 |
Справочный материал. ЗАНЯТИЕ № 4. Тема: Бактериологический метод диагностики. Дыхание бактерий. Культивирование анаэробных бактерий
|
|
|
|
Справочный материал
Другие методы выделения чистых культур бактерий.
А) Культуральный способ
Этот способ используется для выделения бактерий рода Протеус, которые растут как правило, на обычных питательных средах сплошной пленкой (ползучий рост). Для выделения чистой культуры протея исследуемый материал засевают по методу Шукевича у основания скошенной части агара в конденсационную воду. Через сутки на всей поверхности скошенной части агара отмечается рост протея, в то время как другие ассоцианты остаются на месте нанесения материала.
Б) Физический способ выделения чистой культуры бактерий
Он используется для выделения споровых бактерий. Для этого смесь бактерий, содержащих споровые микроорганизмы, подвергают кипячению в течение 5 минут для уничтожения неспоровых бактерий. После этого кипяченый материал засевается штрихом в чашки Петри на одну ее половину, а на другую засевается смесью до кипячения.
В) Химический способ выделения бактерий
Этот метод используется для выделения кислотоустойчивых бактерий. Исследуемый материал обрабатывается 5% серной кислотой, все некислотоустойчивые микробы погибают. После этого материал засевают на питательную среду.
С) Биологический способ выделения чистой культуры
Этот способ заключается в том, что исследуемым материалом заражают лабораторное животное, чувствительное к какому-то микробу, содержащемуся в этом материале. У животных возникает типичный инфекционный процесс с накоплением соответствующего возбудителя во внутренних органах, из которых легко выделяется чистая культура.
ЗАНЯТИЕ № 4
Тема: Бактериологический метод диагностики. Дыхание бактерий. Культивирование анаэробных бактерий
|
|
|
Вопросы для подготовки
1. Бактериологический метод диагностики, его этапы, цель.
2. Дыхание бактерий. Аэробный и анаэробный типы дыхания. Классификация микроорганизмов по типам дыхания (строгие аэробы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы, микроаэрофилы).
3. Методы выделения анаэробов. Питательные среды.
Задания для самостоятельной работы студентов
Задание №1
Бактериологический метод исследования.
Выделить из смеси бактерий чистые культуры бактерий и провести их идентификацию.
Изучаемый объект – смесь бактерий. По готовым демонстрациям провести бактериологическое исследование по дням. Полученные данные занести в таблицу:
| День исследования | Исследуемый материал | Ход исследования | Результат |
1 день исследования – изучить мазок, приготовленный из смеси и окрашенный по Граму. При микроскопии мазка установить, какие морфологические виды микробов присутствуют в мазке, определить их тинкториальные свойства. Произвести условный посев смеси штрихом на МПА для получения изолированных колоний.
2 день исследования – в посевах на чашках Петри изучить макроскопические и микроскопические особенности каждой колонии (см. справочные материалы).
Изучить мазок, приготовленный из части изучаемых колоний. Убедиться, что в колонии содержатся одинаковые по морфологии бактерии. Мазки окрашены по Граму.
Из оставшейся части колоний делают посев на скошенный агар для накопления чистой культуры.
3 день исследования – изучить характер роста бактерий на скошенном агаре. Проверить чистоту культур. Сделать высев с агара на пестрый ряд и в МПБ с целью изучения биохимических свойств бактерий.
4 день исследования – провести идентификацию чистых культур бактерий.
|
|
|
Учесть результаты посевов на средах Гиса и на МПБ:
а) На средах с углеводами отметить наличие кислых продуктов расщепления углеводов и газообразование.
б) На МПБ обратить внимание на характер роста, отметить наличие продуктов гидролиза белка (сероводорода и индола).
Проанализировать все полученные свойства микробов (морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические) и установить видовую принадлежность выделенных бактерий, пользуясь справочными таблицами
Задание №2
Изучить приборы и способы культивирования анаэробов.
Приборы: Анаэростат, эксикатор
Способы: Виньяль-Вейона, Аристовского, Фортнера, Перетца
Питательные среды: высокий столбик сахарного агара, молоко, среда Китта-Тароцци, среда Вильсон-Блера, среда Цейслера.
Составить таблицу, классифицирующую способы культивирования анаэробов.
Справочный материал
Макроскопические признаки колоний
В проходящем свете:
1. величина колоний (мелкие, средние, крупные)
2. форма колоний (круглая, неправильная)
3. прозрачность (прозрачная, непрозрачная)
В отраженном свете:
1. высота колонии (плоская, плосковыпуклая, куполообразная)
2. поверхность колоний (гладкая, блестящая, шероховатая, матовая)
3. цвет колоний (бесцветная, пигментная, цвет пигмента)
Микроскопические признаки колоний
Изучаются под микроскопом с увеличением объектива 8х, со слегка опущенным конденсором. Эмульгируемость колоний в физиологическом растворе (хорошо или плохо эмульгируется) проверяется при приготовлении из колоний мазков с целью микроскопии их.
1. край колонии (правильно закругленный, волнистый, фестончатый, зубчатый, бахромчатый, петлеобразный)
2. структура колоний (гомогенная, негомогенная, аморфная, зернистая)
3. консистенция колоний (мягкая, слизистая, хрупкая).
|
|
|
