2.2 Методы исследования. 2.2.1 Способ осуществления стресс-теста. 2.2.2 Способ осуществления физической нагрузки крыс.

2. 2 Методы исследования

Эксперимент проводился в несколько этапов. В начале эксперимента крысы были поделены на несколько групп. Далее было осуществлено замерение показателей крыс- их вес, их мечение водоустойчивой краской. После чего было осуществлена основная работа- физическая нагрузка и выполнение стресс теста. В конце эксперимента был произведен забор крови для измерения изменения экспрессии генов серотонинергической системы.

2. 2. 1 Способ осуществления стресс-теста

Для оценки адаптогенной активности и определения типов характера крыс использовался широко известный тест Порсолта (Porsolt) или тест отчаяния (Каркищенко с соавт., 2011). Суть метода состоит в том, что крысы при попадании в воду, начинают проявлять активную двигательную деятельность, направленную на поиск выхода из неприятной (аверсивной) ситуации. После чего крысы оставляют попытки выбраться из сосуда и зависают в воде в характерной позе, оставаясь практически полностью без движения, (двигательная деятельность наблюдалась только для поддержания морды над поверхностью воды). Сосуды (стеклянные прозрачные квадратные емкости размером в сечении 25х25х60 см. ) наполнялись водой на высоте 40 см.

Выраженность депрессивного состояния по тесту Порсолта проявлялась в длительности неподвижности исследуемых крыс (иммобилизации). В данном тесте после попыток выбраться из данной неприятной ситуации у животных наступает стадия иммобилизации, которая показывает депрессивное состояние. Состояние иммобилизации оценивают визуально с определением ее длительности в течение 6 мин. наблюдения. Крысы вели себя в данном тесте в соответствии с описанной классической методике Порсолта. При попадании в воду животные начинали активно двигаться в поисках выхода. Впоследствии они «зависали» в характерной позе без движения. Через некоторое время крыса начинала активно двигаться в поисках выхода из аверсивной ситуации.

По данному тесту было сформировано 4 группы животных, в каждой группе находились по 20 голов крыс, разделенных примерно поровну (активные и пассивные по тесту Порсолта).

Так, первая группа крыс подвергалась только стрессовой нагрузке в виде иммобилизации, суть которой описана ниже. Животных второй группы выполняли физические упражнения, третья группа — подвергалась, как изнуряющим физическим нагрузкам, так и иммобилизационному стрессу одновременно и четвертая — контрольная группа, живущая умеренной жизнью.

Осуществление стресс-теста происходило две недели подряд, каждый день. Суть данной части работы заключалась в следующем: крысам создавались условия, в которых они не могли двигаться, т. е. крысы подвергались гиподинамии. При помощи тканевой материала и резинок, испытуемые крысы обездвиживались, при этом на фоне интенсивной деятельности ЦНС, обусловленной увеличением эмоционального напряжения в совокупности с кислородным голоданием способствовало перегрузке и нарушению функционального состояния ЦНС, ее регуляторной функции, что создало предпосылку к развитию соматопсихических нарушений, при которых организм испытывал стрессовую нагрузки, теоретически, влияющую на экспрессию генов серотонинэргиской системы.

2. 2. 2 Способ осуществления физической нагрузки крыс.

Одна из групп крыс, подвергаемая стресс-тесту получала физическую нагрузку. Перед проведением данной части эксперимента крысам проводили измерения веса.

Физическая нагрузка животных осуществлялась в тесте «Вынужденное плавание с грузом». Суть которой заключалась в том, что крысы выполняли плавательный упражнения- животные помещались в воду с грузом, составляющей примерно 7% от массы тела, прикрепленным к туловищу тела при помощи веревки. Массу груза определяли с точностью до 2-3 г. При наблюдении за животными засекали время их нахождения в воде, в нашем эксперименте оно составляло около 7- 9 минут, но критическим определением времени нахождения крыс в воде являлся момент, когда животное было не в состоянии удержаться над поверхностью воды самостоятельно, уставая, животное начинало погружаться под воду все чаще и чаще, начиная тонуть. Утомление часто сопровождалось нарушением моторно-координационной функции. Именно этот момент мы брали за точку окончания эксперимента, который в редких случаях мог составлять и 5 мин. Далее крыс вынимали из воды, обсушивали полотенцем, клали обогреваться в воду, с комфортным для них параметром температуры (около 40 ˚ С), далее крысы обсушивались в сухом контейнере, располагающемся около обогревателя для полного высыхания шерсти, после чего крысы помещались в клетки.

Плавание проводили в бассейне из пластмассы с внутренним диаметром около 1, 5 м и высотой 75 см. Высота столба воды составляла 60 см, температура воды- 20-24 С. Животные в бассейне исследовались по 2-5 особи.

Животные этой группы плавали на каждый 4 день эксперимента. Время плавания животных по сравнению с фоновым показателем со временем увеличивалось, поэтому нахождение крыс в воде было увеличено до 10-12 минут, это можно объяснить адаптацией животных к новой среде и постепенным увеличением физической выносливости на фоне запредельных нагрузок.