Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

Основу диагностики сальмонеллезов, выявления носительства, изучения обсемененности объектов окружающей среды составляют бактериологические исследования, проводимые по стандартной схеме.

Для исследования отбирают испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, мочу. При брюшном тифе также проводят забор проб из кожных высыпаний, желчи, дуоденального содержимого и секционного материала.

Дополнительные объекты исследования: остатки пищи, употреблявшейся заболевшими, суточные пробы готовой пищи, корма животного и растительного происхождения, смывы с различного оборудования и других предметов, подозреваемых в качестве фактора передачи возбудителя.

Оптимальными сроками для проведения бактериологических исследований при гастроинтестинальных формах сальмонеллезов считают первые дни заболевания, тогда как при генерализованных формах (тиф, паратифы) – конец 2-й и начало 3-й недели. Число положительных результатов значительно возрастает с увеличением кратности обследования. Получение положительных результатов наиболее вероятно при тестировании испражнений.

Следует помнить, что сальмонеллы образуют сероводород, не ферментируют лактозу. Сальмонеллы (в отличие от шигелл) подвижны, дают положительные результаты с метиловым красным, цитратом и на лизин-декарбоксилазу; не образуют индол, не утилизируют малонат и не синтезируют уреазу. Следует производить повторные бактериологические исследования крови, которые при брюшном тифе и септицемиях нередко дают положительные результаты на 1-й неделе болезни. Положительные результаты при брюшном тифе может дать культуральное исследование костного мозга, а с 3 недели заболевания – посевы мочи.

Питательные среды для выделения и идентификации сальмонелл

Среды обогащения. Селенитовый бульон с аминопептидом, селенитовая и магниевая среда, тетратионатовый бульон Мюллера, среда Кауффмана, 20 % жёлчный бульон.

Дифференциальные среды. Среди дифференциально-диагностических сред для первичных посевов и высевов со сред обогащения выделяют высокоселективные (висмут-сульфитный агар или агар с бриллиантовым зеленым); среднеселективные (среда Плоскирева, слабощелочной питательный агар); низкоселективные (агары Эндо и Левина). Применение висмут-сульфитного агара позволяет быстро идентифицировать S. typhi, которые вследствие продукции сероводорода образуют черные колонии.

Среды для первичной идентификации – агар Клиглера, комбинированная среда по Олькеницкому, среда Ресселя. На них определяют ферментацию лактозы, глюкозы, способность образовывать сероводород и газ, гидролиз мочевины.

Для дальнейшей идентификации используют среду с мочевиной по Кристенсену, среду с мочевиной по Преусу, среду Кларка, среды с углеводами, среды для определения индолообразования, среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином), глицериново-фуксиновый бульон Штерна и полужидкий агар для определения подвижности.

Бактериологическая идентификация

Подозрительные колонии (не < 3) со сред обогащения пересевают в пробирки со скошенным МПА или одной из кобинированных сред (Олькеницкого, Клиглера, Ресселя). Высев на МПА делают для последующей постановки ориентировочной реакции агглютинации (РА). Результаты РА требуют последующего подтверждения на этапе завершения биохимической идентификации.

Одновременно изучают морфологию и тинкториальные свойства бактерий, готовя мазки и окрашивая их по Граму. При отсутствии подозрительных колоний чашки с висмут-сульфитным агаром оставляют в термостате еще на 24 ч, после чего просматривают и при обнаружении подозрительных колоний продолжают исследование. В противном случае работу с посевами прекращают.

Для дальнейшей работы (изучение ферментативной активности) отбирают колонии уреаза-отрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу, не ферментирующих сахарозу и образующих сероводород. Культуры пересевают со среды Олькеницкого в среду Хисса с маннитом, 1 % пептонную воду для определения образования индола и в полужидкий агар для определения подвижности. При выделении культур, имеющих ферментативные свойства, характерные для сальмонелл, изучают их антигенную структуру в РА на стекле с О- и Н-агглютинирующими диагностическими антисыворотками, а также определяют биовары. По результатам РА ставят окончательный бактериологический диагноз, а исследование прекращают.

Следует помнить, что бактерии тифопаратифозной группы не разлагают сахарозу, лактозу и салицин; не образуют индол.

Серологические исследования проводят для диагностики, а также для выявления и дифференциации различных форм носительства.

Для диагностики брюшного тифа и паратифов наиболее часто применяют линейную реакцию агглютинации ( реакция Видаля ). Серийные (двукратные) разведения неизвестной сыворотки исследуют с известными сальмонеллезными антигенами. В качестве Аг наиболее удобно использовать монодиагностикумы к конкретным возбудителям. Исследования рекомендуют начинать с 7 сут (время нарастания титров АТ). Результаты интерпретируют следующим образом:

§ высокие или нарастающие (1: 160 и выше) титры О-антител свидетельствуют об активной инфекции;

§ высокие титры Н-антител (1: 160 и выше) указывают на перенесенную инфекцию или вакцинацию в прошлом;

§ высокие титры Vi-антител обнаруживаются у некоторых бактерионосителей.

При дифдиагностике выделенных культур нередко прибегают также к постановке реакции Vi-агглютинации с сыворотками. Серологические реакции в этом случае используют для идентификации стандартными (известными) сыворотками неизвестных культур.

Для диагностики сальмонеллезов и брюшного тифа применяют РПГА с цистеиновой пробой, позволяющей дифференцированно определять титры АТ класса Ig G.

Быстрая реакция агглютинации на стекле. Особенно полезна для предварительной идентификации культур. Реакцию ставят, смешивая известную сыворотку и неизвестную культуру на стеклянной пластинке, и исследуют под малым увеличением микроскопа. Агглютинация (если она имеет место) происходит в течение нескольких минут.

Возбудители сальмонеллезов и пищевых токсикоинфекций

Сальмонеллезы - заболевания людей и животных, вызванные бактериями рода Salmonella. Однако под термином сальмонеллезы чаще всего имеют ввиду острые кишечные инфекции человека (гастроэнтериты), вызван­ные сальмонеллами, исключая сальмонеллы брюшного типа и паратифов.

Сальмонелллезный гастроэнтерит может быть вызван многочисленными ви­дами (по новой номенклатуре серовары или серотипы ) рода. Но наиболее часто сальмонеллезы вызываются S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Choleraesuis и другими сальмонеллами, Основной источник болезни - домаш­ние животные (свиньи, крупный и мелкий рогатый скот и др. ) и птицы (куры, гуси, утки и др. ). Механизм заражения - фекально-оральный. Основ­ной путь передачи - пищевой: факторами передачи являются яйца птиц, мясо животных и птиц.  

Род Shigella

Род назван в честь Киёси Шига, описавшего его типовой вид. Шигеллы – кишечные патогены человека и приматов; в различных странах поражения составляют до 20-60 % всех кишечных инфекций и известны как бактериальная дизентерия, или шигеллёз. Заболевания известны с глубокой древности (термин «дизентерия» ввел Гиппократ). В конце 19 века была установлена протозойная природа некоторых дизентерий, возникло представление об амебной дизентерии.

Начало изучения шигеллёзов положили Шантемесс и Видаль (1888), в 1891 г. Григорьев выделил возбудитель в чистом виде, а его расширенное изучение провели Шига (1898) и Крузе (1900). Исследования Флекснера (1900), Зонне (1915), Штуцера и Шмица (1917) и др. авторов позволили выявить новые виды шигелл.

Шигеллы вызывают заболевания, называемые шигеллезами (старое название – бактериальная дизентерия), которые являются антропонозными инфекциями с фекально-оральным механизмом передачи. Заболевание, вызываемое Shigella dysenteriae, чаще имеет контактно-бытовой путь передачи; Shigella flexneri – водный; а Shigella sonnei – алиментарный.

Естественная восприимчивость людей высокая, поэтому шигеллезы распространены повсеместно, чаще возникают в виде вспышек алиментарного и водного характера.

В соответствии с антигенной структурой О-антигена и биохимическими свойствами известные 39 серотипов шигелл разделяют на 4 вида:

Shigella dysenteriae (серогруппа А ) – бактерии Григорьева-Шига, впервые описаны французскими учеными Шантем е ссом и Вид а лем в 1888г. и русскими учеными Кубасовым и Григорьевым в 1891 г. Обладают наибольшей вирулентностью;

Shigella flexneri (серогруппа B ) – впервые описаны в 1917 г. американцем Флекснером. Представляют собой большую группу бактерий, сходных по биохимическим признакам ( ферментируют маннит ) и антигенной структуре, характеризующейся большим количеством серологических типов.

Shigella boydii (серогруппа C ) – шигеллы Б о йда;

Shigella sonnei (серогруппа D) – шигеллы З о нне.

Дальнейшая дифференциация на типы и подтипы произведена с учетом особенностей антигенной структуры. Подтипы существуют лишь в серогруппе В и отражают варьирование состава групповых антигенов в пределах основных видов.

Морфология. Род шигелл образуют прямые неподвижные грам(-) факультативно анаэробные палочки, лишенные жгутиков. Хемоорганотрофы, метаболизм – дыхательный и ферментативный. Температурный оптимум – 37 °С. Оксидаза-отрицательны, каталаза-положительны, образование индола непостоянно. Углеводы разлагают с образованием кислоты, а некоторые штаммы – кислоты и газа. Типовой вид – Shigella dysenteriae.

Культуральные свойства. По морфологическим признакам шигеллы неотличимы от других представителей семейства Enterobacteriaceae. Хорошо культивируются на простых ПС. На твердых питательных средах образуют гладкие (S) и шероховатые (R) колонии. S-колонии круглые, куполообразные, гладкие, полупрозрачные в проходящем свете. R-колонии неправильной формы, плоские, тусклые, с шероховатой поверхностью и неровными краями. Возможно образование переходных форм. На жидких средах S-формы дают равномерное помутнение, R-формы – придонный осадок, среда остается прозрачной.

Биохимические свойства. По сравнению с прочими кишечными бактериями шигеллы биохимически практически инертны. Все шигеллы не образуют сероводород на агаре Клиглера, трехсахарно-железном агаре и агаре с ацетатом свинца. Эти характеристики могут служить косвенным подтверждением принадлежности выделенной культуры к роду Shigella. В некоторых случаях эти признаки могут дать ориентировочные преставления и о видовой принадлежности.

Shigella dysenteriae (Григорьева-Шига) обладают наименьшей ферментативной активностью, ферментируют лишь глюкозу без газообразования; они известны как маннит-отрицательные шигеллы (прочие виды утилизируют маннит). Вызывают наиболее тяжелую форму дизентерии.

Shigella flexneri, как правило, не ферментируют глюкозу, дульцит и ксилозу; слабо активны в отношении мальтозы, сахарозы, арабинозы и рамнозы (не ферментируют либо расщепляют не ранее 6-10 сут), почти все образуют индол.

Shigella boydii (Бойда) обладают весьма сходной биохимической активностью, но они дополнительно также ферментируют ксилозу, дульцит и арабинозу (обычно в первые 24 ч). Некоторые шигеллы Бойда также способны ферментировать мальтозу (на 6-20 сут), что имеет практическое значение при идентификации культур.

Shigella sonnei не ферментируют сорбит и дульцит, не образуют индол, но расщепляют ксилозу, арабинозу, что сближает их с бактериями серогруппы С. Основное отличие – способность сбраживать рамнозу, лактозу и сахарозу (в более поздние сроки).

Основные биохимические признаки шигелл, необходимые для идентификации при выделении чистой культуры:

отсутствие газообразования при ферментации глюкозы;

отсутствие продукции сероводорода;

отсутствие ферментации лактозы в течение 48 ч.

Антигенная структура шигелл

Все шигеллы обладают соматическим О-антигеном, в зависимости от строения которого происходит их разделение на серовары, а Shigella flexneri внутри сероваров подразделяется на подсеровары. S. sonnei обладает антигеном 1-й фазы, который является К-антигеном.

Shigella dysenteriae (Григорьева-Шига) образуют эндо- и экзотоксин (шига-токсин белковой природы), и вызывают самую тяжелую форму дизентерии. Они обладают специфическим антигеном, серологически однородным и обособленным от других представителей этой группы.

Антигенный комплекс шигелл включает 2 термостабильных Аг (типовые и групповые) и термолабильные Аг. Термолабильные Аг (включают К-Аг, сходный с К-Аг эшерихий) обнаружены у всех шигелл (исключая шигеллы Флекснера и Зонне); эти Аг способны маскировать О-Аг и вызывать О-инагглютинабельность (действие снимается кипячением в течение 1ч).

Менее изучены термолабильные фимбриальные Аг. У Shigella flexneri они структурно близки аналогичным антигенам E. coli. Очевидно, что это в некоторой степени объясняет агглютинацию эшерихий сыворотками к шигеллам Флекснера, а также широкое распространение антител (АТ) к шигеллам Флекснера в сыворотке людей и животных.

Определение антигенной структуры проводят для окончательной идентификации бактерий.

Эпидемиология. Бактериальная дизентерия распространена повсеместно, особенно в слаборазвитых странах. С введением противоэпидемических мероприятий заболеваемость в развитых странах резко снизилась.

Следует отметить, что эпидемиологию шигеллёзов отличает изменение этиологической структуры: до конца I Мировой войны основным возбудителем была S. dysenteriae; затем стали доминировать поражения, вызванные S. flexneri; после II Мировой войны – S. sonnei. Это разделение условно, т. к. в некоторых регионах могут циркулировать другие виды – Цхинвали.

Единственный природный резервуар шигелл – человек. Вероятность развития заболевания более высока у лиц со сниженной резистентностью и заболеваниями ЖКТ. Источник заражения – больные и бактерионосители. Период носительства – 1-4 нед, но может удлиняться.

Основные механизмы передачи – фекально-оральный и контактно-бытовой (через воду, пищевые продукты). Определенную роль играют насекомые-переносчики –  мухи, тараканы и др., переносящие возбудитель с испражнений на пищевые продукты.

Инфицирующая доза – 200-1000 ж. м. к. , что обычно достаточно для развития заболевания (зависит от вирулентности возбудителя, состояния иммунитета человека и т. д. ). Бактериальную дизентерию регистрируют в течение всего года с подъемом заболеваемости в теплый сезон.

⇐ Предыдущая123456Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: