Микробиологическая диагностика сальмонеллезов
Микробиологическая диагностика сальмонеллезов
Для исследования отбирают испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, мочу. При брюшном тифе также проводят забор проб из кожных высыпаний, желчи, дуоденального содержимого и секционного материала. Дополнительные объекты исследования: остатки пищи, употреблявшейся заболевшими, суточные пробы готовой пищи, корма животного и растительного происхождения, смывы с различного оборудования и других предметов, подозреваемых в качестве фактора передачи возбудителя.
Следует помнить, что сальмонеллы образуют сероводород, не ферментируют лактозу. Сальмонеллы (в отличие от шигелл) подвижны, дают положительные результаты с метиловым красным, цитратом и на лизин-декарбоксилазу; не образуют индол, не утилизируют малонат и не синтезируют уреазу. Следует производить повторные бактериологические исследования крови, которые при брюшном тифе и септицемиях нередко дают положительные результаты на 1-й неделе болезни. Положительные результаты при брюшном тифе может дать культуральное исследование костного мозга, а с 3 недели заболевания – посевы мочи.
Питательные среды для выделения и идентификации сальмонелл Среды обогащения. Селенитовый бульон с аминопептидом, селенитовая и магниевая среда, тетратионатовый бульон Мюллера, среда Кауффмана, 20 % жёлчный бульон. Дифференциальные среды. Среди дифференциально-диагностических сред для первичных посевов и высевов со сред обогащения выделяют высокоселективные (висмут-сульфитный агар или агар с бриллиантовым зеленым); среднеселективные (среда Плоскирева, слабощелочной питательный агар); низкоселективные (агары Эндо и Левина). Применение висмут-сульфитного агара позволяет быстро идентифицировать S. typhi, которые вследствие продукции сероводорода образуют черные колонии. Среды для первичной идентификации – агар Клиглера, комбинированная среда по Олькеницкому, среда Ресселя. На них определяют ферментацию лактозы, глюкозы, способность образовывать сероводород и газ, гидролиз мочевины.
Бактериологическая идентификация
Серологические исследования проводят для диагностики, а также для выявления и дифференциации различных форм носительства. Для диагностики брюшного тифа и паратифов наиболее часто применяют линейную реакцию агглютинации ( реакция Видаля ). Серийные (двукратные) разведения неизвестной сыворотки исследуют с известными сальмонеллезными антигенами. В качестве Аг наиболее удобно использовать монодиагностикумы к конкретным возбудителям. Исследования рекомендуют начинать с 7 сут (время нарастания титров АТ). Результаты интерпретируют следующим образом: § высокие или нарастающие (1: 160 и выше) титры О-антител свидетельствуют об активной инфекции; § высокие титры Н-антител (1: 160 и выше) указывают на перенесенную инфекцию или вакцинацию в прошлом; § высокие титры Vi-антител обнаруживаются у некоторых бактерионосителей. При дифдиагностике выделенных культур нередко прибегают также к постановке реакции Vi-агглютинации с сыворотками. Серологические реакции в этом случае используют для идентификации стандартными (известными) сыворотками неизвестных культур. Для диагностики сальмонеллезов и брюшного тифа применяют РПГА с цистеиновой пробой, позволяющей дифференцированно определять титры АТ класса Ig G.
Быстрая реакция агглютинации на стекле. Особенно полезна для предварительной идентификации культур. Реакцию ставят, смешивая известную сыворотку и неизвестную культуру на стеклянной пластинке, и исследуют под малым увеличением микроскопа. Агглютинация (если она имеет место) происходит в течение нескольких минут.
Сальмонеллезы - заболевания людей и животных, вызванные бактериями рода Salmonella. Однако под термином сальмонеллезы чаще всего имеют ввиду острые кишечные инфекции человека (гастроэнтериты), вызванные сальмонеллами, исключая сальмонеллы брюшного типа и паратифов.
Род назван в честь Киёси Шига, описавшего его типовой вид. Шигеллы – кишечные патогены человека и приматов; в различных странах поражения составляют до 20-60 % всех кишечных инфекций и известны как бактериальная дизентерия, или шигеллёз. Заболевания известны с глубокой древности (термин «дизентерия» ввел Гиппократ). В конце 19 века была установлена протозойная природа некоторых дизентерий, возникло представление об амебной дизентерии. Начало изучения шигеллёзов положили Шантемесс и Видаль (1888), в 1891 г. Григорьев выделил возбудитель в чистом виде, а его расширенное изучение провели Шига (1898) и Крузе (1900). Исследования Флекснера (1900), Зонне (1915), Штуцера и Шмица (1917) и др. авторов позволили выявить новые виды шигелл.
В соответствии с антигенной структурой О-антигена и биохимическими свойствами известные 39 серотипов шигелл разделяют на 4 вида:
Культуральные свойства. По морфологическим признакам шигеллы неотличимы от других представителей семейства Enterobacteriaceae. Хорошо культивируются на простых ПС. На твердых питательных средах образуют гладкие (S) и шероховатые (R) колонии. S-колонии круглые, куполообразные, гладкие, полупрозрачные в проходящем свете. R-колонии неправильной формы, плоские, тусклые, с шероховатой поверхностью и неровными краями. Возможно образование переходных форм. На жидких средах S-формы дают равномерное помутнение, R-формы – придонный осадок, среда остается прозрачной. Биохимические свойства. По сравнению с прочими кишечными бактериями шигеллы биохимически практически инертны. Все шигеллы не образуют сероводород на агаре Клиглера, трехсахарно-железном агаре и агаре с ацетатом свинца. Эти характеристики могут служить косвенным подтверждением принадлежности выделенной культуры к роду Shigella. В некоторых случаях эти признаки могут дать ориентировочные преставления и о видовой принадлежности.
Shigella dysenteriae (Григорьева-Шига) обладают наименьшей ферментативной активностью, ферментируют лишь глюкозу без газообразования; они известны как маннит-отрицательные шигеллы (прочие виды утилизируют маннит). Вызывают наиболее тяжелую форму дизентерии. Shigella flexneri, как правило, не ферментируют глюкозу, дульцит и ксилозу; слабо активны в отношении мальтозы, сахарозы, арабинозы и рамнозы (не ферментируют либо расщепляют не ранее 6-10 сут), почти все образуют индол. Shigella boydii (Бойда) обладают весьма сходной биохимической активностью, но они дополнительно также ферментируют ксилозу, дульцит и арабинозу (обычно в первые 24 ч). Некоторые шигеллы Бойда также способны ферментировать мальтозу (на 6-20 сут), что имеет практическое значение при идентификации культур. Shigella sonnei не ферментируют сорбит и дульцит, не образуют индол, но расщепляют ксилозу, арабинозу, что сближает их с бактериями серогруппы С. Основное отличие – способность сбраживать рамнозу, лактозу и сахарозу (в более поздние сроки). Основные биохимические признаки шигелл, необходимые для идентификации при выделении чистой культуры:
Все шигеллы обладают соматическим О-антигеном, в зависимости от строения которого происходит их разделение на серовары, а Shigella flexneri внутри сероваров подразделяется на подсеровары. S. sonnei обладает антигеном 1-й фазы, который является К-антигеном. Shigella dysenteriae (Григорьева-Шига) образуют эндо- и экзотоксин (шига-токсин белковой природы), и вызывают самую тяжелую форму дизентерии. Они обладают специфическим антигеном, серологически однородным и обособленным от других представителей этой группы. Антигенный комплекс шигелл включает 2 термостабильных Аг (типовые и групповые) и термолабильные Аг. Термолабильные Аг (включают К-Аг, сходный с К-Аг эшерихий) обнаружены у всех шигелл (исключая шигеллы Флекснера и Зонне); эти Аг способны маскировать О-Аг и вызывать О-инагглютинабельность (действие снимается кипячением в течение 1ч). Менее изучены термолабильные фимбриальные Аг. У Shigella flexneri они структурно близки аналогичным антигенам E. coli. Очевидно, что это в некоторой степени объясняет агглютинацию эшерихий сыворотками к шигеллам Флекснера, а также широкое распространение антител (АТ) к шигеллам Флекснера в сыворотке людей и животных.
Эпидемиология. Бактериальная дизентерия распространена повсеместно, особенно в слаборазвитых странах. С введением противоэпидемических мероприятий заболеваемость в развитых странах резко снизилась. Следует отметить, что эпидемиологию шигеллёзов отличает изменение этиологической структуры: до конца I Мировой войны основным возбудителем была S. dysenteriae; затем стали доминировать поражения, вызванные S. flexneri; после II Мировой войны – S. sonnei. Это разделение условно, т. к. в некоторых регионах могут циркулировать другие виды – Цхинвали. Единственный природный резервуар шигелл – человек. Вероятность развития заболевания более высока у лиц со сниженной резистентностью и заболеваниями ЖКТ. Источник заражения – больные и бактерионосители. Период носительства – 1-4 нед, но может удлиняться. Основные механизмы передачи – фекально-оральный и контактно-бытовой (через воду, пищевые продукты). Определенную роль играют насекомые-переносчики – мухи, тараканы и др., переносящие возбудитель с испражнений на пищевые продукты. Инфицирующая доза – 200-1000 ж. м. к. , что обычно достаточно для развития заболевания (зависит от вирулентности возбудителя, состояния иммунитета человека и т. д. ). Бактериальную дизентерию регистрируют в течение всего года с подъемом заболеваемости в теплый сезон.
Воспользуйтесь поиском по сайту: ![]() ©2015 - 2025 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...
|