Уплотнение сред. Методы стерилизации

Уплотнение сред

Для уплотнения сред применяют агар-агар, желатину и кремнекислый гель.

Агар-агар используют особенно часто. Это сложный полисахарид, получаемый из некоторых морских водорослей. Его выпускают в виде пластин, «стебельков» или порошка. Агар-агар удобен тем, что большинство микроорганизмов не используют его в качестве питательного субстрата. В воде агар-агар образует гели, плавящиеся при 100 °С, а затвердевающие при температуре около 40 °С. Поэтому на агаризованных средах можно культивировать микроорганизмы практически при любой подходящей для их роста температуре. При остывании агар выделяет " конденсационную" воду. Чем меньше концентрация агара, тем больше выделяется воды.

Чаще всего агар-агар добавляют к средам в количестве 2 %. Если хотят получить более влажную среду, вносят 0, 5–1, 5 %, а более плотную и сухую – 3 % агар-агара.

Следует отметить, что в слабокислых, нейтральных и слабощелочных средах агар-агар сохраняет способность образовывать гель после нескольких циклов плавления и затвердевания, а также после повторной стерилизации. Однако в кислой среде при рН ниже 5, 5 агар-агар при стерилизации частично гидролизуется и поэтому после стерилизации часто не образует гель. В этом случае агар-агар следует стерилизовать отдельно от среды в определенном объеме воды и добавлять в среду после стерилизации. Для этого стерильный водный агар-агар расплавляют на водяной бане и приливают при постоянном перемешивании к стерильной, предварительно подогретой среде.

Желатина – это белок, получаемый путем вываривания костей и хрящей животных. Образуемый желатиной гель плавится при температуре 23− 26 °С, которая ниже обычной температуры инкубации многих микроорганизмов (30− 37 °С). Кроме того, желатина разжижается протеолитическими ферментами, выделяющимися некоторыми микроорганизмами в среду. Эти свойства желатины сильно ограничивают ее применение в качестве уплотняющего средства. Желатину используют главным образом для выявления протеолитической активности микроорганизмов, а также получения «гигантских» и глубинных колоний дрожжей с целью их идентификации. В первом случае употребляют мясопептонную, а во втором – сусловую желатину.

Желатину добавляют к жидким средам в количестве 10− 15 %, оставляют ее набухать 10− 15 мин и нагревают на водяной бане до полного растворения. Доводят рН среды до 6, 8− 7, 0. Все среды с желатиной стерилизуют при 0, 5 атм в течение 15 мин. Повторная стерилизация желатиновых сред, особенно при рН сред ниже 6, 0 или выше 7, 3 не рекомендуется, так как желатина при этом теряет способность образовывать гель.

Кремнекислый гель (силикагель) используют как твердую основу для синтетических сред строго определенного состава, поскольку он является веществом неорганической природы.

Методы стерилизации

Стерилизация в переводе с латинского языка означает обеспложивание. В микробиологической практике стерилизацией называют уничтожение микроорганизмов и их спор или полное удаление микроорганизмов из обработанной среды. Стерилизуют питательные среды, посуду, инструменты и другие предметы для того, чтобы не допустить развития посторонней микрофлоры в исследуемом материале.

Существуют различные способы стерилизации: термическая стерилизация – кипячением, прокаливанием в пламени, горячим воздухом, насыщенным паром под давлением (автоклавирование), текучим паром; холодная стерилизация – фильтрованием, воздействием различными физическими факторами (ультрафиолетовыми лучами, ультразвуком) или химическими веществами (антисептиками).

Стерилизация лучистой энергией. Действие ультрафиолетовых лучей находит широкое использование для стерилизации воздуха в лабораторных помещениях, в цехах промышленных предприятий. Для обеззараживания воздуха используют бактерицидные лампы. Ввиду возможного неблагоприятного действия ультрафиолетовых лучей на организм человека бактерицидные лампы включают только при отсутствии людей в помещении.

Химический метод стерилизации применяется при дезинфекции. Дезинфекция – это способ уничтожения микроорганизмов при помощи сильнодействующих химических веществ или так называемых антисептиков. Гибель микроорганизмов при дезинфекции происходит в основном в результате гидролиза компонентов клетки, коагуляции белков, инактивации клеточных ферментов.

К группе антисептиков относятся неорганические и органические вещества. Из неорганических антисептиков широко используются неорганические кислоты, щелочи и соли (0, 1− 0, 2 % растворы сулемы), хлорная известь 10− 20 %, йод; из органических веществ – этиловый и бутиловый спирты, альдегиды, органические кислоты и растворители (3− 5 % раствор фенола, 0, 2− 0, 5 % раствор хлорамина и 1− 4 % раствор формалина).

В лабораторной практике методы дезинфекции применяют для обеззараживания рабочего стола, рук, камер для посевов.

Способ стерилизации выбирают в зависимости от свойств стерилизуемого объекта и цели исследования.