крови 16 - 30 г/(ч.л), в моче 28 - 160 г/(ч.л)
Определение активности а – амилазы в биожидкостях энзиматическим методом по конечной точке: интенсивность окраски = активности фермента.
КДЗ: значительное возрастание активности фермента – при заболеваниях поджелудочной железы: о.панкреатит – в сыворотке крови активность а - амилазы повышается и достигает максимума к 12 - 24 ч после развития панкреатита и снижается на 2 - 6 сутки, а в моче может оставаться повышенной до 7 суток. Реже встречаемое или не столь выраженное увеличение - при о.холецистите и др.заб. желчевыводящих путей, перфорации пищевода, язве желудка, при заб. слюнных желез и др.заб.
Клинико-диагностическое значение определения общей активности ЛДГ и её ферментов
ЛДГ (лактатдегидрогеназа) – гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление L - лактата (молочной кислоты) в пируват (пировиноградную кислоту)
В плазме выявлено 5 изоэнзимов ЛДГсостоящих из субединиц:
М (muscie) и H (heart) - 5 изоформ:
ЛДГ – 1 (НННН), ЛДГ – 2 (НННМ), ЛДГ - 3 (ННММ), ЛДГ - 4 (НМММ),
ЛДГ - 5 (ММММ)
ЛДГ - 1 –в основном находится в сердце.
ЛДГ - 5 – в печени.
Методы определения:
кинетические – на оптическом тесте Варбурга в N 174 - 516 Е/л
2. колориметрические – согласно которым определяется количество образовавшегося продукта или потребляемого субстракта после фиксированного инкубационного периода.
|
|
|
КДЗ: - при о.гепатите активность увеличена ЛДГ отмечается в первые недели желтушного периода - (ЛДГ_4, ЛДГ - 5) в первые 10 суток.
У больных инфарктом миокарда повышается активность фермента в первые 8 - 10 часов после начала приступа, максимума к 24 - 36 часам – (ЛДГ - 1, ЛДГ - 2)
Увеличению активности ЛДГ способствует прием алкоголя, некоторых лекарств. препаратов (анаболических стероидов, тестостерона, обезболивающих препаратов, сульфониламида, кодеина,и др.преп.)
|
|
|
