 |
4. 2. Персистирующие инфекции. 4. 3. Болезнь слизистых. 4. 4. Репродуктивные материалы. В. Методы диагностики
|
|
|
|
4. 2. Персистирующие инфекции
В прошлом, при идентификации персистентно инфицированных животных в значительной степени опирались на использовании выделения вируса на клеточных культурах. Однако анализы ИФА и ОТ ПЦР в реальном времени для обнаружения антигена, имеющие высокую чувствительность, широко используются для обнаружения вирусных антигенов или РНК как у живых, так у мертвых животных. Выделение вируса, направленное на обнаружение нецитопатического ВД КРС в крови, также используется, тогда как в некоторых странах вирус был идентифицирован посредством иммуногистохимии (IHC). Образцы кожи были отобраны от живых животных, тогда как подходящим является большой диапазон тканей мертвых животных. Как выделение вируса, так и иммуногистохимия являются трудозатратными и дорогими, а так же сложными технически. Выделение вируса из крови может быть затруднено из-за наличия материнских антител к ВВД КРС у телят в возрасте менее 4-5 месяцев. У животных более старшего возраста с персистирующей виремичной инфекцией могут присутствовать низкие уровни антител из-за их способности видоизменять серологическую специфичность к штаммам ВВД КРС (включая вакцины), антигенно отличающимся от персистирующего вируса (Brownlie, 1990). Пробы сборного молока или пробы молока от отдельной коровы использовались для мониторинга молочных стад на наличие персистентно инфицированных животных. Были использованы ИФА для обнаружения антигена, ПЦР в реальном времени и выделение вируса. Для подтверждения диагноза персистирующей инфекции необходимо провести повторное тестирование животных через интервал равный трем неделям посредством тестирования образцов крови на наличие вируса и на доказательства сероконверсии. Повторное тестирование образцов кожи необходимо проводить с осторожностью, так как было продемонстрировано, что в некоторых острых случаях вирусный антиген может сохраняться в коже в течение нескольких недель (Cornish et al., 2005).
|
|
|
4. 3. Болезнь слизистых
Для лабораторного подтверждения диагноза болезни слизистых необходимо выделить цитопатический вирус, хотя это не применялось в целях плановой диагностики. Данный биотип может быть иногда выделен из крови, но его всегда можно выделить из разнообразия других тканей, особенно селезенки, кишечника и пейеровой бляшки. Выделение вируса можно проводить на селезенке, которую легко отобрать и которая бывает редко токсичной для культуры клеток.
4. 4. Репродуктивные материалы
Пробы от быков-доноров спермы нужно отбирать для тестирования на отсутствие инфекции ВВД КРС до отбора спермы в соответствии с Кодексом МЭБ по наземным животным. Необходимо подтвердить, что эти быки не являются персистентно инфицированными, у них нет острой инфекции и необходимо установить их серологический статус. Данное первоначальное тестирование необходимо выполнять на цельной крови или пробах сыворотки. Для определения того, что серопозитивный бык не имеет персистирующей тестикулярной инфекции (PTI), образцы спермы должны быть отобраны три раза через интервал равный семи дням из-за возможности периодического выделения вируса низкого уровня, особенно во время ранних стадий инфицирования. Также существует необходимость представить несколько трубочек от каждого отбора или определенный объем свежей спермы. Особое внимание необходимо уделить соблюдению рекомендаций по транспортировке проб и лаборатория документирует
состояние образцов по прибытии в лабораторию. Дальнейшая информация по сбору, транспортировке и требованиям к тестированию представлена в последующих разделах.
|
|
|
В. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
Таблица 1 Методы тестирования, доступные для диагностики вируса вирусной диареи КРС и их задача
1 Рекомендуется применение комбинации методов идентификации возбудителя на том же клиническом образце.
Разъяснение: +++= рекомендуемый метод; ++= подходящий метод,; += может быть использован в некоторых ситуациях, но стоимость, надежность и другие факторы могут в значительной степени отграничить его применение; - = не подходит для данной задачи, n/a – не применяется.
Несмотря на то, что не все тесты, перечисленные как категория +++ или ++ были подвергнуты формальной валидации, характер их рутинного использования и тот факт, что они широко использовались без двусмысленных результатов делают их приемлемыми для использования.
ИФА – иммуноферментный анализ; IHC- иммуногистохимия; NA-нуклеиновая кислота; ОТ-ПЦР – полимеразная цепная реакция; ISH-in-situ гибридизация; VN- нейтрализация вируса.
|
|
|
