10) Метод Циль-Нильсена. 11)Окраска по Нейссеру(определение зерен волютина). 12)Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
10) Метод Циль-Нильсена Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания. Методика окраски:
11)Окраска по Нейссеру(определение зерен волютина) 1. Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислой синей 4 мин, затем сливают краску. 2. Промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 сек. 3. Не промывая водой, окрашивают везувином 1-3 мин. 4. Промывают водой, высушивают. NB! Тела бактерий окрашиваются в нежный светло-коричневый цвет, зерна волютина - в темно-синий, почти черный цвет. 12)Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли» Жгутики являются органами движения бактерий, состоят из белка флагеллина. По количеству и характеру расположения жгутиков различают бактерии, монотрихи, лофотрихи, амфитрихи и перитрихи. Жгутики обладают антигенными свойствами (Н-антиген) и дают возможность бактериям перемешаться вжидкой среде.
О наличии жгутиков можно судить по характеру движения бактерий в «раздавленной» и «висящей» каплях при опущенном конденсоре и частично прикрытойдиафрагме микроскопа. Метод «раздавленной капли» Культуру в изотоническом растворе хлорида натрия наносят на предметное стекло и сверху накладывают покровное. Капля материала должна быть такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступала за пределы покровного. Препарат рассматривают с иммерсионной системой и слегка опущенным конденсором. Метод «висячей капли» Необходимо иметь предметное стекло с лупочкой. Каплю культуры наносят на покровное стекло, сверху накладывают предметное стекло с лупочкой посредине, края которого предварительно обмазаны вазелином. Затем предметное стекло слегка прижимают к покровному, и препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.
13)Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические) Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на: ü Механическом разобщении бактериальных клеток o Метод Дригальского - распределение капли суспензии материала с ü помощью шпателя; o Рассев штрихом; o Метод Коха является количественным и позволяет определить ü количество бактерий в исследуемом материале ü Биологические методы: o Посев на элективные среды; o Метод Шукевича - посев материала в конденсат скошенного МПА для ü выделения чистых культур бактерий, обладающих ползучим ростом ü (например, протей); o Обработка кислотами и щелочами (например, микобактерии
ü туберкулеза); o Прогревание при 80°С для выделения споровых форм; o Заражение лабораторных животных - для диагностики зоонозов и др. ü (туляремия). Выделение чистой культуры микробов является обязательным этапом всякого бактериологического исследования. Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма. Метод механического разъединения микроорганизмов, находящихся в исследуемом материале, с целью получения изолированных колоний на поверхности или в глубине питательной среды. Очень широко применяются элективные питательные среды. При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, прибегают иногда к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроба, который предполагается выделить из исследуемого материала. Биологический метод выделения чистой культуры применяется при исследовании мокроты на содержание в ней пневмококков, микобактерий туберкулеза. Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три пробирки, содержащие по 15 мл мясо-пептонногоагара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43— 45 °С. В пробирку вносят одну бактериальную петлю исследуемого материала. После этого прокаленной и остуженной; петлей содержимое 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок. После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.
Воспользуйтесь поиском по сайту: ![]() ©2015 - 2025 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...
|