26)бактериологич. Диагностика дисбактериоза киш-ка.

26)бактериологич. Диагностика дисбактериоза киш-ка.

Наиболее прост качественный метод исследования. Он позволяет выявить качественные изменения облигатной (постоянной) и факультативной (привнесенной) микрофлоры кишечника. В основе его лежит определение процентного соотношения колоний микроорганизмов.

Методом, отвечающим требованиям клиники, является количественный метод с обязательным посевом на бифидобактерии. Он же позволяет выявить снижение или повышение содержания кишечной палочки, ее гемолитических (расщепляющих белки) или лактозонегативных колоний, количество стафилококка и энтерококка. В основе метода лежит подсчет указанных микроорганизмов на 1 г фекалий. Выявление бактерий типа протея в любом количестве есть проявление кишечного дисбактериоза.

Состояние анаэробной микрофлоры кишечника (бифидобактерии) осуществляется указанием минимального разведения, в котором она выявляется. Доказательством наличия дисбактериоза является отсутствие роста бифидобактерии в разведении 10/7, резкое снижение количества кишечной палочки (менее 1 млн) при среднем содержании 300-400 млн на средах Эндо и Левина и 800 млн - на кровяном агаре, появление расщепляющей белки кишечной палочки, лактозонегативных бактерий более 20 млн/г, расщепляющего белок стафилококка и протея, грибковых микроорганизмов типа кандида, а также в случаях, когда кокковая микрофлора кишечника составляет более 25 % от количества кишечной палочки.

27)определение общего микробного числа воздуха по м. Коха и Короткова.

Для определения микробного числа воздуха в помещениях применяют следующие методы:

1) Седиментационный метод основан на принципе осаждения(седиментации). Две чашки Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 60 минут, после чего инкубируют при 37⁰ С 1 сутки. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших в обеих чашках:

менее 250 колоний – воздухчистый,

250-500 –загрязненныйв средней степени,

500 – загрязненный.

 

2) Аспирационный метод–аспирация определенного объема воздуха с высеванием содержащихся в нем бактерий на поверхность питательной среды с применением щелевого прибора Кротова.

 

Прибор Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром при этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей его поверхности, поскольку чашка находится в постоянном вращении. После инкубирования отобранных проб при температуре 37 ⁰С в течение 1-2 суток в зависимости от выделяемых микроорганизмов производится подсчет выросших колоний.

 

28) определение фекального загрязнения воды по коли-индексу.

Коли-индекс — количественные показатели фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, почвы и других объектов окружающей среды, основанные на исследовании содержания в них кишечной палочки.

Коли-индекс — количество кишечных палочек, обнаруживаемое на 1 л жидкости. Для определения коли-индекса используют метод мембранных фильтров. Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры №2 или №3, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируемые при t° 37°, а затем исследуют выросшие на поверхности фильтра темно-красные с металлическим блеском, розовые и прозрачные колонии. Из колоний каждого типа готовят мазки и окрашивают их по Граму. Колонии разных типов проверяют на оксидазную активность, которая должна быть отрицательной. Бесцветные и розовые колонии дополнительно засевают на полужидкую среду с глюкозой и индикатором, на которой в течение 24-часовой инкубации при t° 37° должны образовываться кислота и газ. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л.

 

29)заражение эксперемент-х животных(биол. метод)-в\б

Экспериментальное заражение лабораторных животных производится с целью:

- выделения из исследуемого материала чистой культуры возбудителя болезни,

- определения вида бактерий при диагностике болезни, т. е. идентификации;

- определения вирулентности;

- испытания на эффективность вакцин и лечебных сывороток.

Принцип метода:

А)Заражение-в/б

Б)оснащение: 1. исс. материал. (ЧК)

2. лаб. животное- белая мышь

3. инструменты.

Ход работы: 1. Приготовить взвесь исс. культуры

                   2. набрать взвесь в шприц (2мл)

                   3. зафиксировать животное в положении брюшком вверх, головой вниз под углом 45гр, диафрагма смещается к гр. Полости

                   4. проколоть левую паховую обл. перпендикулярно и вводить под углом 45гр. 0, 5-1мл. перед введением кожу обработать спиртом и йодом, после тоже самое.

                   5. животное промаркировать.

30) метод выявления ф. верулентности, адгезивности, капсулообр-я, аг-инг. Фагоцитоза.

А)Вирулентность определяют путем выявления факторовпатогенности, заражения экспериментальных животных, культур ткани или на экспериментальных моделях.

В        настоящее время для определения вирулентности стараются не использовать лабораторных животных (в связи с высокой стоимостью исследования и по этическим соображениям). С этой целью широко применяются другие методы определения вирулентности заражение культур тканей, куриных эмбрионов, культур простейших.

Б)Тест на адгезины. В адгезии бактерий принимают участие различные компоненты оболочки. Это свойство выявля­ют по способности исследуемого микроорганизма сорбироваться на различных эукариотических клетках (эритроциты, энтероциты) или других частицах (латекс). Еще один метод обнаружения адгезинов связан с их использованием в качестве антигенов в се­рологических реакциях. У эшерихий адгезивные свойства часто определяют по их способности агглютинировать эритроциты.

В лунки планшетов вносят по 50 мкл 4%-й суспензии отмытых эритроцитов морской свинки, 1%-й раствор D-маннозы, суспен­зию исследуемых бактерий с концентрацией клеток 109/мл. Па­раллельно ставят реакцию в отсутствие маннозы. Результат учи­тывают через 30... 60 мин. Положительная реакция — склеивание и оседание эритроцитов в виде «зонтика». Торможение агглюти­нации маннозой обозначают как маннозочувствительную ГА (гемагглютинация), отсутствие ингибирования — как маннозорезистентную ГА.

В)Метод выявления капсулообразования in vitro

 

Для изучения капсулообразования in vitro делают посевы нескольких капель исходной испытуемой взвеси в среду Государственного контрольного института медицинских биологических препаратов им. Тарасевича (ГКИ) и ставят в термостат при 37 °C.

Через 30 - 120 минут начинается капсулообразование in vitro. Следует считать, что через 16 - 18 часов все или абсолютное большинство B. anthracis, если таковые находятся в исследуемом материале, образуют на среде ГКИ капсулу.

Для наблюдения за капсулообразованием мазки из культур со среды ГКИ после подсыхания и фиксации в течение 15 минут метанолом окрашивают 5 - 10 минут синькой Леффлера и просматривают в микроскопе (х900). Микробы окрашиваются в синий цвет, а капсула - в розовый.

 

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: