 |
Задания к практической работе студентов
|
|
|
|
Задания к практической работе студентов
Задание №1
Провести индикацию и титрование дизентерийного бактериофага.
Для приготовления биопрепаратов из бактериофагов используют в основном три источника:
лизогенные культуры бактерий
фекалии выздоравливающих больных
сточные воды
Допустим, необходимо выделить дизентерийный бактериофаг из сточных вод. На первом этапе проводят индикацию дизентерийного бактериофага в сточных водах методом фаговой дорожки:
а) на чашку Петри с МПА засевают газоном культуру дизентерийных бактерий, затем на поверхность посева закапывают фильтрат сточной воды стекающей каплей. Посевы инкубируют в термостате в течение 18 часов. Учесть результаты по готовым демонстрационным посевам.
При положительном ответе проводят определение исходного титра бактериофага по Аппельману.
б) Для титрования фага готовят его десятикратные разведения, в которые добавляют эталонную культуру дизентерийных бактерий (2 млрд. м. т. в 1 мл). Пробирки помещают в термостат на сутки.
Учесть исходный титр бактериофага.
в) Если титр недостаточен (необходимый титр для лечебных бактериофагов должен быть не менее 10-8), бактериофаги несколько раз пассируются на дизентерийных клетках, а затем вновь титруются. Учесть титр бактериофага после пассирования, сделать заключение.
Примечание: при достижении необходимого титра бактериофаг стерилизуется фильтрованием через бактериальные фильтры, проходит контроль на стерильность и расфасовывается в стерильные ампулы или флаконы.
Задание №2
По готовым посевам определить титр дизентерийного бактериофага по Грациа. Для этого готовят десятикратные разведения фага, которые смешивают со стандартной культурой дизентерийных бактерий в объеме 0, 1 мл каждое разведение бактериофага и расплавленным и слегка остуженным агаром. Полученную смесь выливают на чашку Петри с МПА вторым агаровым слоем и после застывания смеси инкубируют в термостате 24 часа. Подсчитать количество «негативных колоний» бактериофага, умножить на степень разведения фага и объем из расчета на 1мл. Это и будет титр бактериофага по Грациа.
|
|
|
Задание №3
Провести идентификацию холерных бактерий по фаголизабельным свойствам. Для этого выделенную чистую культуру бактерий засевают газоном на чашку Петри с щелочным агаром и закапывают на поверхность посева разные холерные батериофаги (С4 и Эль-Тор2). Посевы инкубируют в термостате сутки. Учесть результаты посева и сделать заключение.
Задание №4
В отделении возникла вспышка стафилококковой инфекции. При бактериологическом исследовании больных и сотрудников (врач К., санитарка Л., медсестра А. ) был выделен гноеродный стафилококк. Провести фаготипирование гноеродного стафилококка с помощью типовых стафилококковых бактериофагов и установить источник инфекции для больных. Результаты зарисовать и ответить на следующие вопросы:
Какой применен метод диагностики?
Что такое типовые бактериофаги?
Кто явился источником инфицирования больных?
ЗАНЯТИЕ № 14
Тема: Генетика бактерий
Вопросы для подготовки
1. Генетические детерминанты бактерий (нуклеоид, плазмиды, транспозоны, инсерционные последовательности), особенности их строение и функции. Генотип и фенотип бактерий.
2. Классификация видов изменчивости.
3. Фенотипическая (модификационная) изменчивость, ее суть и особенности.
4. Генотипическая изменчивость, ее суть, особенности, разновидности.
5. Мутации, их виды. Мутагены, основные группы. Механизм развития мутаций. Репаративные механизмы, их биологическая значимость.
|
|
|
6. Виды генетических рекомбинаций: трансформация, трансдукция, коньюгация, их механизмы биологическая значимость.
7. Плазмиды, их характеристика. Основные виды плазмид, характеристика, биологическая значимость.
8. Использование бактериоциногении и бактериоциночувствительности бактериальных культур как эпидемиологического маркера для установления идентичности культур различного происхождения.
Задания к практической работе студентов
Задание № 1
Учесть результаты готового опыта по индукции мутаций.
Постановка опыта по индукции мутаций у стафилококка с помощью УФЛ как мутагена. На две чашки Петри с питательной средой, в которую добавлен пенициллин засеяли шпателем 0, 1 мл 1 млрд/мл суспензии стафилококка, чувствительного к пенициллину. Одна чашке оставляется в качестве контроля и подписана «контроль». Вторая подвергается УФ-облучению в течение 4-х секунд и подписана «опыт». Чашки ставят в термостат на сутки.
При учете результатов опыта определить наличие роста в контрольной и опытных чашках, подсчитать число выросших колоний. При оценке опыта ответить на следующие вопросы:
1. Удался ли опыт?
2. Какая мутация получается в опыте, а какая в контроле?
3. Что является мутагеном? Каков его механизм действия?
4. Какой признак микроба подвергся изменению?
5. Что является фактором селекции, обнаруживающим данный мутант?
6. Вычислить частоту спонтанных и индуцированных мутаций.
|
|
|
