 |
Спектрофотометрическое определение каротинов в моркови
|
|
|
|
Цель работы: Определение каротинов глюкозы в моркови.
α, β и γ-каротины являются провитаминами витамина А.
По химическому строению каротины характеризуются триметилциклогексениловых циклов, скрепленных между собой цепью из 22 атомов углерода.
Каротины содержатся в моркови, репе, салате, листьях крапивы и многих плодах и фруктах. Наличие в их моллекулах сопряженных двойных связей обуславливает характерное ярко-желтое окрашивание этих соединений. Попадая в организм человека, каротины под влиянием фермента каротиназы, превращаются в витамин А (ретинол).
Определение каротинов основано на их экстракции органическим растворителем и фотометрии экстракта на длине волны 470 нм.
Аппаратура и реактивы
Спектрофотометр или фотоколориметр;
Стандартный раствор каротина в хлороформе;
Хлороформ.
Порядок выполнения работы
- Ознакомление с работой и устройством прибора по инструкции по эксплуатации прибора.
- Подготовка пробы для анализа.
- Определить оптическую плотность проб и стандартных растворов каротина.
- Определить процентное содержание каротина в моркови (или других овощах его содержащих).
Подготовка прбы к анализу
Отобранную морковь измельчают. Навеску 25 г измельченной моркови помещают в плоскодонную колбу на 250 мл и заливают 100 мл хлороформа. Встряхивают на аппарате для встряхивания проб в течении 30 мин. Полученную смесь фильтруют через складчатый фильтр в мерный цилиндр с протертой пробкой. Отмечают объем V1 хлороформеного экстракта.
Фотометрирование хлороформного экстракта
На спектрофотометре выставляют длину волны 470 нм. В рабочую кювету наливают хлороформеный экстракт, в сравнительную хлороформ. Выставляют ноль оптической плотности по хлороформу, затем фотометрируют хлороформеный экстракт. Записывают значение оптической плотности А1.
|
|
|
Градуировка прибора
1 г каротина помещают в мерную колбу на 100 мл, растворяют в 30-40 мл хлороформа, доводят до метки хлороформом и ставят на 30 мин. в темное место. Фотометрируют раствор каротина и определяют его оптическую плотность. Из исходного раствора – каротина готовят новый раствор в хлороформе такой концентрацией C2, чтобы его оптическая плотность А2 не отличалась от А1 более чем на 30%. Такой способ называется методом одноточечной калибровки.
Определение процентного содержания каротина
Процентное содержание каротинов в моркови определяют по формуле:
, % (1)
Контрольные вопросы
- Выбор длины волны, светофильтра, длины кюветы для измерения концентрации веществ.
Литература
1. Методическое пособие по физико-химическим методам анализа. Орел ГТУ, 2001.
2. Цитович И.К. Курс аналитической химии. – М.: Высшая школа, 1994.
3. Васильев В.П. Аналитическая химия, ч.2. Физико-химические методы анализа. М.: Высшая школа, 1994.
4. Дорохова Е.П., Прохорова Г.В. Аналитическая химия. Физико-химические методы анализа/ Под ред. О.М. Петрухина. – М.: Химия, 1987.
5. Практикум по физико-химическим методам анализа/ Под ред. О.М. Петрухина. – М.: Химия, 1987.
Лабораторные работы по хроматографическому анализу
Лабораторная работа №1
Разделение и обнаружение ионов методом бумажной хроматографии
Цель работы: Приобретение навыков разделения и обнаружения ионов методом бумажной хроматографии.
Для разделения смесей катионов методом бумажной хроматографии используют различие в значении Rr при разделении катионов между подвижной и неподвижной (водой адсорбированной на бумаге) и подвижной(смесью ацетона с соляной кислотой фазами.
|
|
|
Аппаратура и реактивы
Стеклянный циллиндр с крышкой;
Хроматографическая бумага 20х2 см (можно фильтровальная, с расположением волокон);
Катион Реагент
CO2+ Тиацианат калия KCNS (нас.)
Ni2+ Диметилглиоксим, аммиак (пары)
Cu2+ Гексоцианоферрат (II) калия, 10% раствор
Pb2+ Иодид калия, 10% раствор
Zn2+ Дитизон, 1% раствор в хлороформе
Bi3+ Смесь 8-оксихинолина и иодида калия
Al3+ Ализарин, аммиак (пары)
Cd2+ Сульфид натрия
Растворитель-смесь (по объему) HCl (конц.) – 8%, ацетона – 87% и воды – 5%.
Раствор KOH, 1,25 моль/л;
Конические колбы, водяная баня, бюретки, мерные циллиндры, песочные часы (1 мин).
Порядок выполнения работы
В стеклянный цилиндр с крышкой наливают 10-15 мл растворителя. На полоске хроматографической бумаги длиной 20 см и шириной 2 см проводят стартовую линию на расстоянии примерно 2 см от края, на которую в центре капилляром наносят каплю исследуемого раствора так, чтобы диаметр пятна не превышал 2-3 мм. Пятно обводят карандашом и высушивают над песчаной баней. Эту операцию повторяют 2-3 раза.
Полоску бумаги с нанесенным раствором опускают в цилиндр так, чтобы ее конец был погружен в раствор (бумажная полоска не должна касаться стенок цилиндра). При комнатной температуре время хроматографирования составляет 1,5-2 ч. После того как растворитель отойдет от линии старта не менее, чем на 10 см, процесс прекращают, полоску бумаги вынимают из циллиндра и тщательно высушивают над песчаной баней. Измеряют расстояние Д между стартовой линией и фронтом растворителя по величине Rf, вычисляют высоту подъема l зоны каждого катиона из заданной комбинации.
| Катион | Ni3+ | Al3+ | Co2+ | Pb2+ | Cu2+ | Zn2+ | Cd2+ | Bi2+ | Fe3+ |
| Rf | 0,13 | 0,15 | 0,54 | 0,70 | 0,77 | 0,94 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
Для обнаружения катиона капилляром с реагентом прикасаются к участку хроматограмы на высоте размещения зоны данного компонента. Появление характерной окраски подтверждает присутствие катиона в исследуемом растворе.
Контрольные вопросы
- Для каких целей применяется распределительная хроматография?
- Что в данной работе служит подвижной фазой?
Литература
1. Методическое пособие по физико-химическим методам анализа. Орел ГТУ, 2001.
|
|
|
2. Цитович И.К. Курс аналитической химии. – М.: Высшая школа, 1994.
3. Васильев В.П. Аналитическая химия, ч.2. Физико-химические методы анализа. М.: Высшая школа, 1994.
4. Дорохова Е.П., Прохорова Г.В. Аналитическая химия. Физико-химические методы анализа/ Под ред. О.М. Петрухина. – М.: Химия, 1987.
5. Практикум по физико-химическим методам анализа/ Под ред. О.М. Петрухина. – М.: Химия, 1987.
Лабораторная работа №2
|
|
|
