 |
Реакция преципитации в геле
|
|
|
|
Иммунодиффузия в агаровом геле растворов антигенов и антител, залитых в разные лунки, навстречу друг другу в случаях соответствия их специфичности приводит к образованию специфического преципитата в виде полосок и дуг в местах встречи реагентов.
Как правило, в центральную лунку заливают стандартный раствор антигена, а в периферические - испытуемые сыворотки. В одну из периферических лунок заливается стандартная иммунная сыворотка соответствующей специфичности, а в другую -нормальная сыворотка для контроля. Проводится инкубация во влажной камере при 37°С в течение 24 ч. Учитывают количество и ширину полос преципитации между центральной лункой с раствором антигена и лунками с исследуемыми сыворотками.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
Ситуационные задачи:
Что изображено на схеме?
Какой материал можно исследовать?
Описать суть метода.
Применение в медицине.
 | |||
 | |||
 | |||
| |||
| |||
|
Что изображено на схеме?
Какой материал можно исследовать?
Какой метод исследования?
Описать суть метода.
Применение в медицине.
| |
| |
| |
| |
| |
|
3) Что изображено на схеме?
Какой материал можно исследовать?
Какой метод исследования?
Описать суть метода.
Применение в медицине.
| |||
| |||
| |||
| |||
| |||
|
Что изображено на схеме?
Какой материал можно исследовать?
Какой метод исследования?
Описать суть метода.
|
|
|
Применение в медицине.
| |
| |
| |
| |
| |
|
Подпись преподавателя_________________________________________________________
Дата____________
ЗАНЯТИЕ № 10
ИММУНИТЕТ. ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ (ПРОДОЛЖЕНИЕ)
Цель: изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки РСК, РИФ, ИФА, бактериолиза.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
- РСК. Механизм, компоненты, применение.
- РИФ. Механизм, компоненты, применение.
- ИФА, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· интерпретировать результаты серологических исследований.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:
о существовании различных модификаций серологических реакций, усиливающих их чувствительность (информативность).
Работа № 1. Реакция связывания комплемента (РСК)
Цель:
1. Учесть результат РСК, поставленной с целью идентификации возбудителя.
Направление:
Ингредиенты:
I Опытная система:
1)
2)
3)
4)
Через 30 минут:
II Индикаторная система:
1)
2)
Механизм:
Постановка:
| Ингредиенты | Опыт | КАТ | КАГ | КС | Индикаторная система - ГС |
| АГ | |||||
| АТ | |||||
| С | |||||
| Физ. раствор | |||||
| ЭР (АГ) | |||||
| ГС (АТ) |
 |  |  |  | |
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Цель:
- Прочитать результат РСК, с целью выявления комплементсвязывающих АТ в парных сыворотках больного
Направление:
Ингредиенты:
I Опытная система:
1)
2)
3)
4)
Через 30 минут:
II Индикаторная система:
|
|
|
1)
2)
Механизм (см. схему выше):
Постановка:
I неделя
 |  |  | |  |  |  | |
II неделя
 |  |  | |  |  |  | |
1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 КС КД КГС
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выполните задания для самоконтроля:
Ингредиенты для постановки РСК:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
4.___________________________________________________________________________
5.___________________________________________________________________________
Результатом первой фазы РСК является_____________________________________________________________________
Результатом второй фазы РСК является_____________________________________________________________________
Феномен реакции _____________________________________________________________
Работа № 2. Реакция иммунной флюоресценции (РИФ)
А) Прямой метод РИФ
Цель:
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм:
Постановка:
 |
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Непрямой метод РИФ
Цель:
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
4)
Механизм:
Постановка:
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выполните задания для самоконтроля:
Ингредиенты для постановки прямой РИФ:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
Иммунные сыворотки в РИФ обрабатываются______________________________________________________________
Ингредиенты для постановки непрямой РИФ:
|
|
|
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
4.___________________________________________________________________________
Феномен реакции_____________________________________________________________
Работа № 3. Иммуноферментный анализ (ИФА)
А) Прямой ИФА
Цель:
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
4)
5)
Механизм:
Постановка:
 |  |  |  | | |
«О» «КН» «КП»
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Непрямой ИФА
Цель:
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
4)
5)
Механизм:
Постановка:
I неделя
 | | | | | | | | | |
II неделя
 | |||||||||||||||||||
 | |||||||||||||||||||
 | | | | | | | | ||||||||||||
1/14 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 «КН» «КП»
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выполните задания для самоконтроля:
Иммуноферментный анализ основан на:
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ингредиенты для постановки ИФА:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
4.___________________________________________________________________________
Феномен реакции_____________________________________________________________
Теоретическая справка
Реакция иммунного лизиса
Антитела могут вызывать лизис, т.е. растворение клеток, только при участии комплемента (С). Следовательно, все реакции с участием С называются реакциями иммунного лизиса. К ним относят: РСК, р. гемолиза, р. бактериолиза.
|
|
|
Для реакции необходимы:
1. Антиген - микробы, эритроциты и другие клетки.
2. Антитела (лизины) - иммунная сыворотка, реже сыворотка больного. Бактериологическая сыворотка содержит антитела, лизирующие бактерии, гемолитическая - гемолизины, способствующие лизису эритроцитов, лизис спирохет вызывают спирохетолизины, клеток - цитолизины и т. д. Титр гемолитической сыворотки - ее наибольшее разведение, при котором происходит полный гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента 1:10.
3. Комплемент - неспецифический белок, содержащийся в сыворотке
человека и теплокровных животных. Больше всего комплемента в сыворотке морских свинок.
Эту сыворотку (смесь от нескольких животных) обычно используют в качестве комплемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко разрушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не позже 1-2-го дня после получения. Консервированный комплемент (на 10 мл сыворотки 0,2 г борной кислоты и 0,3 г сульфата натрия) сохраняется при 4°С до 2 недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют изотоническим раствором хлорида натрия до первоначального объема, указанного на этикетке.
4. Изотонический раствор хлорида натрия.
Работа № 1
|
|
|
