Окраска мазков

Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А. И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящей бумаги в течение неограниченно долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.

Окраска мазков красящей бумагой. На высу­шенный и фиксированный препарат наносят несколько ка­пель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2´ 2 см. В течение всего времени окрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется мето­дом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно сни­мают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь ма­зок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание произ­водят через фильтровальную бумагу, задерживающую части­цы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор краси­теля.

Для микроскопического исследования приготовленные мазки, высу­шенные и зафиксированные, подвергают окраске. Окраска бывает простая и сложная. Простая окраска заключается в нанесении на мазок какой-либо одной краски на определенный промежуток времени. Чаще всего для про­стой окраски применяют спирто-водный (1: 10) фуксин Пфейффера, леффлеровскую метиленовую синьку и сафранин. Эозин, как кислая краска, упо­требляется только для окраски цитоплазмы клеток и подкраски фона. Кислый фуксин совершенно непригоден для окраски бактерий.

При простой окраске микробные тела воспринимают цвет применяемой краски так же интенсивно, как и ядра клеток; в то же время цитоплазма и весь фон мазка (если это не мазок из чистой культуры) окрашиваются в тот же цвет, но несколько бледнее. Фуксин и генцианвиолет относятся к более интенсивно окрашивающим краскам; метиленовая синька окрашивает зна­чительно бледнее. Восприятие окраски зависит не только от свойств красок, но и от свойств подвергаемых окраске микробов. Большинство микробов легко и быстро окрашивается водными или спирто-водными растворами красок.

Для трудно воспринимающих окраску микробов (например, возбудитель туберкулеза) или их частей (споры, жгутики и пр. ) приходится применять более интенсивные (форсированные) методы окраски.

Форсировать окраску можно: а) повышением красящей способности основных красок, б) удлинением срока окраски и в) действием протрав.

Для повышения красящей способности воздействуют на краску высокой температурой (нагреванием) до появления паров (вплоть до кипения). Варьируя степень нагревания, можно получать различные степени силы окраски.

Удлинение срока воздействия красящего раствора на объект также может в известной мере усилить степень окраски.

Протравами являются вещества, облегчающие проникновение краски внутрь клеток: фенол, танин, уксусная и хромовая кислоты, щелочи и др. Механизм действия протрав различен: в одних случаях протравы действуют на краски, в других—на способность клеток к восприятию окраски. Про­травами воздействуют на мазок или перед действием краски (например, при окраске жгутиков), или совместно с краской (фенол в фуксине Циля), или же после действия краски (люголевский раствор в методе Грама).

При окраске мазков, кроме красок, применяются еще так называемые обесцвечивающие или раскрашивающие вещества. Последние служат для удаления излишка краски из всей микробной клетки или же из ее части при слишком энергичной адсорбции краски материалом или при перекра­шивании его с применением нагревания и т. п.

В качестве обесцвечивающих веществ применяются: спирт, 5% водный раствор серной кислоты, 20—30% водный раствор азотной кислоты, 3% рас­твор соляной кислоты в абсолютном алкоголе и др.

Для окраски мазков необходимо иметь на рабочем столе набор крася­щих растворов во флаконах (лучше оранжевого стекла) с пипетками и рези­новыми баллончиками. Флаконы должны быть снабжены этикетками с соответствующими обозначениями; во избежание быстрого загрязнения красками этикетки рекомендуется пропитывать расплавленным парафином (при помощи кисточки). Флаконы с красками помещают в деревянный штатив - колодку (рис. 2).

Рис. 2. Флаконы для красок

Для смывания красок и ополаскивания мазков необходимы бутыль с тубусом на подставке для дистиллированной воды и кристаллиза­тор (сливная чашка) с подставкой-мостиком для мазков. Подставка-мостик представляет собой две стеклянные трубки или палочки, соединенные на концах отрезками резиновых трубок. Ши­рина подставки должна быть меньше длины предметного стекла. Кроме того, для окраски мазков необходимы спиртовая (или газовая) горелка и пинцет Корнэ для предмет­ных стекол. При окраске с подогреванием пред­метное стекло захватывают пинцетом и выдер­живают определенное время над пламенем. При продолжительной окраске употребляют кюветки или небольшие стаканчики, куда наливают крас­ку и погружают в нее мазок. При одновремен­ной окраске в кюветке нескольких мазков, для того, чтобы стекла не слипались, их соединяют по два намазанной стороной наружу и укреп­ляют резиновыми кольцами, нарезанными из трубок. После окраски мазки промывают водой и тщательно высушивают фильтровальной бу­магой.

Работами последних лет выявлена возможность со­хранения при окраске жизнеспособности микробов, главным образом, спороносных. Поэтому необходима достаточная фиксация мазков. Про­мывные воды (при окрасках) нужно сливать в специальный сосуд с последующим обезврежи­ванием, отработанную фильтровальную бумагу (после просушки мазков) не выбрасывать, а сжигать, использованные мазки дезинфицировать.