Описание микроскопа и работы с ним. 1 страница
Стр 1 из 39Следующая ⇒ ББК 48 Б19 УДК 6, ^'М + 576. 8 (076. 5) Раздел первый Основы микробиологии После этого учащиеся учатся надевать спецодежду. Затем щ даватель показывает, а учащиеся практически осваивают мето^" ^^^менование приемы исследования животного, подозрительного по заболеванию феКЦИОННОЙ болеЗНЬЮ. болезни В заключение преподаватель объясняет принципы изоляции С ных и подозрительных по заболеванию животных и устройство из ия торов (на примере изолятора ветеринарной лечебницы, лечебно-с ТуляРе тарного пункта или на схеме, макете). Меры личной профилактики. При раб с патологическим материалом и больными животнь: внимание ветеринарного специалиста должно быть средоточено на двух основных моментах — предупред/ заражение людей и не допустить распространения воз»' дителя инфекции. Существует целый ряд инфекционн болезней животных, которыми может заразиться челор ка Такие болезни именуют зооантропонозами. К ним rf; *Ку-лихорадка надлежат: сибирская язва, туберкулез, лептоспироз, Сс 1 бруцеллез, бешенство, ящур, листериоз, туляремия, ро> свиней, Ку-лихорадка, чума верблюдов, стригущий л тай И др. {табл. 1). Лептоспироз
При уходе за больными животными; при обработке сырых животных продуктов, в особенности кожевенного сырья, шерсти; при уборке трупов; при употреблении в пищу мяса больных животных; через почву; при работе в лаборатории При употреблении в пищу сырого молока от больных коров и сырых яиц от больной птицы, при уходе за больными животными
При употреблении н Меры личной пропищу продуктом (и филмктики, вакцинация и ии/п-п, недопущение 50лезнь
| и пищу продуктов от ' Дуески О»mi. ных животных
При снятии шкурок грызунов и мелких млекопитающих; при употреблении в пищу мяса от больных животных; при употреблении воды из инфицированных водоемов; при укусе инфицированными кровососущими членистоногими При. употреблении в пищу продуктов (молока) от больных животных, при уходе за больными животными При купании в инфицированных водоемах, при употреблении в пищу продуктов от больных животных' При употреблении в цищу продуктов от больных животных или плохо обезвреженных овощей, выращенных в инфицированной почве; при уходе за больными животными При употреблении пищи и воды, инфицированных выделениями больных животных (особенно грызунов). Возможно заражение респираторным путем, а также при укусе насекомых При укусе больным животным, реже — при попадании инфициро; ванной слюны на поврежденную кожу или на слизистую оболочку глаз
При оказании помощи больным животным, при вскрытии трупов Меры личной профилактики, предохранение от укусов кровососущих членистоногих, вакцинация людей, недопущение в пищу продуктов от больных животных Меры личной профилактики; недопущение в пищу продуктов от больных животных Запрещение купания в инфицированных водоемах, обезвреживание продуктов из неблагополучных хозяйств. Меры личной профилактики, обезвреживание продуктов, в особенности ранних овощей Меры личной профилактики, обезвреживание продуктов питания и воды, предохранение Лот нападения насекомых Меры предосторожности при общении с животными, обработка по- кусов, антирабическая вакцинация Меры личной профилактики
11. Ящур При уходе за боль ными животными, при употреблении сырого молока от больных животных 12. Дерматомико- При соприкосновении зы (трихофи- с больными животными тия, микроспория) 13. Сап При соприкосновении с больными животными 14. Сальмонеллезы При употреблении в пищу сырых животных продуктов от больных животных 15. Контагиозный При соприкосновении пустулезный с больными животными дерматит (эк-
тима) При соприкосновении с больными грызунами, через инфицированных блох, при употреблении в пищу молока и мяса больных верблюдов, при обработке шерсти oi больных верблюдов При1 разделке тут, вскрытии трупов, при уходе за больными ж и вотными При соприкосновении с больной птицей, t. -ipn жение аэрогенным или алиментарным путем Меры личной профи лактики, кипячение или пастеризация молока в неблагополучных пунк тах Меры личной профи лактики £ Меры личной профилактики ) Кулинарная обр; |рчт- ка (обезвреживание) продуктов животного происхождения из неблагополучных пунктов Меры личной профилактики, особенно тщательное мытье и дезинфекции рук после работы с животными
Меры предосторожности и эндемических местностях, обезвреживание продуктом животного пропс ч< »/к пения, борьба с и. и » кпмымн; вакцинации Меры личной ирофи- лмктмкм Меи i. i шиной про* ЛИК I мни
Заражение человека этими Г> о. /и шнмп. k. ik видно мз таблицы, может произойти при клшшч<. ком «и мот ре животных и оказании им лечебной помоиш при искрытии трупов и взятии патологического m. i и pn i и /иш лабораторного исследования; при прон< " < ими ирииивок и диагностических исследований; при р. ниц» ( патологическим материалом в лабораториях, при < пирикоснове- нии с необезвреженным сырьем живо-i хождения (кожи, шерсть и т. п. ); при переработке мясных и молочных продуктов; при употреблении в пищу инфицированных продуктов животного происхождения. В организм человека патогенные микробы приникают через кожу при нарушении целости кожных покровов, главным образом рук, а также через слизистые оболочки рта, носовой полости, дыхательных путей, глаз и пищеварительного тракта. Для того чтобы предохранить себя и других от заражения инфекционной болезнью и не допустить ее распространения нужно соблюдать следующие меры предосторожности. 1. Люди, допускаемые к работе с патологическим материалом и больными животными, должны быть тщательно проинструктированы. 2. Все работы с больными животными и патологическим материалом выполняют только в защитной одежде. Комплект защитной одежды включает: халат (с завязками на спине и рукавах), головной убор—колпак или косынка, при необходимости надевают нарукавники, передники, резиновые перчатки, резиновые сапоги, очки и защитные марлевые маски (особенно при работе с вирусными инфекциями). Чтобы установить целость кожи рук, перед работой обмывают их спиртом или #2%-ным раствором хлористого на^ия. Людей, имеющих повреждения кожи рук, к работе* с патологическим материалом, как правило, не допускают. При необходимости работу производят тЪлько в резиновых перчатках, царапины, трещины на руках смазывают настойкой йода и заливают коллодием. Прежде чем надевать резиновые перчатки, необходимо проверить их целость. Для этого перчатки осматривают, расправляют, затем поочередно берут двумя руками за манжеты и производят несколько вращательных движений, что приводит к наполнению перчаток воздухом, после чего следят, нет ли его утечки.
3. Оборудование лаборатории и рабочего места должны обеспечивать высокую производительность труда и его безопасность. 4. При работе с патологическим, материалом нельзя курить, разговаривать, касаться лица руками, сморкаться, поправлять волосы, отвлекаться от работы. Следует избегать лишних передвижений. В лаборатории запрещается хранение и прием пищи. 5. Руки, после работы погружают в сосуд с дезинфицирующей жидкостью (2%-ный раствор фенола) на 1- 2 мин, затем тщательно моют водой с мылом. 6. Использованные в работе пипетки, предметные и покровные стекла, куски ваты и т. п. тотчас же помещаются в сосуд с дезинфицирующей жидкостью (5%-ный раствор фенола, 3%-ный раствор лизола или креолина). Металлические предметы, бывшие в контакте с патологическим материалом, немедленно обезвреживают прокаливанием на пламени. Инструменты (ножницы, скал^* пели, пинцеты и пр. ) после употребления кипятят в стёу рилизаторе или кладут в закрытый сосуд для последующего автоклавирования. < Если патологический материал попал на окружа# щие предметы, необходимо немедленно провести тщательную дезинфекцию, залив это место дезинфицирующим раствором, а затем, если есть возможность, прожечь данное место с помощью тампона, смоченного спиртом. 7. Весь патологический материал (культуры микробов, трупы животных и т. п. ), не подлежащий дальнейшему исследованию, обезвреживают -(автоклавируют, сжигают). Место, где производилась работа с этим материалом или больными животными, должно быть тщательно продезинфицировано и очищено. Допускается только влажная уборка этих помещений. Особое внимание уделяют удалению пыли с предметов, находящихся в лабораторных комнатах. Для обеззараживания комнат, где производят работу с патологическим материалом, применяют бактерицидные лампы. Меры против заражения при попадании патологического материала в организм человека: fa а) при ранениях инфицированным инструментом или при покусе животным не следует торопиться с остановкой кровотечения. Рану нужно прижечь настойкой йода и наложить спиртовую повязку (40—60%-ный спирт). б) при попадании патологического материала в рот/4 его немедленно выплевывают в чашку с дезинфицирующим раствором, а рот прополаскивают слабым раствором йода (3—5 капель настойки йода на стакан воды) или пер^анганата калия в течение нескольких минут.
в) при попадании патологического материала в глаз последний нельзя тереть. Следует промыть глаз слабым раствором йода или перманганата калия. Оборудование рабочего места. В лаборатории. Комнаты, предназначенные для микробиологических исследований, должны быть хорошо освещены и состоять из двух отделений, разобщенных стеклянной перегородкой: предбоксника и бокса. Рабочее место для микробиологических исследований должно содержаться в строгом порядке; на рабочих местах должно находиться только необходимое для работы. Лабораторный стол покрывают клеенкой, сверху которой кладут толстое стекло, по размеру равное площади стола ици занимающее его большую часть. На столе размещаю4?. микроскоп под стеклянным или матерчатым колпаком, газовую горелку или спиртовку, бактериологическую петлю в штативе, пастеровские пипетки в пена- tat, набор красящих растворов во флаконах, сосуд с дистиллированной водой, ванночку для промывания мазков с мостиком для окраски мазков, сосуд с дезинфицирующей жидкостью, вату, обезжиренные предметные и покровные стекла, карандаши по- стеклу, иммерсионное масло, песочные часы (рис. 1). В условиях животноводческого хозяйства (при проведении массовых прививок, диагностических исследований, взятия крови и т. п. ). Несмотря на имеющиеся, порой трудности^ ветеринарный специалист при работе в полевых условиях должен так оборудовать рабочее место, чтобы оно обеспечивало ему удобство и высокую производительность труда. Стол покрывают клеенкой. Вместо стола можно использовать тнцики, в крайнем случае — повозку и т. п. На столе размещают: бутыль с дезинфицирующим раствором, нагревательный прибор — примус или электроплитка, стерилизатор с набором необходимых инструментов (шприцы, иглы, глазные пипетки и пр. ), инструменты для фиксации животных, резиновый жгут, штативы для пробирок (при взятии крови), тетрадь для записи и др. 4 На рабочем месте во всех случаях должны быть умывальник, мыло, полотенце и сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук. Правила обращения с животными, больными инфекционными болезнями, и принципы их изоляции. Ветеринарный специалист соприкасается с больными животными во время их исследования (при постановке диагноза), при оказании животным лечебной помощи, при убое животных, при проведении противоэпизоотических мероприятий. Любая работа с больными и в особенности с подозрительными по заболеванию заразными болезнями животными проводится только в защитной одежде. Исследование больного животного слагается из предварительного ознакомления, включающего в себя регистрацию животного, изучение документов, и сбор анамнестических, в т. ч. эпизоотологических данных, и собственно исследования, которое в свою очередь подразделяется на общее исследование (внешний осмотр, исследование кожного покрова, и видимых слг^от^х оболочек и лимфатических узлов, термометрия) и специальное исследование (исследование отдельных систем и органов). При необходимости изучают измененное крови и берут материал для других лабораторных анализов. При исследовании больных или подозрительных по заболеванию животных необходимы чрезвычайная осторожность и продуманность действий. Прежде, чем приступить непосредственно к исследованию, " нужно собрать по возможности полный анамнез и провести предварительное наблюдение за животными и беглый клинический осмотр. Пример. Владелец собаки говорит, что животное подавилось костью. Прежде чем исследовать область глотки, тщательно расспросите владельца о поведении животного в последние дни, о возможности соприкосновения с другими животными (и в особенности с собаками), о характере кормления. Выясните, не было ли заболеваний аналогичного характера у собак и кошек, принадлежащих соседям. После предварительного наблюдения за животным, приступайте к его исследованию, соблюдая все меры предосторожности (возможно бешенство! ). Осторожность требуется соблюдать и при оказании лечебной помощи больным животным (при отделении последа или родовспоможении можно заразиться бруцеллезом; ошибочное вскрытие сибиреязвенного карбункула влечет за собой рассеивание возбудителя инфекции и возможность заражения человека). Место, где проводилась работа с больными животными, дезинфицируют. Больные и подозрительные по заболеванию животные должны быть изолированы от остального поголовья. Это основное требование в борьбе с инфекционными болезнями. Для изоляции используют изоляторы ветеринарных лечебниц, лечебно-санитарных пунктов. Под изолятор используют отдельное здание, отстоящее от жилых и животноводческих помещений не менее чем на 100 м. Обслуживание больных животных поручается отдельному персоналу, не соприкасающемуся с другими животными. Выделенных людей обеспечивают спецодеждой и тщательно инструктируют. Спецодежду обслуживающего персонала хранят в изоляторе в отдельных шкафах и перио-* дически обезвреживают (желательно оборудовать ло- ^кальный санпропускник с душевой кабиной). Уборку навоза, доставку корма, подстилки и воды организуют с соблюдением мер, недопускающих распространения ин- ( фекционной болезни. Для дезинфекции обуви при* входе '^р- изолятор кладут коврики или маты, смоченные дезинфицирующими растворами. Больных животных содержат в индивидуальных денниках (боксах), в некоторых случаях допускается групповая изоляция явно больных животных (при поражении их одной болезнью). Изоляция- подозрительных по заболеванию должна быть индивидуальной, чтобы предупредить их перезаражение, так как не все из них могут в дальнейшем оказаться больными данной инфекционной болезнью. Занятие 2. МИКРОСКОП И ЕГО УСТРОЙСТВО Задание. 1. Ознакомиться с устройством микроскопа. 2. Провести исследование готовых мазков под различными увеличениями (сухая и масляная системы). 3. Зарисовать в тетрадь наблюдаемую микроскопи- ^ ческую картину и схему устройства микроскопа. Основное оборудование и материалы. Микроскопы для каждого учащегося или один на группу из трех человек, иммерсионное масло, окрашенные мазки нескольких видов микробов (стафилококки, стрептококки, палочковидные микроорганизмы). • Место занятия. Лаборатория техникума. Методика проведения занятия. Преподаватель демонстрирует различные типы микроскопов, применяющихся в лабораторной практике, объясняет правила пользования микроскопом и назначение его отдельных частей, правила микроскопирования окрашенных мазков при различных увеличениях. Учащиеся самостоятельно изучают устройство микроскопа, проводят микроскопирование готовых мазков и зарисовывают в тетрадь наблюдаемую микроскопическую картину и схему устройства микроскопа. Описание микроскопа и работы с ним. Микроскоп — оптический прибор, с помощью которого можно рассматривать мельчайшие организмы и предметы, невидимые простым глазом. Отечественная промышленность в настоящее время производит следующие марки микроскопов для биологических исследований: микроскопы биологические рабочие с монокулярной или бинокулярной насадками, с зеркалом или осветителями ОИ-32 или ОИ-35, увеличение от 50 до 1800 (Биолам Р); микроскопы биологические дорожные (Биолам Д), микроскопы биологические студенческие (Биолам С) и др. ^ Выпускают также люминесцентные микроскопы — рабочие (Люмам Р) и исследовательские (Люмам И), а также электронные микроскопы. Каждый микроскоп имеет две основные системы — механическую и оптическую (рис. 2). Механическая часть микроскопа состоит из штатива, который делится на ножку (1) и тубусодержатель (2) или колонку. К колонке прикреплена труба микроскопа или тубус (3), с вращающимся барабаном-револьвером (4) на нижнем конце. Тубус передвигается макрометри- ческим винтом (5), для более тонкой наводки служит микрометрический винт (6). К ножке прикреплен предметный столик (7), на который помещают исследуемый препарат, закрепляемый зажимами. К предметному столику можно прикрепить препаратоводитель. Оптическая система микроскопа состоит из зеркала (8)у конденсора (9), с ирисовой диафрагмой, объективов (10) и- окуляра (//). Объективы ввинчивают в гнезда револьвера, окуляр вкла- t дывают в верхнюю часть тубуса. К каждому микроскопу прилагается несколько объективов различной силы увеличения, степень которых указана на их оправе: Х8, ХЮ, Х20, Х40, Х60, Х90. * Различают два типа объективов: сухие и иммерсионные (масля- Рис. 2. Схема устройства микроскопа: / — ножка микроскопа; 2 — тубусодержатель; 3 — тубус; 4 — револьвер; 5 — макрометрический винт; 6—микрометрический винт; 7 — предметный столик; 8 — зеркало; 9 — конденсор; 10 — объектов; 11 — окуляр. ные). При работе с иммерсионными объективами используют масло (чаще всего кедровое, но можно пользоваться также вазелиновым или касторовым маслом). Каплю масла наносят на мазок и с помощью макрометрического винта осторожно, под контролем глаза погружают объектив в масло, не прикасаясь к стеклу. Наблюдая в окуляр, медленно поднимают макровинтом тубус до появления изображения. Затем для более тонкой наводки используют только микрометрический винт. Окуляры отечественных микроскопов обозначаются 7х, Юх, 15X, *20X, т. ё. цифрами, указывающими на степень их собственного увеличения. Умножив цифру на оправе объектива /на цифру окуляра, получим число, показывающее, во Сколько раз увеличивает микроскоп. Перед работой с микроскопом необходимо проверить взаимодействие всех его частей, исправность их и установить освещение. Для этого револьвер переводят на объектив наименьшего увеличения и, наблюдая в окуляр, зеркалом улавливают источник света, добиваясь максимального освещения. При дневном свете пользуются, как правило, плоским зеркалом, при искусственном — вогнутым. В качестве источников искусственного света используют лампы-осветители. При пользовании искусственными источниками света применяют синие или матовые светофильтры. Когда свет установлен, берут препарат, помещают его на предметный столик, закрепляют зажимами и изучают сначала под малым, потом под большим увеличением, используя для этого описанные выше сухую или иммерсионную систему. Люминесцентная микроскопия. Ее применяют для ^исследования объектов, обладающих собственным свечением, а также объектов с вторичным свечением, возникающим после обработки их специальными красками — флуорохромами, (акридин, аурамин, флуоресцеин и др. )- Мазки исследуют с помощью люминесцентного ' микроскопа (рис. 3). Применяют также метод люминесцирующих антител, для чего из специфических гипериммунных сывороток выделяют антитела (гамма-глобулины) и соединяют их с красителями. При окрашивании мазков такие меченые антитела адсорбируются на поверхности антигена (микробной клетки), что выявляется при исследовании в люминесцентном микроскопе обычно в виде яркого свечения (рис. 4). Рис. 3. Люминесцентный микроскоп.
Электронная микроскопия. Кроме обычных световых микроскопов в научно-исследовательской работе и для диагностических целей широко применяют электронные микроскопы (рис. 5), позволяющие получить увеличение до 300 тыс. раз. Вместо световых лучей в нем используют поток движущихся электронов. Занятие 3. ИЗГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ И МЕТОДЫ ИХ ОКРАШИВАНИЯ ^адак^е. L Приготовить мазки из культур микробов и 'мазки-отпе- чагки из органов трупа. Освоить способы фиксации мазков. 2. Приготовить рабочие растворы красок. Освоить методы простой окраски, окраски по Граму, по Циль — Нильсену, по Козловскому. Оз накомиться с окраской капсул и спор. У. Окрасить приготовленные - фиксированные мазки различными способами. 4. Отыскать в мазКах микробов различной формы и зарисовать наблюдаемую микроскопическую картину. Основное оборудование и материалы. Непатогенные культуры микробов (кишечная палочка, стафилококк, стрептококк), кусочки внутренних органов (печень, селезенка) животного, павшего от незаразной болезни (или специально убитого). Заранее приготовленные фиксированные мазки с возбудителем туберкулеза для окрашивания по Циль — Нильсену, с возбудителем бруцеллеза — для окрашивания по Козлов- хкому. Обезжиренные предметные и покровные стекла, бактериологические петли, пастеровские пипетки, резиновая трубка с резиновой грушей, пинцеты, ножницы, карандаши по стеклу, песочные часы, физиологический раствор, иммерсионное масло, микроскопы, метиловый и этиловый спирты, баночки для. фиксации мазков, эфир, мерные цилиндры, сосуды с дистиллированной водой, фильтровальная бумага, наборы готовых реактивов для окрашивания по Граму (карболовый раствор генцианвиолета, люголевский раствор, спирт-ректификат, карболовый фуксин), для окрашивания по Циль — Нильсену (карболовый фуксин, раствор серной кислоты, спирт-ректификат, метиленовая синька), для окрашивания по Козловскому (растворы сафранина и малахитовой зе- газовые горелки или спиртовки. Схема: «Основные формы бактерий». Место занятия. Лаборатория техникума. Методика проведения занятия. Преподаватель демонстрирует способы изготовления мазков и их фиксацию, знакомит учащихся с методикой приготовления красок и показывает различные способы окрашивания мазков. Учащиеся самостоятельно готовят мазки из культур и мазки-отпечатки из органов трупов, фиксируют приготовленные мазки (каждый учащийся готовит не менее 5 мазков. ) и окрашивают их методом простой окраски и по Граму. Для окраски по Циль — Нильсену и по Козловскому учащимся дают заранее приготовленные фиксированные мазки с соответствующими возбудителями. Рабочие растворы красок учащиеся готовят самостоятельно. Преподаватель, пользуясь схемой, напоминает учащимся различные формы микроорганизмов. Учащиеся отыскивают в приготовленных мазках микробов различной формы и зарисовывают их. Изготовление ми ц< и> Mmui приготовляют на чистых обезжиренных ирг i и ты i 1 14 Непосредственно перед приготовлением ми i нр[1] шпное стекло следует провести несколько pa i чи- ишш горелки. Мазки из культур микробов. Мри МП.. 1. Щ н ими мазка нужно предохранить культуру < п iarpn m. щи микробами из окружающей среды и не Допусти, инфицирования этой культурой окружающих пр< im< и. п Предметное стекло кладут на стол около зажженной трг. чки; Пробирку с культурой берут в левую руку и > и рживают в наклонном положении большим, указательным ».: срвДн^. 1 пальцами (рис. 6). Материал из культуры берут прокаленной на пламеш горелки бактериологической (платиновой) петлей^Яуи стерильной пастеровской пипеткой. Тонкий конец пипетки' после прокаливания на пламени сгибают под прямым углом. Петлю или пипетку удерживают в правой руке, этой же рукой над пламенем горелки открывают пробирку, вынимая ватную пробку и зажимая ее между мизинцем и ладонью. Открытый конец пробирки обжигают на пламени, петлю прожигают, еще раз и вводят в пробирку, не касаясь ее краев. Остудив петлю, захватывают ею каплю культуры. При пользований пипеткой тонкий конец ее обламывают и насасывают культуру, пользуясь при этом резиновой грушей (а не ртом! ). Пробирку в этот момент держат чуть в стороне от пламени горелки. Затем закрывают пробирку над огнем ватной пробкой, также проведенной через пламя горелки. Взятый материал наносят на предметное стекло и размазывают тонким слоем, а петлк^ прокаливают и ставят в штатив. Мазок расгюла: гают в центре стекла, по форме он должет быть круг или овальным. - у # При изготовлении мазков из агаровых культур на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильной жидкости (физиологического раствора или бульона). Взятый бактериологической петлей с твердой средЙЬ материал суспендируют -в капле жидкости и тщательно размазывают по стеклу. ^Мазки-отпечатки из органов. Участок органа, откуда предполагается сделать отпечатки, прижигают шпателем или обжигают на пламени. Стерильными ножницами вырезают небольшой кусочек исследуемого органа и, захватив его пинцетом, прижимают поверхностью разреза к предметному стеклу, делая таким образом несколько 16 отпечатков (рис. 7). Для диагностических целей из каж- до1 о органа следует изготовить не менее 5 мазков-отпечатков. Каждый мазок с обратной стороны стекла об- иодят специальным карандашом по стеклу и надписы- шпот, указывая при этом номер или кличку животного и дату изготовления мазка.
Воспользуйтесь поиском по сайту: ©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...
|