 |
2.1.2. Критерии качества (стерильность, чистота, свобода от посторонних агентов)
|
|
|
|
2. 1. 2. Критерии качества (стерильность, чистота, свобода от посторонних агентов)
Очень важно, чтобы все материалы, используемые для приготовления большого количества антигенов, были подвергнуты развернутому скринингу для обеспечения свободы от посторонних агентов. Они включают исходный посевной вирус и рабочий посевной вирус, клеточные культуры, и все добавки к среде, такие как бовиная сыворотка. Особенно важно обеспечить, чтобы любая используемая сыворотка от КРС была свободна от обоих занесенных вирусов ВД КРС всех генотипов и антител против штаммов ВВД КРС, так как низкие уровни как вируса, так и антител могут маскировать наличие другого. Материалы и вакцинные вирусы должны быть исследованы на стерильность и свободу от контаминации другими агентами, особенно вирусами, как описано в главе 1. 1. 8. и главе 1. 1. 9.
2. 1. 3. Валидация вакцинного штамма
Все вакцины должны пройти стандартные тесты на эффективность. Тесты должны включать, как минимум, демонстрацию реакции нейтрализующих антител после вакцинации, снижение выделения вируса после контрольного заражения у вакцинированного КРС и в идеале предотвращение виремии. Проведение тестов на эффективность вакцин против ВВД КРС посредством оценки клинических параметров у нестельных животных может быть ограничено из-за трудности стабильного установления клинических признаков, но при их применении, необходимо контролировать такие параметры, как снижение ректальной температурной реакции и лейкопению. Хотя при использовании метода выделения вируса в клеточных культурах, может быть трудным стабильно демонстрировать низкие уровни виремии, ассоциированные с острой инфекцией, ПЦР в реальном времени можно считать альтернативным методом для установления уровней циркулирующего вируса.
|
|
|
Если вакцина подвергается основным исследованиям, эффективность вакцинации можно, наконец, измерить способностью предотвращать трансплацетную передачу. Если наблюдается существенное снижение и в идеале полное предотвращение фетального инфицирования, ожидается, что вакцина будет высокоэффективной в других ситуациях (например, профилактика респираторных болезней). Подходящая система контрольного заражения может применяться с использованием интраназального введения нецитопатического вируса стельным коровам между 60м и 90м днем стельности (Brownlie et al., 1995). Обычно в результате этой системы будет произведено персистентно инфицированное потомство неимуннизированных коров. В странах, где обычно встречаются вирусы ВВД КРС необходимо измерять эффективность защиты против инфицирования вирусом ВВВ КРС типа 2.
2. 2. Метод производства
2. 2. 1. Процедура
Как цитопатические, так и нецитопатические биотипы будут расти в разных клеточных культурах бовиного происхождения. Могут использоваться стандартные процедуры, сбор урожая нецитопатического вируса предполагается на 4-7 день и цитопатического вируса на 2-4 день. Оптимальный урожай инфекционного вируса будет зависеть от нескольких факторов, включая культуральную среду, используемый изолят и первоначальный коэффициент высева вируса. Эти фактора необходимо учитывать и кинетику репликации вируса необходимо исследовать для установления оптимальных условий для крупномасштабного производства
вируса. Независимо от того, является ли вакцина живой или инактивированной важная цель состоит в производстве расплодки вируса с высоким титром. Этот балк-продукт антигена может впоследствии быть приготовлен в соответствии с рассматриваемым типом вакцины.
|
|
|
2. 2. 2. Требования к ингредиентам
Наибольшее количество вакцин против ВВД КРС выращивают в культурах клеток от КРС, в которые часто добавляют компоненты среды животного происхождения. Материалом, представляющим особое беспокойство, является бовиная сыворотка из-за потенциала контаминации вирусами ВД КРС и антителами к этим вирусам. Эти занесенные контаминанты не только влияют на эффективность производства, но могут замаскировать наличие низких уровней инфекционного ВВД КРС, которые могут иметь нежелательные характеристики. Кроме того, вирусные инокуляты нужно тестировать на стерильность и свободу от контаминации другими агентами, особенно вирусами, в соответствии с главой 1. 1. 8 и 1. 1. 9. Далее материалы от КРС, а также овец и коз, должны происходить из страны с незначительным риском трансмиссивной губкообразной энцефалопатии КРС (ТГЭ) (смотри Главу 1. 1. 9).
2. 2. 3. Внутренний контроль
Внутренний контроль является частью производственного процесса. Культуры необходимо регулярно проверять для гарантии того, чтобы они оставались свободными от контаминации и для мониторинга здоровья клеток и развития или отсутствия ЦПЭ, если необходимо. Тогда как основным требованием для эффективности является способность индуцировать приемлемый ответ нейтрализующих антител, во время производства, целевые концентрации антигена, требуемые для получения приемлемого ответа можно контролировать косвенным образом, посредством оценки количества инфекционного вируса или производимой массы антигена. Для инактивированных вакцин инфекционность оценивают перед инактивацией. Для инактивированных вакцин кинетика инактивации должна быть установлена таким образом, чтобы можно было определить и включить в регулярные процессы производства подходящие пределы безопасности. В конце производства нужно проводить анализы клеточных культур in vitro для подтверждения полноты инактивации. Эти тесты на безопасность должны включать достаточное количество пассажей и объем инокулята для обеспечения обнаружения низких уровней инфекционного вируса при его наличии.
|
|
|
