 |
6)Подготовка посуды к стерилизации
|
|
|
|
6)Подготовка посуды к стерилизации
В бактериологических и вирусологических лабораториях используют обычную лабораторную посуду: цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки. Помимо этого используют специальную посуду:
Пробирки
• биологические- с крупным дном, неразвернутым краем;
• центрифужные- сужены книзу, конической формы;
• преципитацию иные- очень узкие с внутренним диаметром 2-3 мм Стеклянные чашки Петри для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах. Их изготавливают из прозрачного стекла, не имеющего камней, пузырей. Высота чашки 20-30 мм, диаметр 60-200 мм
Пипетки
• градуированные должны соответствовать параметрам ГОСТа
• пастеровские- стеклянные трубки диаметром 5-7 мм, у которых один конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра
Специальная лабораторная посуда должна быть чистой и стерильной. Мытье производят ершами с мылом и содой. Новую посуду следует до мытья прокипятить в 1-2% растворе хлористоводородной кислоты. Сушат посуду в сушильном шкафу
Сухую посуду закрывают и помещают в пеналы. В пробирки вставляют ватные пробки и заворачивают в пачки по 5-10 штук. К чашкам Петри подбирают крышки и завертывают по одной или несколько штук. Пипетки закрывают ваткой с того конца, который берут в руки. Готовые пипетки заворачивают в бумагу и укладывают в пеналы. Стерилизация проводится в сухожаровом шкафу при температуре 180°С в течение 1 часа.
7)Этапы приготовления мазка
Для приготовления мазка необходимо иметь:
• Чистое обезжиренное предметное стекло.
• Бактериологическую петлю
• Культуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне.
• Спиртовку.
• Набор красок.
|
|
|
1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони.
Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры наносят петлей на предметное стекло.
Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в котором эмульгируют внесенный материал.
Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым, округлой формы, размером 1, 5-2 см.
2. Высушивание мазка производится при комнатной температуре.
3. Фиксация мазка производится с целью:
• Убить микробные клетки.
• Обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу.
• Облегчить дальнейшее окрашивание.
Фиксация мазка в пламени горелки производится 3-кратно, действие пламени должно длиться 2 секунды.
Для более нежной фиксации мазков крови, спирохет и простейших использующих химические фиксаторы:
• Метиловый спирт в течении 5-и минут.
• Этиловый спирт (96°) в течении 10-и минут.
• Смесь Никифорова — в течении 10-15 минут.
• Ацетон — в течении 5-и минут.
• Пары формалина — в течении нескольких секунд.
4. Окраска препаратов проводится:
• Простыми методами (водным фуксином Пфейффера, метиленовой синькой Леффлера), когда окрашивается вся клетка и используется только один краситель;
• Сложными методам, когда определяются клеточные структуры,
После экспозиции мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
8)Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
Световой микроскоп — это обязательная принадлежность любой микробиологической лаборатории. Разрешающая способность светового микроскопа 0, 2 мкм. Общее увеличение микроскопа определяется произведением объекта на увеличение окуляра.
|
|
|
Микроскопия с сухими объективами дает увеличение в 120-600 раз. Недостаток: часть лучей отклоняется в сторону и не достигается
хорошее освещение изучаемого объекта. Иммерсионные объективы — это объективы, которые погружают в жидкости (кедровое масло, персиковое масло). Поскольку показатели преломления стекла и иммерсионного масла практически одинаковы 1, 52, сохраняется четкость и ясность поля зрения. Полезное увеличение микроскопа достигает 2000 раз. Современный микроскоп — это точный оптический прибор, поэтому необходимо строго соблюдать ряд правил при работе с ним:
1) использовать правильное освещение;
2) хранить закрытым от пыли;
3) для чистки оптических частей применять кисточку или мягкую ткань, смоченную водой или спиртом. Раз в год микроскоп должен просматривать мастер-оптик.
9)метод грамма
Метод Грама введен в 1884 году датским микробиологом Гансом ХристианомГрамом и является важным таксономическим признаком.
К грамположительным бактериям относятся те, у которых комплекс, образуемый генцианвиолетом и йодом, удерживается при обработке спиртом.
Грамотрицательными называют те бактерии, которые не обладают свойством удерживать комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом.
Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианвеолета с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.
Методика окраски.
1. На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. Генцианвиолет основная краска.
2. Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Раствор Люголя протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.
3. Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течение ЗОсекунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. Спирт обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой.
5. Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Водный фуксин дополнительная краска. Грамположитель-ные бактерии (кокки) сине-фиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.
6. Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
|
|
|
