 |
Экзаменационный билет № 11. 1.Электрофорез белков. Ацетатцеллюлозная пленка, гель, специальная бумага (носитель) помещается на рамку, при этом противоположные края носителя свисают в кюветы с буферным раствором
|
|
|
|
Экзаменационный билет № 11
1. Определение белковых фракций методом электрофореза на бумаге.
2. Определение активности липазы. Клиническое значение.
Эталоны ответов
1. Электрофорез белков
Ацетатцеллюлозная пленка, гель, специальная бумага ( носитель ) помещается на рамку, при этом противоположные края носителя свисают в кюветы с буферным раствором. На линию старта наносится сыворотка крови. Метод заключается в движении заряженых молекул белка по поверхности носителя под влиянием электрического поля. Молекулы с наибольшим отрицательным зарядом и наименьшим размером, т. е. альбумины, двигаются быстрее остальных. Наиболее крупные и нейтральные (γ -глобулины) оказываются последними.
На ход электрофореза влияет подвижность разделяемых веществ, находящаяся в зависимости от ряда факторов: заряд белков, величина электрического поля, состав растворителя (буферной смеси), тип носителя (бумага, пленка, гель).
Количество выделяемых фракций определяется условиями проведения электрофореза. При электрофорезе на бумаге и пленках ацетата целлюлозы в клинико-диагностических лабораториях выделяют 5 фракций (альбумины, α 1-, α 2-, β - и γ -глобулины), в то время как в полиакриламидном геле – до 20 и более фракций. При использовании более совершенных методов (радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и других) в составе глобулиновых фракций выявляются многочисленные индивидуальные белки.
2. Липаза – один из нескольких ферментов, которые вырабатываются в поджелудочной железе и входят в состав панкреатического сока. Амилаза расщепляет углеводы, протеазы – белки, а липаза расщепляет жиры. Из поджелудочной железы панкреатический сок, содержащий липазу, через панкреатический проток попадает в двенадцатиперстную кишку, где помогает переварить пищу.
|
|
|
В норме только небольшое количество липазы циркулирует в кровяном русле (из-за естественного обновления клеток поджелудочной железы). Когда происходит повреждение поджелудочной железы, как при панкреатите, или панкреатический проток блокируется камнем или опухолью, липаза начинает в больших количествах попадать в кровоток, а затем и в мочу.
Тест на липазу (часто вместе с тестом на амилазу – другой фермент поджелудочной железы) используется, чтобы диагностировать острый или хронический панкреатит и другие заболевания, затрагивающие поджелудочную железу.
Референтные значения 13-60 МЕ/л.
Экзаменационный билет № 12
1. Иммуноглобулины. Строение. Функции. Лабораторная диагностика.
2. Определение активности гамма-глутамилтрансферазы. Физиологические нормы. Клиническое значение.
Эталоны ответов
1. Иммуноглобулины (Ig) представляют собой гликопротеины с молекулярной массой от 150 до 1000 кДа. Мономер молекулы Ig состоит из 4 цепей: 2 одинаковых тяжелых цепей (Н, м. м. 50 кДа) и 2 одинаковых легких цепей (L, м. м. 25 кДа). Каждая цепь в свою очередь, состоит из доменов (м. м. 12, 5 кДа), соединенных дисульфидными мостиками (рис. ). Все 4 цепи образуют симметричную Y-образную структуру. Каждая молекула Ig имеет два одинаковых антиген(АГ)-связывающих N-концевых Fab-фрагмента (англ. Fragment antigen binding), соединенных с одним Fc-фрагментом (англ. Fragment cristalisable). Последний не участвует в связывании АГ, но может реагировать с рецепторами клеток иммунной системы и компонентами комплемента. N-концевой домен Fabфрагмента является АГ-специфичным и называется вариабельным (V). С этой областью связана константная область (С). Именно константные области Н-цепей, существенно отличаясь по аминокислотному составуу различных классов Ig, в конечном итоге определяют особые свойства каждого класса антител (АТ). В зависимости от строения константных областей Н-цепей Ig разделяются на классы (G, M, A, D и E) и подклассы.
|
|
|
Иммуноглобины класса G. У человека являются наиболее важными. Составляют основную массу иммуноглобулинов сыворотки крови и до 75 % всех Ig. В большом количестве появляются при вторичном иммунном ответе. Иммуноглобины класса G обеспечивают противоинфекционную защиту, связывают токсины, усиливают фагоцитарную активность, активируют систему комплемента, вызывают аглютинацию бактерий и вирусов. Они способны переходить через плаценту, обеспечивая новорожденному пассивный иммунитет.
Иммуноглобины класса А. Делят на 2 разновидности: сывороточные и секреторные. Первые из них находятся в крови (15-20 % всех Ig), вторые - в различных секретах. Соответственно этому сывороточный иммуноглобин А принимает участие в общем, иммунитете, а секреторный обеспечивает местный иммунитете, создавая барьер на пути проникновения инфекций и токсинов в организм.
Секреторный находится в наружных секретах - в слюне, слизи трахеобронхиального дерева, мочеполовых путей, молоке. Молекулы иммуноглобина А, присутствующие во внутренних секретах и жидкостях, существенно отличаются от молекул наружных секретов. Секреторный компонент, по всей видимости, образуется в эпителиальных клетках и в дальнейшем присоединяется к молекуле IgA.
Иммуноглобины класса Е. Принимают участие в нейтрализации токсинов, опсонизации, аглютинации и бактериолизисе, осуществляемом комплементом. К этому классу также относятся некоторые природные антитела, например к чужеродным эритроцитам. Содержание IgE повышается при инфекционных заболеваниях у взрослых и детей. Защитные свойства направлены преимущественно против гельминтов (нематод).
Иммуноглобины класса D. Представляют собой антитела, локализующиеся в мембране плазматических клеток, в сыворотке их концентрация невелика. Служат рецептором В-лимфоцитов. Их количество увеличивается при некоторых вирусных заболеваниях. Предполагают, что они участвуют в аутоиммунных процессах.
Иммуноглобины класса М. Участвуют в создании первичного иммунитета.
|
|
|
2. Гамма-глютамилтранспептидаза – фермент, который находится в клетках печени и желчевыводящих путей и является катализатором определенных биохимический реакций. В кровеносном русле она не содержится, только в клетках, при разрушении которых их содержимое попадает в кровь. В норме часть клеток обновляется, поэтому в крови обнаруживается определенная активность ГГТ. Если гибнет много клеток, ее активность может повышаться значительно.
Тест на ГГТ – самый чувствительный анализ в отношении застоя желчи – холестаза. Активность ГГТ при препятствии оттоку желчи, например при камнях в желчных протоках, повышается раньше, чем активность щелочной фосфатазы. Однако повышение это неспецифично, так как оно происходит при большинстве острых заболеваний печени и желчных ходов, например при остром вирусном гепатите или раке, и обычно такой результат не очень информативен при установлении конкретного заболевания или состояния, вызвавшего повреждение печени.
В отличие от других печеночных ферментов, производство ГГТ " запускается" алкоголем, поэтому у лиц, злоупотребляющих им, ее активность может быть повышена даже при отсутствии заболевания печени. Кроме того, выработка ГГТ стимулируется некоторыми лекарствами, включая фенобарбитал и парацетамол, поэтому на фоне их приема можно ожидать повышения ГГТ без повреждения печени.
ГГТ также содержится в почках, селезенке, поджелудочной железе, головном мозге, простате, и увеличение ее активности неспецифично только для нарушений печени.
Референтные величины в сыворотке здоровых взрослых людей у мужчин 10 -71 Ед/л, у женщин 6-42 Ед/л.
|
|
|
