3.3. Персистентные инфекции. 4. Подходы к диагностике и отбору образцов

 3. 3. Персистентные инфекции

Персистентно виремические животные являются непрерывным источником вируса для других животных и главным резервуаром ВВД КРС в популяции. В популяции, где не применяется серьезная программа по контролю ВВД, приблизительно 1-2% КРС персистентно инфицированы. Во время вспышек в интактном стаде или племенной группе, если контакт произошел в первом триместре беременности, очень высокий процент выживших телят будет персистентно инфицирован. Если персистентно инфицированное животное

умирает, то патогномонических поражений в результате ВВД КРС не наблюдается и патология усложнена вторичными инфекциями другими агентами. Некоторые персистентно инфицированные животные доживут до сексуальной зрелости и могут дать приплод, но их потомство всегда будет персистентно инфицировано. Животные, которых продают или используют для искусственного разведения, должны быть подвергнуты скринингу, для гарантии того, что они не являются персистентно инфицированными.

 3. 4. Болезнь слизистых оболочек

Персистентно виремические животные могут в последствии быть подвержены болезни слизистых оболочек (Brownlie et al, 1985). Однако такие случаи редки. Синдром был результатом инфекции персистентно инфицированного животного антигенно-подобным цитопатическим вирусом, которая может возникнуть посредством суперинфекции, рекомбинации между нецитопатическими биотипами или мутации персистентного биотипа (Brownlie, 1990). Обычно не требуется специфического подтверждения того, что персистентно инфицированное животное заболело болезнью слизистых, так как это в основном только научное любопытство и имеет небольшое практическое значение, в остальном животное является персистентно инфицированным ВВД КРС. Однако случаи болезни слизистых могут быть первым указанием на то, что в стаде присутствует инфекция ВВД КРС и необходимо провести более глубокое исследование и вмешательство.

 3. 5. Сперма и эмбрионы

У персистентно инфицированных быков сперма обычно имеет плохое качество и является высоко инфекционной. У них наблюдается сниженная фертильность (McGowan & Kirkland, 1995). Все быки, используемые для естественного или искусственного осеменения должны пройти скрининг на наличие как острой, так и персистирующей инфекции ВВД. Редкий случай, возможно, в результате острой инфекции во время периода полового созревания, может привести к персистирующей инфекции семенника и таким образом сероположительным быкам, которые периодически выделяют вирус со спермой (Voges et al., 1998). Это явление также наблюдалось после вакцинации аттенуированным вирусом (Givens et al., 2007). Коровы-доноры эмбрионов персистентно инфицированные ВВД КРС также представляют потенциальный источник инфекции, особенно из-за очень высоких концентраций ВВД КРС в утробной и вагинальной жидкости. В то время как ооциты без интактного  вителлинового слоя были восприимчивы к инфекции in vivo , большинство ооцитов остаются неинфицированными ВВД КРС. Здоровое неинфицированное поколение так же было «спасено» от персистентно инфицированных животных посредством использования экстенсивного промывания эмбрионов и оплодотворения in vitro. Самки КРС, используемые в качестве получателей эмбрионов должны всегда подвергаться скринингу для подтверждения того, что они не являются персистентно инфицированными и в идеале являются серопозитивными или были вакцинированы, по крайней мере, за 4 недели перед первым использованием.

Биологические материалы, используемы для методов оплодотворения in vitro (бычья сыворотка, культуры клеток КРС) имеют высокий риск

контаминации и должны быть подвергнуты скринингу на ВВД КРС. Случаи очевидного заноса вируса через такие методы наглядно свидетельствовали о данном риске. Считается важным, что сыворотка, используемая в среде, должна быть свободной от контаминантов, как описано в Главе 1. 1. 9. Тестирование биологических материалов на стерильность и свобода от контаминации, с использованием методов, описанных в Разделе В. 3. 1. данной Главы.

4. Подходы к диагностике и отбору образцов

По сравнению с персистентно инфицированными животными остро инфицированные животные выделяют относительно низкие уровни вируса и в течение короткого промежутка времени (обычно 7-10 дней), но клинические признаки могут наблюдаться во время поздней стадии виремии, тем самым сокращая время на обнаружение вируса в дальнейшем. В случаях респираторной или энтеральной болезни образцы следует отбирать от определенного количества инфицированных животных, предпочтительнее отбирая недавно инфицированных животных. Из ноздрей и конъюнктивы животных, больных респираторной болезнью или из прямой кишки или фекалий, при наличии энтеральных признаков, необходимо отбирать смывы. Легкие и селезенку предпочтительно отбирать от павших животных. Вирусную РНК можно обнаружить при помощи ОТ-ПЦР и она имеет преимущество в том, что является высоко чувствительной и может обнаружить геном из неинфекционного вируса. Так как уровни вируса очень низкие, не всегда является целесообразным проводить выделение вируса пока нет необходимости давать характеристику задействованному штамму ВВД КРС. Серологическое тестирование, которое проводилось на парных сыворотках животных в острой стадии болезни и переболевших животных (отобранные, по крайней мере, на 21 день после отбора пробы в острой стадии болезни и от 8-10 животных) является целесообразным и дает высокую вероятность установления или исключения инфицирования ВВД КРС.

Подтверждение того, что аборты, мертворождения и перинатальная смерть вызваны ВВД КРС, часто очень трудно установить, так как между первоначальным инфицированием и смертью или удалением плода может быть длительная задержка. При отборе проб необходимо принять во внимание необходимость обнаружения либо компонентов вируса, либо антител. Для обнаружения вируса предпочтительнее отбирать легкие и селезенку, в то время как перикардиальная и плевральная жидкости являются идеальными жидкостями для серологических исследований. Необходимо проверять желудок и новорожденных телят для подтверждения того, что сосание не имело место. В то время как в некоторых случаях вирус может быть выделен из тканей плода, необходимо уделить внимание обнаружению вирусного антигена посредством ИФА или РНК посредством ОТ-ПЦР в реальном времени. Что касается серологических исследований, как ИФА, так и реакция вируснейтрализации являются подходящими, хотя качество образца и бактериальная контаминация могут поставить под угрозу способность обнаруживать антитела при помощи реакции вируснейтрализации. Серологические исследования стельных самок, особенно проведенные на группе животных, представляют ценность, если их задача состоит в определении того, имело ли место инфицирование в группе в недавнее время. Высокий титр антител (> 1/1000) в материнской сыворотке говорит о фетальной инфекции и предположительно возникает из-за того, что сама попадает под расширенное воздействие вируса из-за плода.