 |
Модификация по Синеву. Модификация по Эткинсу. Окраска кислотоустойчивых микробов. Окраска по методу Циль-Нильсена
|
|
|
|
Модификация по Синеву.
Вариант Синева: вместо карболового или анилинового раствора генцианвиолета берут полоски фильтровальной бумаги, заранее пропитанные следующим раствором:
| Кристаллвиолет | 1 г |
| Спирт 96° | 100 мл |
| Глицерин (не обязательно) | 5 мл |
Кристаллвиолет может быть заменен метилвиолетом или генцианвиолетом в равных количествах. Через сутки стояния раствор краски готов и может сохраняться долгое время. Фильтровальную бумагу (один слой), помещенную на стекло, обливают указанным раствором краски, высушивают и режут на полоски размером 20´ 40 мм; бумажки хранят в темной склянке с притертой пробкой.
Клемпарская предлагает для окраски препаратов по методу Грама в модификации Синева при отсутствии фильтровальной бумаги пропитывать 10% спиртовым раствором генцианвиолета полоски обыкновенной газетной бумаги (типографская краска не мешает). Техника окраски та же.
Техника окраски. На фиксированный мазок наливают 2—3 капли дистиллированной воды, опускают и придавливают к стеклу пинцетом полоску бумаги, приготовленной вышеуказанным способом. Бумажку через 2 минуты смывают водой или, лучше, снимают пинцетом. Дальше производится обработка раствором Люголя, спиртом или йодированным спиртом, водой и дополнительная окраска.
Модификация по Синеву особенно удобна для походных лабораторий, в экспедиционной работе и т. п.; получаются хорошие препараты, свободные от осадков, при малом расходе краски.
Клемпарская рекомендует готовить красящие бумажки для метода Грама и Циль-Нильсена по следующей прописи: для основной окраски (кристаллвиолет, генцианвиолет и метилвиолет) к 1 г краски добавить 10 мл спирта и 0, 5 мл глицерина (краску всыпать в спирт и добавить глицерин), для фуксина — 10 мл спирта; для дополнительной окраски (сафранин, метиленовая синька)—к 1 г краски добавить 10 мл нагретого до 45—50° спирта, 1 мл насыщенного водного раствора буры и 0, 5 мл глицерина (сначала нагревают спирт, добавляют буру и глицерин, а затем краску); для раствора Люголя — к 1 г кристаллического йода добавить 2, 5 г йодистого калия и 10 мл дистиллированной воды.
|
|
|
Модификация по Эткинсу.
Для данной модификации можно применять любую из красок, относящихся к производным парарозанилина (кристаллвиолет, генцианвиолет или метилвиолет), с раствором сернокислого анилина. Растворы красок получаются очень стойкие и совершенно не дают осадков. Для окраски необходимы следующие растворы:
| I. Генцианвиолет | |
| Насыщенный спиртовой раствор | 1 часть |
| Сернокислый анилин (1% водный раствор) | 3 части |
При отсутствии готового сернокислого анилина таковой может быть приготовлен следующим образом. К 100 мл 5% водного раствора серной кислоты прибавляют по каплям 20 мл анилинового масла. Выпавший обильный рыхлый белый осадок отфильтровывают, снимают с фильтра и разбавляют в 30 мл 95° спирта, а затем снова отфильтровывают и осадок высушивают.
| II. Раствор йода | |
| Кристаллический йод | 2 г |
| Едкий натр (4%) | 10 мл |
После растворения прибавляют 90 мл дистиллированной воды.
Для дополнительной окраски применяют спирто-водный сафранин (можно везувин или пиронин): 1 часть насыщенного спиртового раствора краски на 10 частей дистиллированной воды.
Техника окраски:
1) окрасить мазок раствором I в течение минуты,
2) промыть водой,
3) обработать раствором II в течение минуты,
4) обесцветить спиртом в течение 5 минут,
5) дополнительно окрасить в течение 10 секунд,
6) промыть водой и высушить.
Окраска кислотоустойчивых микробов
Кислотоустойчивость микробов зависит не только от наличия в них значительного количества липидов (около 36%), но и от ряда других химических и физических факторов. Так, например, установлено, что при нарушении целостности фиксированных клеток возбудителя туберкулеза путем растирания их между стеклами эти микробы теряют кислотоустойчивость.
|
|
|
Окраска по методу Циль-Нильсена
1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2—3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и промывают мазок водой.
2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным раствором серной кислоты в течение 3—5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3% раствор соляной кислоты.
3. Мазок тщательно промывают водой.
4. Споласкивают 96°спиртом.
5. Снова промывают водой.
6. Докрашивают в течение 3—5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором (1: 1000) малахитовой зелени или метиловой зелени.
7. Краску смывают водой, препарат высушивают.
Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — рубиново-красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото- и спиртоустойчивых сапрофитов — синие. Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо растворов кислот и спирта особо рекомендуется применение солянокислого алкоголя (соляной кислоты 3 мл + 96° спирта 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой по основной прописи. Указанным методом достигается одновременное испытание бацилл на кислото- и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото- и спиртоустойчивы.
|
|
|
