Вопрос 3. Накопительные культуры , принцип элективности.

Выделение чистой культуры данного микроорганиз­ма будет успешным, если он присутствует в смешанной популяции в достаточно высокой пропорции. Микроор­ганизм легко выделить, если он количественно преоб­ладает в смешанной популяции. Разработанные методы накопления имеют целью добиться увеличения относи­тельного количества данного организма благодаря соз­данию лучших условий для его роста и выживания по сравнению с другими или путем пространственного от­деления его от других членов популяции. К физическим методам, которые могут быть использованы в данном случае, следует отнести регуляцию роста температурой, тепловую обработку, ультразвуковую обработку и уль­трафиолетовое облучение, приводящие к гибели или по­давлению роста других организмов, присутствующих в популяции. Можно также использовать преимущества в некоторых физических свойствах изучаемого микроор­ганизма, таких, как его размеры и подвижность; это позволяет в значительной мере отделить данный орга­низм от других в популяции. В химических методах ис­пользуют токсичные вещества, которые убивают или подавляют рост оставшейся части популяции, не влияя на выделяемый микроорганизм. Кроме того, эти веще­ства могут быть источниками питания, используемыми преимущественно отдельными бактериями в смешанной популяции. Биологические методы включают использо­вание специфических хозяев для выделяемого организ­ма, а также преимуществ некоторых патогенных свойств микроорганизма (например, его инвазивность), которы­ми не обладают другие представители популяции. Во многих случаях для получения максимального эффекта накопления сочетают физические, химические и био­логические методы.

Как правило, накопительные культуры получают в закрытых системах, т. е. микроорганизмы выращивают в обычных периодических (стационарных) условиях в колбах или пробирках, где концентрация питательных веществ и продуктов метаболизма постоянно изменяет­ся в процессе их роста. Для получения накопительных культур используются также открытые системы. Напри­мер, с помощью хемостата можно обеспечить постоянст­во окружающей среды для бактерий, непрерывно пода­вая питательные вещества в концентрации, лимитирую­щей рост, и удаляя продукты метаболизма. Изменяя скорость разбавления среды в хемостате, можно конт­ролировать концентрацию питательных веществ, лими­тирующих рост. В свою очередь это может избиратель­но влиять на скорость роста различных организмов в смешанной бактериальной культуре, в результате чего один или другой организм смешанной популяции начи­нает количественно преобладать.

Из накопительных культур бактерии обычно выде­ляют путем их пространственного отделения от других форм на твердой среде, где они растут в виде колоний. Для микроорганизмов, не растущих на твердых сре­дах, можно использовать метод предельного разведения, последовательно перенося клетки в отдельные пробирки с жидкой средой. Поскольку обычные методы выделе­ния не дают абсолютной гарантии чистоты получаемых культур, некоторые исследователи применяют более сложные приемы, с помощью которых отдельную бак­териальную клетку выделяют из смешанной популяции, используя для получения клона микроскопический конт­роль.

Билет № 13

Вопрос 1. строение прокариот.

Размеры и форма клеток

Большинство прокариот — одноклеточные формы. Величина клеток многих прокариот находится в пределах 0,2—10,0 мкм. Од­нако среди них есть «карлики» (примерно 0,1 мкм — трепонемы, микоплазмы) и «гиганты» (длиной до 100 мкм — АскготаИит, Масготопаэ). Формы клеток бактерий не отличаются большим разнообразием. Это чаще всего палочки разной длины, сферические клетки (кокки), а также извитые формы — вибрионы, спириллы и спирохеты. Обнаружены виды с треугольными, квадратными и плоскими (тарелкообразными) клетками, некоторые имеют отроет-, ки-простеки (рис. 1—7).

Тип группирования клеток иногда "помогает определить систе­матическую принадлежность бактерий. Они могут быть одиночны­ми, объединяться в пары, короткие и длинные цепочки правильной (стрептококки) и неправильной (стафилококки) формы, образовы­вать пакеты из 4, 8 и более клеток (сардины), формировать ро­зетки и сети. Значительное число бактерий из актиномицетной группы образуют мицелий. Известны также многоклеточные про­кариоты, образующие трихомы, прямые и ветвящиеся (рис. 8— 13).

Строение клеток

Большинство прокариот имеет ригидную клеточную стенку, под которой расположена цитоплазматическая мембрана. Состав и строение клеточной стенки — важный систематический признак, по которому прокариоты подразделяют на следующие группы: грам-положительные, грамотрицательные и не имеющие клеточной стенки. Своеобразным строением и составом клеточной стенки характеризуются археи. Грамположительные бактерии отличаются от храмотрицательных большим (до 40 раз) содержанием муреина (пептидогликана) в клеточной стенке и отсутствием внешней мем­браны. Археи муреина не синтезируют, но некоторые образуют псевдомуреин.

У многих бактерий на поверхности находят ворсинки (фимбрии, пили), а подвижные формы часто имеют жгутики. На поверхности клеточных стенок многих прокариот можно обнаружить слизистые капсулы различной толщины. Они чаще всего полисахаридной, но бывают и гликопротеидной или полипептидной природы.

Прокариоты характеризуются сравнительно простой внутриклеточной организацией и не содержат автономных органелл, хотя многие бактерии имеют включения. Среди них в первую очередь следует отметить различного рода внутриклеточные мембранные пузырьки, образованные в результате инвагинации цитоплазмати-ческой мембраны. Развитая сеть внутрицитоплазматических мем­бран характерна для фототрофных прокариот (хроматофоры, тила-коиды), нитрифицирующих и метанокисляющих бактерий. Некото­рые клетки образуют газовые вакуоли (аэросомы), окруженныебелковой мембраной, выполняющие у водных организмов роль ре­гуляторов плавучей плотности. Многие бактерии откладывают внутриклеточно запасные вещества (полисахариды, поли-р-оксибу-тират, полифосфаты, серу). Отдельные виды спорообразующих бактерий иногда имеют параспоральные тельца белковой природы.

Вопрос 2. Поступление питательных веществ в бактериальную клетку.

Поступление воды и растворенных в ней питательных веществ из окружающей среды внутрь микробной клетки, а также выход продуктов обмена происходит через клеточную стенку, капсулу и слизистые слои. Капсула и слизистые слои представляют собой достаточно рыхлые образования, и они не оказывают значительного влияния на транспорт веществ тогда как клеточная стенка может служить существенным барьером для поступления питательных соединений в клетку.

Активную роль в процессе поступления в клетку питательных веществ принадлежит цитоплазматической мембране. Последняя должна быть проницаемой для питательных веществ и кислорода, поступающих в клетку, а также для отбросов, выходящих наружу, что обеспечивает нормальную жизнедеятельность клетки микроорганизма. Поступление воды и растворенных в ней веществ через цитоплазматическую мембрану – динамический процесс: живая микробная клетка никогда не находится в равновесии с веществами окружающей среды, проходящими через ее мембрану.

Выделяют четыре различных механизма, с помощью которых вещества из окружающей среды проходят через цитоплазматическую мембрану:

- пассивная диффузия

- облегченная диффузия

- активный транспорт

- перенос групп

При пассивной диффузии транспорт вещества происходит через цитоплазматическую мембрану под действием разности концентраций (в случае неэлектролитов) или электрических потенциалов (в случае ионов) по обе стороны мембраны. Экспериментами показано, что за исключением воды, только кислород и некоторые ионы проходят через цитоплазматическую мембрану путем пассивной диффузии. Скорость такого переноса веществ весьма незначительна.

Транспорт большинства растворенных веществ осуществляется через мембрану с помощью специальных механизмов переноса. Это молекулы – переносчики, циркулирующие между внешним и внутренним пограничными слоями цитоплазматической мембраны. Считают, что эти расположенные в мембране переносчики связывают молекулы растворенных веществ на ее внешней стороне и транспортируют и к внутренней, откуда они поступают в цитоплазму без изменения. Такие связанные с цитоплазматической мембраной переносчики, представляющие собой субстратспецифические связывающие белки, называются пермеазами. Известны два типа процессов транспорта растворенных веществ, осуществляемых переносчиками. Первый тип – облегченная диффузия. Движущей силой этого процесса является разница в концентрации какого-либо вещества по обе стороны мембраны. Молекула вещества соединяется с молекулой-переносчиком у наружной поверхности мембраны, и образовавшийся комплекс диффундирует через мембрану к ее внутренней стороне. Там он диссоциирует, и освобожденное вещество оказывается внутри клетки. Затем переносчик диффундирует обратно к поверхности и сразу может присоединить к себе другую молекулу вещества. Облегченная диффузия не требует расхода энергии, если наружная концентрация вещества выше внутренней и вещество перемещается вниз по химическому градиенту. Скорость ее зависит от концентрации веществ в наружном растворе. Предполагают, что выход продуктов обмена веществ из микробной клетки происходит по типу облегченной диффузии при участии переносчиков.

Второй тип называется активным транспортом. В этом случае растворенные вещества переносятся в клетки микроорганизмов вверх по химическому градиенту (или против градиента концентрации). Считают, что большинство веществ проникает в клетку микроорганизма в результате активного транспорта. Такой транспорт веществ нуждается в энергии АТФ, получаемый в результате дыхания или брожения. Необходимость использования энергии для поддержания активного транспорта объясняется теми изменениями, которые претерпевает переносчик в своей работе, - когда обращен к внешней стороне мембраны, он обладает высоким сродством к субстрату, а когда обращен к ее внутренней поверхности – низким сродством к субстрату. Возможность транспортировать вещества против градиентов концентрации часто используется клетками бактерий для получения этих веществ из окружающей среды. Где их концентрация очень мала, что обычно для природных условий. При отсутствии источников энергии накопления веществ внутри цитоплазмы не происходит.

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: