 |
Цели и задачи постановки биопробы на лабораторных животных
|
|
|
|
Тема № 3 Инфекция и иммунитет.
ЗАНЯТИЕ № 6.
ИНФЕКЦИЯ. НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ИММУНИТЕТ
Цель занятия: изучить роль микро- и макроорганизма в развитии инфекционного процесса; условия возникновения инфекционного процесса; значение свойств микроорганизмов. Изучить виды и формы иммунитета, неспецифические механизмы резистентности.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
- Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Механизмы передачи инфекции. Формы инфекционного процесса.
- Стадии развития и характер протекания инфекционной болезни.
- Патогенность и вирулентность бактерий. Характеристика факторов патогенности.
- Понятие об иммунитете, виды иммунитета.
- Неспецифические факторы защиты организма человека:
• механические барьеры;
• физико-химическая защита (рН среды, ферментативная активность
лизоцима, пепсина и др.);
• клеточные факторы защиты (фагоцитоз, фагоцитирующие клетки и их
классификация). Механизм и фазы фагоцитоза. Завершенный и
незавершенный фагоцитоз;
• гуморальные неспецифические факторы защиты (система комплемента,
β-лизины, интерфероны, лейкины, противовирусные ингибиторы,
лизоцим и др.).
6. Иммунобиологическое значение интерферонов. Их получение,
использование.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
определять факторы патогенности (вирулентность) микробов; дать оценку значимости факторов неспецифического иммунитета.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:
о биологических методах исследования и их применении для изучения инфекционного процесса; о препаратах, используемых для иммунокоррекции.
Работа № 1. Методы определения факторов патогенности и вирулентности микроорганизмов на примере золотистого стафилококка
|
|
|
Цель: изучить методы определения факторов патогенности и вирулентности золотистого стафилококка (см. теоретическую справку)
Факторы патогенности золотистого стафилококка
а) Зарегистрировать результат плазмокоагулазной активности золотистого стафилококка при посеве на цитратную плазму крови. Сделать вывод.
«О» - посев S. aureus на цитратную кроличью плазму крови.
«К» - цитратная кроличья плазма
«К» «O»
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
 |
Вывод:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
 | |
| |
 | |
|
б) Зарегистрировать результат фибринолитической активности золотистого стафилококка при посеве на свернутую сыворотку. Сделать вывод.
«К» - свернутая сыворотка
«О» - посев культуры
 |  |
«К» «О»
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
в) Зарегистрировать результаты опыта по выявлению лецитиназной активности у золотистого стафилококка при посеве на желточно-солевой агар (ЖСА).
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
г) Зарегистрировать результат опыта по выявлению гемолитической активности у золотистого стафилококка при посеве на кровяной агар. Сделать вывод.
|
|
|
 |
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 2. Цели и задачи постановки биопробы на лабораторных животных
Цель: ознакомиться с техникой заражения белых мышей. Обратить внимание на способы фиксации лабораторного животного (фильм).
Цели и задачи постановки биопробы на лабораторных животных
Биопробу на лабораторных животных ставят с целью воспроизведения клиники заболевания, патогенеза, выявления экзотоксинов бактерий, определения типа токсина, получения чистых культур микроорганизмов, определения DLM, LD50, DCL, для испытания новых препаратов, для контроля выпускаемых медицинских препаратов на безвредность, реактогенность и иммуногенность.
Наиболее широко в микробиологической практике используют кроликов, морских свинок, белых мышей, крыс. Лабораторные животные являются донорами, у которых берут кровь для получения сывороток, плазмы, эритроцитов, лейкоцитов, необходимых при постановке многих серологических реакций и для приготовления кровяных питательных сред.
В зависимости от цели исследования пользуются различными методами заражения: внутрикожным, подкожным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, пероральным или интраназальным. При выборе способа заражения следует учитывать, прежде всего, механизм распространения возбудителя инфекции (аэрогенный, фекально-оральный, трансмиссивный, контактный и др.) и тропизм возбудителей.
Внутрикожный способ заражения. При этом способе применяют тонкие (№ 18 - 20) острые иглы с небольшим скосом. Кожу в месте введения материала растягивают I и II пальцами левой руки, правой рукой вводят иглу под очень острым углом, почти касаясь кожи. Конец иглы должен быть виден через эпидермис: при введении материала эпидермис приподнимается в виде четко ограниченного бугорка, кожа над ним становится прозрачной и пористой, вследствие чего ее сравнивают иногда с лимонной корочкой. Материал вводят в объеме до 0,1 мл обычно в кожу спины или живота.
|
|
|
Подкожный способ заражения. Кожу в месте введения материала берут у ее основания, приподнимают I и II пальцами левой руки. Иглу шприца вкалывают снизу образовавшейся складки. Проколов кожу и пройдя вглубь на несколько миллиметров, иглу отклоняют вправо или влево и затем медленно вводят материал, содержащийся в шприце. Изменять направление иглы под кожей рекомендуется для того, чтобы введенное вещество не выступало через прокол кожи наружу. Затем складку кожи отпускают, на место укола накладывают ватный тампон, смоченный спиртом или спиртовым раствором, а иглу быстро вынимают. Наиболее удобными местами для подкожного введения материала у кроликов и морских свинок являются область спины и боковые поверхности несколько ниже подмышечных впадин, у крыс и мышей - область спины, крестца и затылка. Количество жидкости, вводимой подкожно, не должно превышать 30 мл - для кроликов, 15 мл - для морских свинок, 10 мл - для крыс и 1 мл для мышей.
Внутримышечный способ заражения. Выбирают участок тела с наиболее развитым мышечным слоем. У кроликов и морских свинок, крыс и мышей таким местом является наружная верхняя треть бедра задней лапы. Захватывают I и II пальцами левой руки толстую мышечную складку и вводят иглу почти под прямым углом вглубь мышц. Объем жидкости, допустимый для внутримышечного введения, составляет для кроликов 8 мл, для морских свинок - 5 мл, для крыс 3 мл, для мышей - 0,5 мл.
Внутрибрюшинный способ заражения. Помощник держит животное вниз головой. В этом положении кишечник смещается в сторону диафрагмы, что в значительной мере уменьшает возможность его повреждения в момент прокола. У животных (за исключением мышей) в нижней трети живота, несколько отступя от средней линии, делают скальпелем или остроконечными ножницами надсечку кожи длиной 2 -3 мм и через нее вводят притуплённую иглу, держа шприц перпендикулярно к брюшной стенке. Преодолевая сопротивление, очень осторожно, буравящими движениями иглу продвигают вглубь. Чувство "провала", исчезновение ощущения сопротивления на пути говорят о проникновении иглы в брюшную полость. После этого иглу переводят в вертикальное положение и вводят содержащийся в шприце материал в полость брюшины. Внутрибрюшинно можно вводить до 30 мл жидкости кроликам, до 10 мл морским свинкам, до 5 мл - крысам, до 2 мл - мышам.
|
|
|
Заражение через пищеварительный тракт. Наиболее простым и естественным является способ заражения через пищевые продукты. Инфекционный материал подмешивают к пище или питью животного. Однако этот метод в лабораторной практике нашёл ограниченное применение в связи с трудностью дозирования применяемого препарата. Поэтому для заражения животных чаще используют шприц, игла которого имеет незначительный изгиб и утолщение на конце в виде оливы.
Интраназальное заражение. Животному прикладывают к носу кусочек ваты, смоченной эфиром или хлороформом. К заражению приступают после того, как у животного появится состояние легкого наркоза. Зараженный материал с помощью шприца вводят в нос небольшими каплями на глубину 1-1,5 мм мышам, 2-3 мм крысам, 4 мм кроликам и морским свинкам. Чтобы не поранить слизистые оболочки, для введения материала берут абсолютно тупую иглу. Фиксация мышей
Мышь пускают по столу, придерживая ее I и II пальцами правой руки за кончик хвоста. Когда, продвигаясь в каком - либо направлении, мышь натянет хвост, быстрым движением левой руки хватают ее за складку кожи в области затылка, ближе к ушам, чтобы она не могла поворачивать голову. Подняв мышь над столом, помощник держит ее на весу одной рукой за хвост, другой - за складку кожи на затылке, несколько растягивая в положении, удобном для экспериментатора.
Работать с мышами можно и без помощника, фиксируя их левой рукой: I и II пальцами левой руки животное захватывают за складку кожи в области затылка, а остальными 3 пальцами, прижав их к запястью, придерживают хвост и кожу в области крестца. При таком способе фиксирования правой свободной рукой можно производить различные операции.
Теоретическая справка
|
|
|
