31)методы выявления ф.патогенности(токсигенности,гемолизины)

31)методы выявления ф. патогенности(токсигенности, гемолизины)

Выявление токсинов микроорганизмов. Обнаружение экзоток­синов лежит в основе лабораторной диагностики многих инфек­ционных заболеваний (ботулизма, энтеротоксемии овец и др. ), а также микотоксикозов. В этих случаях материал, предположи­тельно содержащий токсин, вводят (скармливают, наносят на поверхность кожи) чувствительным биологическим моделям (ла­бораторные, сельскохозяйственные животные и др. ) и по их ги­бели, заболеванию, изменениям в органах и тканях судят о нали­чии токсина.

Кроме того, обнаружение токсинов и определение их количе­ства необходимы для приготовления биопрепаратов. Например, иммунитет при ботулизме. Поэтому необ­ходимо точно определять количество токсина в культуральной жидкости. В этом случае устанавливают содержание токсина в 1 мл культуральной жидкости на чувствительных животных, рас­считывая LD₅₀, например, по методу Кербера.

Тест на гемолизин. Бактериальные гемолизины — обширная группа веществ-мембранотоксинов, которые вызыва­ют нарушение целостности мембраны эритроцитов и их лизис.

Исследуемую культуру уколом или дробно засевают в чашки Петри с 5%-м кровяным агаром, посевы инкубируют при 37 °С 24 ч. Гемолизин, выделяемый растущей культурой бактерий, диффундирует в толщу агара и вызывает лизис эритроцитов, что проявляется в виде светлой (бета-гемолиз) или полупрозрачной (альфа-гемолиз) зоны вокруг колоний. Гемолитическую актив­ность микроорганизма можно также определять его посевом в 1... 5%-й кровяной бульон, который после культивирования вы­деляющего гемолизин микроба становится прозрачным за счет лизиса эритроцитов.

32)методы выявления ф. верул-сти(ф. агрессии: лизоцима, гиалуронидаза, лецитоветиллазы)

Тест на гиалуронидазу. Гиалуронидаза — фер­мент, расщепляющий гиалуроновую кислоту и, как следствие, деполимеризующий межклеточное вещество. Рассматривают как фактор инвазивности бактерий

На поверхность агара в чашке Петри дробно засевают культу­ру P. multocida или S. equi. Затем в виде линии высевают на поверхность среды культуру микроорганизма, у которого выявля­ют способность к синтезу гиалуронидазы. Чашки с посевами ин­кубируют при 37 °С 16... 24 ч. Если исследуемый микроорганизм выделяет гиалуронидазу, то она диффундирует в толщу питательной среды и разрушает капсулу тест-микроба. При анализе посе­вов в косопроходящем пучке света колонии S. equi (P. multocida) вблизи «штриха» исследуемой культуры меньше по размеру, се­рого или голубого цвета в отличие от флуоресцирующих отдален­ных колоний.

Тест на лецитиназу. Лецитиназа расщепляет гидро­лизом лецитин. Готовят желточный агар: пептон — 20 г, гидро­фосфат натрия — 2, 5 г, натрий — 1 г, 0, 5%-й раствор сульфата магния — 0, 1 мл, глюкоза—1 г, агар—12, 5 г, вода дистиллиро­ванная — 500 мл. Устанавливают рН 7, 2... 7, 4, стерилизуют при 121 °С 15 мин, охлаждают до 55 º С, добавляют один стерильный желток на 500 мл среды, компоненты перемешивают и смесь раз­ливают в чашки Петри.

Исследуемую культуру засевают дробно на желточный агар, культивируют при 37... 38 °С 24... 48 ч. Положительный резуль­тат — появление зоны помутнения вокруг колоний.

 

 

33)методы определения персистентных свойств бактерий

Антилизоцимный фактор, направлен на инактивацию лизоцима и обеспечивает выживание возбудителя в макрофагах.

Антикомплементарный признак обеспечивает персистирование микробной клетки и характеризует способность инактивировать бактериальными клетками системы комплемента макроорганизма.

 

34)РА на стекле

Реакция агглютинации на предметном стекле используется для ускоренной постановки диагноза (идентификации аозбу-дитепя). Для этого на предметном стекле пастеровской пипеткой наносят каплю диагностической сыворотки и рядом на том же стекле помещают каплю физиологического раствора для контроля. Петлёй снимают небольшое количество исследуемого материала бактерий (можно брать бактерии из колоний на чашке, со скошенного агара) и вносят их в каплю сыворотки; размешивают до получения равномерной мути. Второй же комочек микробной массы размешивают в капле физиологического раствора. Через несколько минут при положительной реакции агглютинации в капле с сывороткой появляются хлопья, видимые на глаз на темном фоне, тогда как контрольная капля остаётся равномерно мутной. Мы работаем с брюшнотифозными сыворотками и соответствующими культурами.

Реакция широко применяется для серологической идентификации

выделенных микробов, а также при постановке ускоренных серологических

реакций.

Постановка реакции:

Пастеровской пипеткой наносят на предметное стекло каплю сыворотки в

нужных разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24-часовой

агаровой живой культуры или каплю диагностикума. Постановка реакции

должна сопровождаться контролем антигена и контролем сыворотки. Учет

реакции производят через 5-10 минут.

Компоненты:

1.     Антигены неизвестного вида;

2.     Известная иммунная сыворотка;

3.     Физиологический раствор.

 

⇐ Предыдущая567891011121314Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: