 |
14)метод дригальского. 15)Методы культивирования анаэробов(создание анаэробных условий). Химические методы. Биологический метод Фортнера
|
|
|
|
14)метод дригальского
Метод Дригальского основан на механическом разобщении на поверхности плотной, питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление
мазка* окраска по Граму). v
2. Посев на чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность
МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового
материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате
18-20 часов при температуре 37°С.
II этап.
1. Макроскопическое изучение колоний по величине, форме, окраске,
характеру поверхности, краев, консистенции. .
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление
мазка, окраска по Граму).
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37°С.
III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим - однородный рост, микроскопическим — однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признаками клетки).
IV этап.
Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам, токсигенности и другим признакам
- фагочувствительности
15)Методы культивирования анаэробов(создание анаэробных условий)
Сущность условий, необходимых для культивирования анаэробов, заключается в снижении парциального давления молекулярного кислорода.
Механические методы:
1. Посев уколом в столбик сахарногоагара.
2. Метод Виньял-Вейона: в расплавленный и остуженный до 50° Сагар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов — анаэробов.
|
|
|
3. Метод Перетца. Исследуемый материал вносят в 3 пробирки с физиологическим раствором, а затем в 3 пробирки с остуженным до 50° С МПА. Содержимое пробирок перемешивают и выливают в 3 стерильные чашки Петри, на дно которых предварительно кладут стерильное предметное стекло, через 18-20 часов инкубации в термостате под пластинками стекла вырастают анаэробы.
Физические методы:
1. Анаэростат — создание вакуумных условий.
2. Аппарат Киппа — замена воздуха индифферентным газом (водородом).
3. Среда Китт-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой адсорбционной способностью, 0. 5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слоем вазелиного масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода,
Химические методы
1. Прибор Омелянского — для поглощения кислорода используется пирогаллол.
2. Среда Вильсон — Блера. Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.
Биологический метод Фортнера
Чашку Петри с толстым слоем агараделят на 2 половины на одну половину засевают облигатный аэроб — «чудесную» палочку, на другую половину чашки засевают исследуемую анаэробную культуру. Чашку заливают растопленным парафином. Через 24 — 48 часов в чашке вырастают аэробы, затем, когда запас кислорода исчерпывается, начинают размножаться анаэробы.
16)Выделение чистой культуры анаэробов
I этап — обогащение на среде Китт-Тароцци, предварительно прокипяченной
|
|
|
в течение 30 минут. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для
уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются.
II этап - получение изолированных колоний. На среде Китт-Тароцци
обнаруживается помутнение с пузырьками газа.
Ш этап - выделение чистой культуры проводится по одному из следующих
методов:
А) По Цейсслеру - каплю материала со среды Китт-Тароцци засевают в
чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же
шпателем производят посев во второй и третьей чашках;
Б) По Вейнбергу - каплю материала со среды Китт-Тароцци переносят в
растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки
Веньял-Вейона и инкубируют в термостате.
IV и V этапы - идентификация в реакции нейтрализации на белых мышах.
17) Короткий «пестрый ряд». Рост E. coli и S. typhi.
Короткий пестрый ряд используется для изучения биохимических свойств возбудителей пищевых токсикоинфекций и определения рода бактерий.
Короткий пестрый ряд представляет собой набор сред разлитых в пробирки, скошенный МПА, бульон Хоттингера, МПЖ, среды Гисса с сахарами (лактоза, глюкоза, сахароза и маннит). В бульон Хоттингера под пробку помещают индикаторную бумажку, пропитанную уксуснокислым свинцом (для определения сероводорода), а в среду Гисса с глюкозой помещают газовичок для определения углекислого газа.
Методика посева:
Посев на среды короткого пестрого ряда проводят взвесью микробных клеток. Для посева на скошеннный МПА бактериологическую петлю прожигают, остужают, опускают во взвесь бактерий и делают посев штрихом на скосе. На все остальные среды посев делают при помощи пастеровской пипетки. Запаянный конец стерильной пастеровской пипетки обламывают над пламенем газовой горелки, после чего пипетку заполняют взвесью микробных клеток. Пробирку со средой осторожно приоткрывают над пламенем газовой горелки и капают в нее каплю взвеси, после чего пробирку быстро закрывают. После посева конец пастеровскую пипетки запаивают над пламенем газовой горелке, а саму пипетку помещают в емкость с дезинфекционным раствором. Штатив со средой короткого пестрого ряда помещают на 24 часа в термостат с температурой 37°С.
|
|
|
