Описание микроскопа и работы с ним. 2 страница

Высушивание мазков. Приготовленные тем или иным способом мазки высушивают на воздухе. Для ускорения сушки можно осторожно подогреть на пламени горелки. * Фиксация мазков. После высушивания мазки фик­сирует физическим или химическим способами.

'Физическая фиксация мазка заключается и проведении его над пламенем горелки (рис. 8). Про- долу -удтёльность фиксации зависит от толщины стекла и толщины самого мазка, а также от температуры пла­мени. Обычно Достаточно 3—4-кратного проведения маз­ка над пламенем. Нельзя допускать перегрева стекла. Для контроля мазок после проведения через пламя можно приложить к тыльной стороне ладони. Умеренно нагретое стекло не должно вызывать чувства жжения. 11сдостаточная фиксация также недопустима — микробы •не обезвреживаются и плохо прикрепляются к стеклу. Физическую фиксацию применяют для мазков, предна- шаченных к окраске по Граму (чаще всего мазков из культур микробов).

Химические способы фиксации - мазков: спирт-ректификат в течение 15—20 мин, смесь спирта с > фиром (поровну) в течение 10—15 мин, метиловый спирт — 5 мин, хлороформ — несколько секунд. Хими­ческую фиксацию применяют при изготовлении мазков- отг^чатков из органов.      )J

Окрашивание мазков. Метод простой ок­раски. На фиксированный мазок на 0, 5—2 мин налива­ют несколько капель раствора карболового фуксина (Циля) в разведении 1: 10 или метиленовой синьки (Леф- фМра). Способы приготовления красок и рабочих раство­ров описаны ниже. Затем краску смывают дистилли­рованной водой и мазок высушивают фильтровальной бу­магой.

Сложные методы окраски мазков. Окраска по Граму.

PeaKtuebi:

к а) карболовый генцианвиолет—1 г кристалличе­ского генцианвиолета растворяют в 10 мл спирта-ректи-

2-1059 Г                                                                                                       17

фиката. К насыщенному раггиору добавляют 100 мл 2%- ного водного раствора карболоной кислоты и полу­ченный раствор фильтруют через бумажный фильтр;

б) люголевский раствор 2 г йодистого калия раст воряют в 25 мл дистиллированной поды. Затем к раство­ру добавляют 1 г кристаллического йода и доливают до 300 мл дистиллированной водой;

в) спирт-ректификат;

г) фуксин карболовый основной (Циля) — 1 г основ­ного фуксина растирают в ступе с 5 г кристалличертай карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Добавляют 10 мл спирта-ректификата и 100 ил дистилли­рованной воды. Раствор фильтруют.

Методика окраски. На фиксированный мщщ фдут кусочек фильтровальной бумаги и на него наливают раствор генцианвиолета. Через 2 мин бумагу удаляют, краску сливают и на препарат наливают люголевский ра створ. Спустя минуту люголевский раствор сливают и пре­парат в течение 30 с обрабатывают спиртом-ректифика­том. Затем препарат промывают водой и дополнительно ок рашивают спирто-водным фуксином (для этого карболо­вый основной фуксин разводят 1: 10 водой) в течение 2 мин. После этого препарат промывают водой, высуши вают и рассматривают под микроскопом. Для окраски можно использовать заранее пропитанные 1%-ным спир товым раствором генцианвиолета и затем высушенные фильтровальные бумажки, которые кладут на фиксирован ный мазок и смачивают водой; в остальном техника ок раски та же.

Микрокартина: грамположительные микробы окра шены в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательнь^ в розовый цвет.

/Окраска по Циль — Нильсену. Применяет ся при микроскопической диагностике туберкулеза и пара» туберкулеза. _

Реактивы: а) фуксин карболовой основной (приго­товление, как при окраске по Граму);

б) 5%-ный раствор серной кислоты (5%-ный раствор азотной или'3%-ный раствор соляной кислоты); '

в) спирт-ректификат;

г) метйленовая леффлеровская синька — на 100 m. i дистиллированной воды берется 1 мл 1%-ного раствор едкого калия и 30 мл насыщенного спиртового раствор. ' метиленовой синьки. Краску фильтруют.

Методика окраски. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый фуксин и подогревают до появления паров, после чего нагревание прекращают и краску остав­ляют на препарате 2—3 мин. Затем удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой. После этого обесцве­чивают препарат 5%-ным водным раствором серной кис­лоты в течение 3—5 с, тщательно промывают водой и в течение 10—15 с обрабатывают спиртом. Снова промы- fgtOT водой и докрашивают в течение 3—5 мин метиле- воы> й леффлеровской синько^ Краску смывают водой и npenapav высушивают.

Микрокартина: спирто-кислотоустойчивые микробы ^. рашиваются в красный цвет, остальные микробы — в синий цвет.

Окраска по Козловскому применяется для микроскопической диагностики бруцеллеза.

Реактивы: а) водный раствор сафранина— 1 г кристаллического сафранина растворяют в 50 мл кипя­щей дистиллированной воды. Горячий раствор фильтруют через бумажный фильтр и охлаждают;

б) 1%-ный водный раствор малахитовой зелени.

Методика окраски. Фиксированный на пламени мазок окрашивают 2%-ным водным раствором сафранина (раствор готовят непосредственно перед употреблением) с интенсивным подогреванием (до появления паров). Про­мывают водой и окрашивают 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 1 мин. Затем препарат вновь промывают водой и высушивают.

Микрокартина: бруцеллы окрашиваются в красный Двет, остальные микробы — в зеленый цвет.

Окраска капсул применяется для микроскопической диагностики сибирской язвы.

Способ Михина. Фиксированный мазок при по­догревании окрашивают метиленовой леффлеровской Ьинькой в течение 2—3 мин до появления паров. Краску быстро смывают водой, мазок высушивают фильтроваль­ной бумагой.

Микрокартина: капсулы — светло-розовые, микро­бы — темно-синие.

Окраска спор. Способ Пешкова. Фиксирован­ный мазок окрашивают кипящей метиленовой леффле­ровской синькой в течение 20 с. После охлаждения мазок промывают водой и докрашивают 0, 5%-ным водным

2*

раствором нейтральрота в течение 30 с, затем промыва­ют водой и высушивают.

Микрокартина: споры окрашиваются в синий, микроб­ные тела — в розовый, ядра — в фиолетовый цвет.

Занятие 4.          ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРОСТЫХ

ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД.

Задание. 1. Приготовить мясо-пептонный бульон, установить рН 7, 2 7, 4.

2. Приготовить мясо-пептонный агар, установить' Гн 7, 2 — 7, 4.

3. Разлить приготовленные среды в пробирки и колбы, подготовить их к стерилизации. ^

Основное оборудование и материалы. Готовая мясная вода в кол­бах, химически чистая поваренная соль, пептон, сырые яйца или сыво­ротка крови для просветления сред, агар-агар, децинормальный раствор едкого натра (4 г едкого натра растворяют в 1 л дистиллирован­ной воды), 10%-ный раствор углекислой соды. Кастрюли эмалирован­ные, весы, разновесы, мерные цилиндры, пробирки, колбы, стаканы, градуированные пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл, воронки, фильтровальная бумага, вата, марля, аппарат для определения рН (концентрации водо­родных ионов) «Микро-Михаэлис» типа ММ-1, лабораторный ионо- метр (рН-метр) типа ЭВ-74, примус, электроплитка или газовая горел­ка, резиновая трубка, зажимы.

Место занятия. Лаборатория техникума.

Методика проведения занятия. Преподаватель объясняет, как при­готавливают простые питательные среды, как определяют и устанавли­вают рН в питательных средах. Группу учащихся разбивают на под­группы по 3—4 человека. Учащиеся в каждой подгруппе самостоятель­но отвешивают необходимые вещества, варят среды, определяют и уста­навливают нужный рН среды, фильтруют и разливают приготовленные среды по пробиркам и колбам. Мясную воду для приготовления сред дают учащимся в готовом виде. Приготовленные питательные среды хранят в холодильнике до следующего занятия, на котором учащиеся подвергают их стерилизации.

Приготовление простых питатель­ных сред. Простые питательные среды — мясо-пеп^- тонный бульон и мясо-пептонный агар готовят на мясной воде.

Мясная вода. Мясо освобождают от костей, жира, пле­нок и сухожилий, пропускают через мясорубку, заливают двух-или четырехкратным количеством воды (по весу) и кипятят в течение часа. Жидкость фильтруют через вату или полотно, затем через фильтровальную бумагу. Фильтрат измеряют и доливают до первоначального объе­ма дистиллированной водой.

Другой способ — мясной фарш заливают двух- или че­тырехкратным количеством дистиллированной воды, тщательно перемешивают и оставляют на сутки в прох­ладном месте. На следующий день фарш отжимают, настой кипятят 30 мин и фильтруют. '

Приготовленную мясную воду разливают по бутылям и стерилизуют 30—40 мин в автоклаве при давлении в 1 атм.

Мясо-пептонный бульон (МПБ). К мясной воде до- С& зляют 1% пептона, 0, 5% химически чистой поваренной соли и кипятят до растворения пептона. Затем в горячем, бульоне определяют рН и добавлением 10%-ного раство­ра углекислой соды или децино^мального раствора ед- i4^ro натра устанавливают рН 7, 2 — 7, 4. После этого бульон еще раз кипятят 15—20 мин и фильтруют через двойной бумажный фильтр. Готовый бульон разливают по пробиркам и колбам, стерилизуют 15—20 мин в авто­клаве при давлении в 1 атм.

Мясо-пептонный агар (МПА). В мясо-пептонный бульон добавляют 2—3% агар-агара и расплавляют его нагреванием в автоклаве или текучепаровом аппарате. В расплавленном агаре определяют рН и устанавлива­ют рН 7, 2 — 7, 4 добавлением 10%-ного раствора угле­кислой соды или децинормального раствора едкого натра. Для просветления среды добавляют на 1 л расплавлен­ного и охлажденного до 50° агара белок одного куриного яйца или 10 мл кровяной сыворотки, после чего нагре­вают 20 мин в автоклаве при температуре 105° для сверты­вания белка, фильтруют в горячем виде через ватно- марлевый фильтр (в нагретом автоклаве), разливают по колбам и пробиркам, затем стерилизуют в автоклаве при давлении в 1 атм в течение 30 мин.

Определение рН (реакции) питательной среды. Для определения применяют два метода: колориметрический и электрометрический.

Принцип определения рН колориметрическим способом (по Михаэлису) заключается в сравнении окраски среды после добавления в нее индикатора с ок­раской готовой шкалы запаянных пробирок с различны­ми показателями рН (отличаются по цвету). Для опре­деления рН применяют индикаторы нитрофенолового ря­да. Так как питательные среды для выращивания микро­бов в большинстве случаев готовят слабощелочной реак­ции, то при определении рН пользуются индикаторами

© © ® 0 ©

б

Я

ряда метанитрофенола, которым определяют рН от 6, 7 до 8, 4. Растворы индикатора готовят на дистиллированной воде и хранят в бутылях с притертой пробкой.

Сравнение окраски среды и стандарта проводят в ком­параторе, который представляет собой прямоугольный деревянный брусок с тремя парами вертикальных отвер­стий для пробирок и тремя горизонтальными отвер­стиями для прохождения лучей света и для наблюдения (рис. 9). Горизонтальные отверстия, обращенные к свету, прикрыты матовым (или синим) стеклом.

В компаратор обычно устанавливают 4 пробирки. В первом ряду (обращенные к наблюдателю) пробирки № 1 и 2, во втором ряду (обращенные к источнику света) пробирки № 4 и 5. В пробирку № 1 наливают 2 мл пита­тельной среды, 4 мл дистиллированной воды и 1 мл индика­тора (метанитрофенола), в пробирку № 2—5 мл дистилли-* рованной воды и 2 мл питательной среды, в пробирку № 4—7 мл дистиллированной воды, а вместо пробирки № 5 ставят запаянную стандартную пробирку из набора. Ме­няя стандартные пробирки, подбирают такую, которая по окраске больше всего соответствует испытуемой среде. -^у По обозначению на этикетке стандарта узнают рН.

Рис. 9. Прибор для колори­метрического определения рН среды: а — компаратор (вид спереди); б—компаратор (вид сзади); в — схема расположения пробирок в компараторе.

Э л е ктрометрическим методом рН опре­деляют с помощью специальных приборов, к числу которых относится отечественный лабораторный ионометр ЭВ-74. Он состоит из металлического корпуса, где находятся эле­менты измерительной схемы прибора, а также лабора­торного датчика, в комплект которого входят специаль­ные электроды. Их погружают в испытуемый раствор и по

пкале прибора определяют величину рН. При работе с ыбораторным ионометром пользуются инструкцией по жсплуатации этого прибора.

jj: При приготовлении питательных сред приходится про­изводить подщелачивание, так как мясная вода из све­жего мяса имеет рН 6, 7—6, 8. Обнаружив в пробе кислую реакцию, берут новую пробную порцию среды, подщела­чивают ее точным количеством децинормального раство­ра едкого натра или 10%-ного раствора углекислой соды и г-нова проверяют. После установления нужной реакции среды шчисляют, какое количество щелочи необходимо

ЛВ

для подщелачивания всей среды по формуле х= _с,

где Уг— количество щелочи, необходимое для подщелачи- нания всей среды; А — количество щелочи, добавленное К исследуемой порции среды; В — общее количество пи­тательной среды; С — порция среды, взятая для испы- гания.

Чтобы избежать ошибок, добавлять щелочь следует осторожно, сначала ее берут в несколько меньшем коли-' честве, а затем еще раз определяют реакцию* среды. 11осле чего добавляют оставшуюся часть раствора ще- ючи.

При стерилизации сред под давлением рН может < нижаться на 0, 2—0, 4. Поэтому после первого усредне­ния пробу рекомендуется прокипятить 30 с, а затем после охлаждения снова определить и установить нужный рН. Для определения рН в твердых средах их необходимо растопить и развести теплой дистиллированной водой.

Сухие питательные среды. В настоящее время в лабо­раторной практике широко используют готовые сухие пи­тательные среды, выпускаемые промышленностью. Их растворяют в дистиллированной воде, разливают по про­биркам, колбам или бактериологическим чашкам и при

бходимости стерилизуют в автоклаве или текучепаро-

аппарате.

Розлив питательных сред. Питательные среды по про­биркам и колбам разливают с помощью приспособления, состоящего из штатива и стеклянной воронки, на конце которой укреплена резиновая трубка, снабженная за­жимом и стеклянным наконечником. С этой же целью используют специальные дозирующие устройства — до­заторы. Колбы и пробирки со средами закрывают проб­ками, упаковывают в металлические сетки и стерили­зуют в автоклаве 30 мин. Ватные пробки перед стерили­зацией необходимо обернуть бумагой. Для получения скошенного агара мясо-пептонный агар в пробирках после стерилизации охлаждают в наклонном положе­нии.

Занятие 5. РАБОТА С ЛАБОРАТОРНОЙ АППАРАТУРОЙ, ПОДГОТОВКА ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ

Задание. 1. Ознакомиться с устройством прибору и аппаратов, применяемых в лабораторной практике.

2. Освоить правила обращения с автоклавом.

3. Простерилизовать в автоклаве ранее приготовлен­ные питательные среды.

4. Освоить способы подготовки лабораторной посуды, изготовления ватных пробок, пастеровских пипеток, обезжиривания предметных стекол.

5. Простерилизовать в сушильном шкафу приготов­ленную лабораторную посуду.

Основное оборудование и материалы. Автоклав (стерилизатор паровой), текучепаровой аппарат, сушильный шкаф, водяная баня, фильтровальные приборы, асбесто-целлюлозные и мембранные фильт­ры, центрифуги, холодильник, насосы лабораторные (Комовского I и др. ), центрифужные весы, аппарат для получения дистиллирован­ной воды. Пробирки, бактериологические чашки (Петри), бумага для завертывания посуды, вата, колбы, предметные стекла, стеклянная трубка для изготовления пастеровских пипеток и газовок, примус или газовая горелка. Оборудование для мытья лабораторной посуды, хозяйственное мыло, спирт-эфир, ерши. Стенная доска для высуши­вания лабораторной посуды. Корнцанг. Приготовленные учащимися i на предыдущем занятии питательные среды.

Местр занятия; - Лаборатория техникума.

Методика проведения занятия. Преподаватель объясняет устрой- I ство и принцип действия лабораторной аппаратуры, обращает особое! внимание на меры предосторожности при работе. Объяснения сопро­вождаются демонстрацией действия аппаратуры.

Занятия следует начинать с автоклава. После ознакомления с его действием и правилами обращения, учащиеся самостоятельно! под наблюдением преподавателя заряжают автоклав (помещает в него приготовленные на предыдущих занятиях питательные среды) и включают нагревательное устройство. Во время нагревания авто­клав находится под наблюдением лаборанта. Преподаватель исполь­зует это время для объяснения остальной аппаратуры. По мере необ­ходимости преподаватель возвращается к автоклаву и показывает учащимся последовательные приемы обращения с автоклавом.

Преподаватель знакомит учащихся со способами подготовки ла­бораторной посуды (мытье, сушка, завертывание бактериологических чашек в бумагу для стерилизации), показывает, как изготовить ват­ные пробки (для пробирок и колб) и пастеровские пипетки, как за­вернуть их для стерилизации, показывает, как обезжиривают пред­метные стекла.

Учащиеся самостоятельно моют посуду (колбы, бактериологичес­кие. чашки, пробирки), изготавливают ватные пробки для пробирок и колб, пастеровские пипетки и комплектуют их в пачки для стерилизации, изготавливают газовки. Высушенные бактериологические чашки за­ворачивают в бумагу и подготавливают к стерилизации. Приготов­ленные предметные стекла проверяют на степень их обезжиривания. Учащиеся самостоятельно стерилизуют в сушильном шкафу приго­товленную лабораторную посуду.

Способы стерилизации. Одним из основных условий работы в лаборатории является отсутствие на инструментах, посуде и в питательных средах микро­организмов, уничтожение которых достигается стерили­зацией (обеспложиванием). В лабораторной практике стерилизация осуществляется: 1) прокаливанием на пламени; 2) кипячением; 3) сухим жаром (в сушиль­ном шкафу); 4)- водяным паром (в текучепаровом ап­парате, автоклаве); 5) различными химическими веще­ствами; 6) механическими способами (фильтрация).

Автоклав (стерилизатор паровой) — служит для сте­рилизации водяным паром под давлением. Он представ­ляет собой (рис. 10) массивный металлический котел (8), одетый снаружи кожухом (9) и снабженный гер­метически закрывающейся крышкой (//). Внутри на­ружного котла находится другой котел меньшего диа­метра (/). Между двумя котлами остается свободное пространство, куда поступает пар из парообразователя (17) через патрубок {14). Парообразователь имеет воронку с кранами (15) и водомерным стеклом (16), по которому определяют уровень воды. Подогрев осу­ществляют электричеством, реже газовыми или кероси­новыми горелками. На предприятиях в автоклавы посту­пает технологический пар по трубам непосредственно из котельной.

При подогревании автоклава образуется пар, который через отверстие в днище внутреннего котла (18) попа­дает во внутреннее пространство, где располагаются стерилизуемые предметы. Если закрыть выпускной кран (13), то образующийся пар, поступая в замкнутое прост­ранство, поднимает давление и температуру. За повы­шением давления следят по показанию манометра (10), сообщающегося с внутренним пространством котла или парообразбвателя. Чтобы давление в автоклаве не пре­вышало предельного (во избежание разрыва автокла-

Рис. 10. Схема устройства автоклава:

1 — стерилизационная камера; 2 — электрощит; 3 — нагревательное приспособление; 4 — предохранительный клапан; 5 — переключатель; 6 — выключатель; 7 — сигнальная лампа; 8 — паровая камера; 9 — кожух; 10 — манометр; 11 — крышка; 12 — штурвал; 13 — выпускной кран; 14 — патрубок с вентилем; 15 — воронка; 16 — водомерное стекло; 17 — парообразователь; 18 — отверстие для прохода пара.

ва), устроен предохранительный клапан (4), который автоматически закрывается или открывается в зави­симости от силы давления в аппарате. В нижней части автоклава устроен кран для спуска пара и воды после работы (13).

К работе с автоклавом допускают только лиц, изу­чивших соответствующую инструкцию и сдавших экзамен. Перед работой нужно проверить Исправность всех частей автоклава, целость прокладок, исправность манометров (последние необходимо ^периодически проверять, они должны быть запломбированы).

Работа с автоклавом требует строгого выполнения

установленных правил и определенной последователь­ности.

1. Наливают через воронку воду, определяя ее уро­вень по водомерному стеклу (должно быть не менее ²/з высоты водомерного стекла).

2. Загружают в автоклав стерилизуемые предметы, покрыв их сверху плотной бумагой.

3. Плотно завинчивают крышку автоклава.

4. Открывают выпускной кран (13).

Включают нагревательное устройство (ручку вы­ключателя (6) ставят в положение «включено», ручку переключателя (5) в положение «нагрев»).

6. Когда вода закипит, через открытый кран начнет вводить пар, вытесняющий воздух. Пар в это время влажный и закрывать кран нельзя. Кран закрывает тогда, когда начнет выходить сухой пар со свистом, сильной непрерывной струей (через 3—5 мин).

7. Закрывают выпускной кран (13).

8. Наблюдают за повышением давления по мано­метру (10). После того, как давление достигнет требуе­мого уровня, замечают время и переводят ручку пере­ключателя (5) в положение «стерилизация».

9. После истечения срока стерилизации ставят руч­ку выключателя (6) в положение «О», прекращая тем самым нагрев автоклава.

10. Следят за падением давления по манометру.

11. После того, как стрелка манометра вернется в нулевое положение, открывают кран (13) и выпускают нар.

12. Открывают крышку автоклава, дают автоклаву ijcTbiTb и вынимают простерилизованные предметы.

Контроль за работой автоклава осуществляется с помощью веществ, которые плавятся при определенной температуре (бензонафтол при 110°С, серный цвет при 115°С, бензойная кислота при 120°С). В пробирку на­сыпают одно из этих веществ и добавляют краску (фук­син, сафранин). Пробирку плотно закупоривают или за­паивают и помещают в автоклав. Если в автоклаве температура поднимается до уровня, соответствующего температуре плавления данного вещества, то послед­нее расплавится и окрасится добавленной краской (табл. 2).

В автоклаве стерилизуют предметы, которые не пор­тятся и не изменяются при температуре выше 100°С.

2. Зависимость температуры в

Соотнетствующая ему температура (в град. )

_______________  ^F                автоклаве от давления

Давление (показания манометра) в МПа (мегапаска л^

О                  0 9^{5                 100                  127}'²

120, 6              144, 0

Нельзя стерилизовать в автоклаве питательные среды, содержащие углеводы и нативные белки. Выдерживание в автоклаве любых пред_метов лабораторного обихода в течение 30 мин при давлении в 0, 1 МПа (120°С) обеспе­чивает их полную стерил_ьность Автоклав может быть использован и как текучеп_аровой аппарат, если на время стерилизации не закрыва_Ть*_{выпускной кран}

Текучепаровой аппарат (аппарат Коха) представля­ет собой металлический цилиндр, обшитый снаружи каким-либо теплоизоляц_Ионным материалом (асбест, войлок), а внутри раздел^_нный перегородкой на нижнюю (меньшую) и верхнюю ча_Сть. В нижнюю часть наливают воду, а на подставку в^р_хней _чаСти ставят предметы, подлежащие стёрилизац_Ии. Верхнюю часть цилиндра закрывают крышкой, в ко_ТОру_Ю вмонтирован термометр. Нагрев аппарата осуществляют электричеством, газовой горелкой или примусом. Началом стерилизации счи­тается момент, когда пар начинает выходить из отверстий в верхней части аппарата непрерывной струей, а термо­метр покажет температуру Ю0°С. Замечают время и продолжают стерилизации (25—60 мин в зависимости от материала). При такой стерилизации погибают только микробы в вегетативной ф_орме. Для стерилизации споро, содержащего материала Применяют дробную стерилиза­цию—ежедневно 3 дня подряд при температуре 100°С в течение 30 мин. Такое н_{агревание} приводит к прораста­нию спор в вегетативны^ формы, которые обезврежи­ваются при повторной обр_аб_отке

В текучепаровом апп_ар_ате стерилизуют предметы, которые портятся или из^_{еняются П}р_И температуре вы­ше 100°С (например, сре_Аы> содержащие углеводы).

Сушильный шкаф (печ_ь Пастера) применяют для сте­рилизации сухим жаром. Сушильный шкаф представляет собой металлический ящ_{Ик с} двойными стенками, обло­женный внутри асбестом. В верхней части имеются отвер­стия для термометра и для выхода горячего воздуха. Нагрев осуществляется с помощью электричества, газо­вой горелки или примуса. Внутри шкафа циркулирует горячий воздух, который обеспечивает стерилизацию.

В сушильном шкафу стерилизуют пробйрки, пасте­ровские пипетки, бактериологические чашки, колбы и дру­гую стеклянную посуду. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками. Все стеклянные предметы заворачи­вают в бумагу. Подлежащие стерилизации предметы раз­мещают на полках. Предметы выдерживают 2 ч при температуре 150°С и 1 ч при температуре 160°С. Нача­лом стерилизации считается момент достижения требу­емой температуры. На достаточную степень стерилиза­ции указывает пожелтение ватных пробок и бумаги. Вы­нимать посуду можно только после полного охлаждения шкафа.

Водяные бани — различной формы и величины ван­ночки, подогреваемые электричеством, газовыми или ке­росиновыми горелкам[и. Применяют для нагревания ве­ществ, которые не выдерживают действия высокой тем­пературы (взвеси микробов, кровяные сыворотки). Нагре­вание в водяных банях осуществляется при 56—58°С в течение 1—2 ч. Для полной стерилизации применяют на­гревание по одному часу в течение трех суток подряд при указанной температуре. Перед стерилизацией* в баню на­ливают воду и помещают в нее колбы или пробирки с материалом. Термометр помещают в пробирку с водой, которую тоже ставят в баню. Пробирки не должны ка­саться дна сосуда. Для этого их. устанавливают в спе­циальные штативы или же на дно сосуда кладут тонкий слой ваты.

Фильтровальные приборы. Фильтрацией через спе­циальные приборы освобождают жидкости от микробов (бактерий, грибов). Этим же способом пользуются для Ьолучения возбудителей вирусных болезней в чистом ви­де, ибо они, в отличие от бактерий проходят через бакте­риальные фильтры.

Для фильтрации в настоящее время употребляют асбесто-целлюлозные и мембранные фильтры. Их изго­тавливают с определенными размерами пор. Фильтры закрепляют между металлическими пластинками в фильтродержателях (системы Зейтца, Сальникова и др. )-

Фильтруют жидкости под повышенным или пони-

 

женным давлением. В первом случае через смонтирован­ный фильтровальный прибор пропускают жидкость под давлением. Во втором случае в сосуде, куда поступает фильтрованная жидкость создают разряжение воздуха (отрицательное давление). Повышенное и пониженное давление создают с помощью насосов. Перед фильтра­цией приборы с фильтрами " в смонтированном виде под­вергают стерилизации. После работы бывшие в упот­реблении фильтры уничтожают, а металлические прибо­ры— стерилизуют автоклавированием.    у

Центрифуги — приборы, основанные на действии центробежной силы, с помощью которых отделяют плот­ные частички от жидкости или разделяют жид-кости, отличающиеся по своей плотности. Бывают различных систем, одни приводятся в действие ручными приводами, другие — электричеством. Последние состоят из электро­мотора, вращающейся оси, на которой укреплены ротор или металлические гильзы для центрифужных стакан­чиков или пробирок. Регулирование количества оборотов осуществляется с помощью реостата.

Прежде чем включить центрифугу, надо тщательно уравновесить центрифужные пробирки. Это делается с помощью центрифужных весов. Для уравновешивания пробирок пользуются водой или той же жидкостью, ко­торую центрифугируют, а также кусочками ваты, полос­ками фильтровальной бумаги, которые вкладывают в стаканчик центрифуги. После уравновешивания ста­канчики с пробирками вставляют в гнезда центрифуги, расположенные друг против друга (по диаметру). Крыш­ку плотно закрывают и фиксируют винтами или зажи­мами. Включают ток и постепенно увеличивают числ® оборотов. Открывать крышку центрифуги можно только после ее полной остановки.

Холодильники используют для длительного сохра­нения микробных культур, биопрепаратов (сыворотки, антигены и пр. ), а в некоторых случаях исследуемого* патологического материала в лабораториях. Бактериаль­ные культуры сохраняют при температуре 4°С, вируссо- держащий материал — в замороженном виде. Регулиров­ка температуры в холодильнике производится специаль­ным устройством. Внутри холодильника помещают тер­мометр, показания которого ежедневно вносят в лист контроля работы прибора.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: