 |
Работа № 1. Реакция агглютинации
|
|
|
|
Цель:
1. Определить родовую принадлежность выделенной чистой культуры в ориентировочной РА на стекле с поливалентными сыворотками: сальмонеллезной ABCDE, шигеллезной, иерсиниозной (сероиндикация). Поставить, учесть, оценить результат РА (см. теоретическую справку)
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм:
Постановка:
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Цель:
2. Определить вид исследуемой культуры в развернутой РА на стекле с
моновалентными сыворотками (сероидентификация). Поставить, учесть, оценить результат РА
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм (схема см. выше)
Постановка:
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Цель:
3. Учесть результат РА с дизентерийным диагностикумом с целью выявления антител в парных сыворотках пациента (серодиагностика). Парные сыворотки - это сыворотки от одного и того же больного, взятые в начале болезни и через одну две недели с целью выявления нарастания титра антител. Сделать вывод.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм (см. выше)
Постановка:
 |  |  |  |  |  | | |||||||||
 |
|
|
|
1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 КС КД
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выполните задания для самоконтроля:
Агглютинация-это__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ингредиенты для постановки РА:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
Феномен реакции _____________________________________________________________
Работа № 2. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА)
Цель:
1. Учесть результат РПГА с эритроцитарным сальмонеллезным диагностикумом для определения специфических АТ в парных сыворотках больного
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм:
 |
Постановка:
 |  |  |  |  |  |  | | ||||||||
| | | | | | | |
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
 | |||
 |
Выполните задания для самоконтроля:
Ингредиенты для постановки РПГА:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
Феномен реакции_____________________________________________________________
|
|
|
Работа № 3. Реакция преципитации
Цель:
1. Поставить РП для выявления сибиреязвенного Аг в экстракте из шерсти животного. Оценить результат, сделать вывод.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм:
Постановка:
Постановка:
 |  |
«К» «О»
Результат:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2. Разобрать принцип постановки РП в геле. Сделать вывод.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм (см. выше)
Постановка:
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выполните задания для самоконтроля:
Реакцию преципитации ставят в том случае, если____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ингредиенты для постановки РП:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
Феномен реакции____________________________________________________________
Теоретическая справка
Работа № 1
Реакция агглютинации
Агглютинация - это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического раствора хлорида натрия). Группы склеенных бактерий (клеток) называют агглютинатом. Для реакции агглютинации необходимы следующие компоненты:
1. Антитела (агглютинины), которые находятся в сыворотке больного или иммунного животного.
2. Антиген - взвесь живых или убитых микробов, эритроцитов или других клеток.
3. Изотонический (0,9%) раствор хлорида натрия.
Реакцию агглютинации для серодиагностики применяют при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), при бруцеллезе (реакция Райта и Хеддлсона), туляремии и т.д. Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном известный микроб. При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко применяют для диагностики кишечных инфекций, коклюша и др.
|
|
|
Методы постановки РА
 | |
Ориентировочная РА на стекле
Развернутая РА
(объемный метод)
Реакция коагглютинации
Развернутая РА на стекле (сероидентификация)
Реакция агглютинации на стекле. На обезжиренное предметное стекло наносят две капли специфической (адсорбированной) сыворотки и каплю изотонического раствора хлорида натрия. Неадсорбированные сыворотки предварительно разводят в соотношении 1:5 - 1:100. Капли на стекло необходимо наносить так, чтобы между ними было расстояние. Культуру петлёй или пипеткой тщательно растирают на стекле, а потом вносят в каплю изотонического, раствора хлорида натрия и в одну из капель сыворотки, размешивая в каждой до образования гомогенной взвеси. Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является контролем сыворотки.
Внимание! Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю изотонического раствора хлорида натрия, которая является контролем антигена. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 мин. Если контроль сыворотки остаётся прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерная муть, а в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья агглютината на фоне прозрачной жидкости, результат реакции считается положительным.
 |
Диагностическая Физиологический
сыворотка +культура раствор + культура
Развёрнутая реакция агглютинации (объемный метод). Готовят последовательные, чаще всего двукратные, разведения сыворотки. Метод называют объёмным. Для определения титра антител в сыворотке крови возьмите 6 пробирок. В первую пробирку налейте 1 мл исходного разведения сыворотки 1:50 и во все 6 пробирок градуированной пипеткой внесите по 1 мл физиологического раствора. В первой пробирке получится разведение сыворотки 1:100 при объёме 2 мл. Из первой пробирки 1 мл перенесите во вторую пробирку, где разведение станет 1:200. Так сделайте ряд последовательных разведений сыворотки в 5 первых пробирках (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Из пятой пробирки 1 мл вылейте в дезинфицирующий раствор. Во все 6 пробирок добавьте по 2 капли диагностикума. Шестая пробирка является контролем культуры, так как содержит только физиологический раствор и диагностикум.
|
|
|
| Ингредиенты | номер пробирки | ||||||
| контроль сыворотки | контроль диагности-кума | ||||||
| Физиологический | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
| раствор | |||||||
| Сыворотка больного в | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | - |
| разведении 1:50 | |||||||
| Диагностикум (капли) | - | ||||||
| Разведение сыворотки | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | 1:100 | - |
Такой контроль необходим для исключения спонтанной агглютинации культуры. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при температуре 37°С на 2 часа, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре, после чего производят учёт результатов реакции агглютинации. При постановке реакции агглютинации с сыворотками детей первых месяцев жизни в связи с функциональной неполноценностью антителообразования необходимо выявление более низких титров антител, что учитывается при разведении сыворотки. Исходное разведение сыворотки берут 1:25. В первой пробирке получают разведение 1:50, затем 1:100 и т.д.
При положительном результате реакции в пробирках видны склеевшиеся клетки в виде зерен или хлопьев на фоне прозрачной жидкости. Агглютинат постепенно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется. Контроль антигена равномерно мутный.
По характеру осадка различают мелко- и крупнозернистую (хлопьевидную) агглютинацию. Мелкозернистая агглютинация получается при работе с О-сыворотками. Крупнозернистая - при взаимодействии подвижных микробов со жгутиковыми Н-сыворотками. Она наступает быстрее мелкозернистой, образующийся при этом осадок очень рыхлый и легко разбивается.
Интенсивность реакции выражается следующим образом:
++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный;
+++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный;
++ осадок еще меньше, жидкость мутнее. Результат реакции сомнительный;
на дне пробирки незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции;
|
|
|
- осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции
Работа № 2
|
|
|
