 |
Таблица 5. Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0 с использованием стандартных сывороток. Результат реакции с стандартными сыворотками
|
|
|
|
Таблица 5.
Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0 с использованием стандартных сывороток.
|
Результат реакции с стандартными сыворотками |
Исследуемая кровь принадлежит к группе | ||
| α β (I) | β (II) | α (III) | |
| - | - | - | (I) 0 |
| + | - | + | (II) А |
| + | + | - | (III) В |
| + | + | + | (IV) АВ |
Примечание: знаком «+» обозначено наличие агглютинации, знаком
«-» - отсутствие агглютинации.
Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Рекомендуется сделать цветной рисунок, демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в разных каплях сыворотки. Определите групповую принадлежность исследуемой крови и сделайте вывод, отразив значение определения группы крови для клиники.
Работа 3. Определение групп крови с помощью цоликлонов.
Принцип метода: цоликлоны анти-А, анти-В и анти-D предназначены для определения группы крови человека по системе АВ0 и резус-системы вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток. В отличие от сывороток, в цоликлонах наблюдается высокий титр антител. Эти моноклональные антитела к антигенам А, В и D продуцируются специальными встроенными в организм мышей гибридомами. Они принадлежат к иммуноглобулинам класса М и обладают высочайшей специфичностью. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.
Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирующих сывороток.
Определение групп крови по системе АВ0.
Оснащение: цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ; пластина или планшет, пипетки, стеклянные палочки.
|
|
|
Ход работы: нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0, 1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле (0, 01 – 0, 03 мл) исследуемой крови, смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции при периодическом покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, однако наблюдение следует вести 3 минуты. Планшет после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 секунд, для образования более полной крупнолепестковой агглютинации.
Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами для определения группы крови системы АВ0представлена в таблице 6.
Таблица 6.
Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0 с использованием цоликлонов
|
Результат реакции с цоликлоном |
Группа крови | ||
| анти-А | анти-В | анти-АВ | |
| - | - | - | (I) 0 |
| + | - | + | (II) А |
| - | + | + | (III) В |
| + | + | + | (IV) АВ |
Примечание: знаком «+» обозначено наличие агглютинации, знаком «-» - отсутствие агглютинации.
Определение резус-принадлежности.
Оснащение: цоликлоны анти-D, пластина или планшет, пипетки, стеклянные палочки.
Ход работы: на пластину или планшет нанесите большую каплю (около 0, 1 мл) цоликлона анти-D, рядом поместите маленькую каплю (0, 01-0, 05 мл) исследуемой крови смешайте стеклянной палочкой. Реакция агглютинации начинается через 10-15 секунд, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 секунд. (Для сокращения времени начала реакции планшет можно предварительно подогреть до 37- 40 о С. ) Результаты реакции учитывайте через 3 минуты.
Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Рекомендуется сделать цветной рисунок, демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в каплях разных цоликлонов. Определите групповую принадлежность исследуемой крови и сделайте вывод, отразив значение определения группы крови системы АВ0 и резус-системы для клиники.
|
|
|
Работа 4. Определение индивидуальной совместимости крови по системе АВ0.
Гемотратсфузия – это серьезная операция по транплантации живой ткани человека. Перед переливанием крови помимо определения групповой и резус-принадлежности крови донора и реципиента определяют еще и их индивидуальную совместимость.
Оснащение: микроцентрифуга с пробирками, предметное стекло, две глазные пипетки, стеклянная палочка, 5% раствор цитрата натрия, изотонический раствор хлорида натрия.
Ход работы: кровь реципиента в количестве 1-2 мл поместите в центрифужную пробирку, добавьте одну каплю 5% цитрата натрия и центрифугируйте 10-15 минут, для отделения плазмы от форменных элементов.
На предметное стекло поместите каплю плазмы реципиента, а рядом каплю крови донора в соотношении 10: 1. Перемешайте капли стеклянной палочкой в течение 5 минут, после чего добавьте каплю изотонического раствора хлорида натрия.
Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Сделайте вывод о совместимости или несовместимости крови донора и реципиента и возможности переливания крови.
VI. ОЦЕНОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Контрольные вопросы для самоподготовки к итоговому занятию по разделу «Физиология крови»
1. Понятие о системе крови. Основные функции крови. Состав и количество крови человека.
2. Плазма и ее состав. Гематокрит. Основные физиологические константы крови и основные механизмы их регуляции. Осмотическое и онкотическое давление. Функциональные системы, обеспечивающие постоянство осмотического давления и кислотно-основного состояния крови.
3. Эритроциты, строение, количество, методики подсчета, функции.
4. Лейкоциты, их виды, количество, методики подсчета, понятие о лейкоцитозе и лейкопении. Лейкоцитарная формула. Понятие об индексе сдвига. Функция различных видов лейкоцитов. Физиологический лейкоцитоз, условия и механизмы его развития.
|
|
|
5. Нервная и гуморальная регуляция эритропоэза и лейкопоэза.
6. Иммунитет. Клеточный и гуморальный иммунитет.
7. Гемоглобин, строение, свойства, количество в крови. Физиологические разновидности гемоглобина. Соединения гемоглобина с газами. Цветовой показатель крови, его определение.
8. Гемолиз, виды гемолиза, механизм происхождения. Понятие об аутогемолизе.
9. Осмотическая резистентность эритроцитов, ее границы.
10. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ), механизм, факторы, влияющие на СОЭ.
11. Группы крови (система АВ0, резус-принадлежность, другие системы). Правила переливания крови. Кровезаменяющие растворы.
12. Наследование групп крови.
13. Тромбоциты, их строение, количество, функции.
14. Процесс свертывания крови (А. А. Шмидт) и его значение.
15. Современные представления об основных факторах, участвующих в свертывании крови (тканевые, плазменные, тромбоцитарные, эритроцитарные, лейкоцитарные).
16. Фазы свертывания крови.
17. Фибринолиз, этапы фибринолиза.
18. Свертывающая, противосвертывающая и фибринолитическая системы крови как главные аппараты функциональной системы поддержания ее жидкого состояния.
19. Факторы, ускоряющие и замедляющие свертывание крови. Регуляция гемостаза.
|
|
|
