 |
Окраска в модификации Синева. Метод Труанта для окрашивания на кислотоустойчивость. Метод Гонзеля. Метод Бунге и Траутенрота
|
|
|
|
Окраска в модификации Синева.
Фильтровальную бумагу пропитывают 2% спиртовым раствором основного фуксина, сушат и нарезают на полоски. На фиксированный мазок наносят несколько капель дистиллированной воды, накладывают полоску окрашенной бумаги, нагревают до появления паров и далее обрабатывают по оригинальной прописи Циль-Нильсена.
Мирохин (1941) рекомендует при отсутствии основного фуксина окрашивать мазки на туберкулез по видоизмененному способу Чистовича:
1. окраска генцианвиолетом или метилвиолетом на анилиновой воде с подогреванием — 2 минуты,
2. промывание водой,
3. обесцвечивание 2-5% азотной кислотой 8—10 секунд,
4. промывание водой,
5. обесцвечивание спиртом до побледнения,
6. промывание водой,
7. докрашивание 0, 1% сафранином несколько секунд,
8. промывание водой и высушивание.
Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — фиолетовые на красном фоне. Кислотоустойчивость того или иного микроорганизма можно определить флуоресцентным методом. У этого метода есть преимущество, заключающееся в том, что стекла с образцами, в которых подозревается присутствие, например, микобактерий, можно просматривать под объективом с увеличением 60´ , а не 100´ ; следовательно, все стекло целиком можно просмотреть за короткое время.
Метод Труанта для окрашивания на кислотоустойчивость.
| Реактив для флуоресцентной окраски: | |
| Аурамин О, С141000 | 1, 5 г |
| Родамин В, С1 749 | 0, 75 г |
| Глицерин | 75 мл |
| Фенол (кристаллы, расплавленные при нагревании) | 10 мл |
| Дистиллированная вода | 50 мл |
Оба красителя тщательно перемешивают с 25 мл воды и фенолом. Затем добавляют оставшуюся воду и глицерин и снова перемешивают. Получившийся реактив для флуоресцентной окраски фильтруют через стекловату и хранят при 4°С или при комнатной температуре.
|
|
|
| Растворитель для обесцвечивания: | |
| Этанол 70% (объем/объем) | 99, 5 мл |
| Соляная кислота (концентрированная) | 0, 5 мл |
| Дополнительный краситель: | |
| Марганцевокислый калий | 0, 5 г |
| Дистиллированная вода | 99, 5 мл |
Выполнение методики:
1. Погружают фиксированный нагреванием бактериальный мазок на 15 минут в реактив для флуоресцентной окраски при 20—37°С.
2. Промывают мазок под слабой, падающей под углом струей дистиллированной воды, пока сток не станет бесцветным.
3. На 2—3 минуты погружают мазок в обесцвечивающий растворитель, затем промывают дистиллированной водой, как описано выше.
4. Погружают мазок в дополнительный краситель на 2—4 минуты.
5. Отмывают дистиллированной водой, как описано выше, и подсушивают фильтровальной бумагой.
Просматривают образцы в люминесцентный микроскоп с использованием возбуждающего светофильтра типа BG-12 и запирающего светофильтра типа OG-1. Клетки кислотоустойчивых бактерий флуоресцируют желто-оранжевым светом на темном фоне.
Для микроскопической дифференциальной диагностики туберкулезных палочек от спиртоподатливых сапрофитов существует несколько методов.
Метод Гонзеля
1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым раствором фуксина при нагревании до кипения в течение 2 минут.
2. Промывают водой и высушивают.
3. Обесцвечивают смесью соляной кислоты (3 части) и абсолютного или 95° алкоголя (97 частей) в течение 10 минут.
4. Докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки, разбавленным водой в 2 раза.
5. Промывают водой, высушивают.
Микроскопическая картина: туберкулезные палочки—красные.
Метод Бунге и Траутенрота
1. Помещают препарат на 3 часа в абсолютный алкоголь (для извлечения жира).
|
|
|
2. Наносят на мазок 5% водный раствор хромовой кислоты на 15 минут.
3. Промывают водой.
4. Окрашивают при подогревании карболовым раствором фуксина.
5. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение 3 минут.
6. Докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки не менее 5 минут.
Микроскопическая картина: туберкулезные палочки—красные.
Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)
Препарат окрашивают карболовым фуксином при подогревании до появления паров, промывают водой, а затем окрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки в течение 2—3 минут. Мазок обмывают водой, высушивают.
Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — красные на синем фоне, а кислотоустойчивые, но спиртоподатливые палочки — синие.
Если требуется проверить в уже окрашенном по Циль-Нильсену мазке обнаруженные кислотоустойчивые палочки на спиртоустойчивость, нужно: удалить с препарата кедровое масло бензином или ксилолом, докрасить мазок насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки в течение 2-5 минут, обмыть водой и высушить. Кислото- и спиртоустойчивые палочки сохраняют свой красный цвет, а спиртоподатливые окрасятся в синий цвет.
Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)
1. На фиксированный мазок наливают профильтрованную смесь из 10 мл насыщенного спиртового раствора метилвиолета и 100 мл 2% карболовой воды (смесь пригодна 3 дня) и нагревают до кипения 4—5 раз, постоянно добавляя свежий раствор краски, или же оставляют на 24-48 часов при комнатной температуре;
2. Не промывая водой, на мазок наливают раствор Люголя на 10—15 минут;
3. Промывают водой;
4. Обесцвечивают сначала 5% раствором азотной кислоты в течение минуты, затем:
5. Обесцвечивают 3% раствором соляной кислоты в точение 10 секунд
6. Обесцвечивают смесью спирта и ацетона (1: 1) до полного обесцвечивания мазка (до прекращения растворения краски);
7. Дополнительно окрашивают разведенным (1: 10) фуксином или 1% водным раствором сафранина в течение нескольких секунд;
8. Ополаскивают водой, высушивают.
Микроскопическая картина: на красном (коричневом) фоне — сине-фиолетовые палочки и резко ограниченные зерна.
|
|
|
