 |
Определение группы крови (система АВ0)
|
|
|
|
Групповая принадлежность крови определяется по наличию реакции агглютинации при помощи реактивов, содержащих АТ к эритроцитарным агглютиногенам А и В. Реакцию проводят при комнатной температуре.
Определение группы крови системы AB0 с помощью стандартных изогемагглютинизирующих сывороток
Оснащение
Стандартные наборы сывороток системы АВ0 2 серий. Планшет (тарелка) с луночками для определения группы крови с соответствующей маркировкой.
Стандартные сыворотки содержат только агглютинины соответствующих групп крови. Так, сыворотка 0(I) группы содержит агглютинины a и b, А(II) группы — b, B(III) группы — a, AB(IV) группы — агглютининов не содержит. Стандартные сыворотки имеют стандартную окраску: сыворотка 0(I) группы не окрашена, А(II) группы — синяя, B(III) группы — розовая.
Техника
1. Стандартные сыворотки наносят в лунки планшета под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получилось 2 ряда по 3 капли (0,1 мл) в следующем порядке: 0(I), А(II), В(III).
2. Рядом с каждой каплей сыворотки наносят по маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Сыворотку и кровь в каждой паре капель перемешивают уголком предметного стекла. При этом каждую пару капель перемешивают новым уголком стекла.
3. За ходом реакции наблюдают в течение 5 мин, слегка покачивая пластинку. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли, где видна агглютинация, добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 мин.
4. Если агглютинация наступает, реакцию считают положительной, если не наступает — отрицательной. Различные сочетания положительных и отрицательных результатов позволяют судить о групповой принадлежности исследуемой крови (табл. 1).
|
|
|
Таблица 1. Определение группы крови системы AB0 с помощью стандартных изогемагглютинизирующих сывороток
| Группа крови | Стандартные сыворотки | ||
| 0(I) | А(II) | В(III) | |
| 0(I) | – | – | – |
| А(II) | + | + | – |
| В(III) | + | – | + |
| AB(IV) | + | + | + |
Примечание. + — наличие агглютинации, – — отсутствие агглютинации.
• Отсутствие агглютинации во всех 3 лунках указывает на то, что исследуемая кровь группы 0(I).
• Агглютинация в 1-й и 2-й лунках и отсутствие агглютинации в 3-й лунке указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).
• Агглютинация в 1-й и 3-й луночках и отсутствие агглютинации во 2-й луночке указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).
• Наличие агглютинации во всех 3 луночках указывает на то, что исследуемая кровь четвёртой группы. В этом случае для исключения наличия неспецифической агглютинации проводят контрольное исследование со стандартной сывороткой группа AB(IV), не содержащей групповые агглютинины (a и b), цвет — жёлтый.
При наличии агглютинации во всех каплях крови, в том числе и группы AB(IV), групповую принадлежность по системе АВ0 определить невозможно. В таких случаях кровь необходимо направить на станцию переливания крови для серологического исследования.
Определение группы крови по системе АВ0 с помощью моноклональных АТ
Для определения групповой принадлежности крови применяют также стандартные реагенты — моноклональные АТ (цоликлоны анти-А и анти-В).
Цоликлоны анти-А и анти-В выпускают в лиофилизированной форме в ампулах по 50 доз. Кроме АТ, реагент содержит краситель (розовый — для цоликлонов анти-А, синий — для цоликлонов анти-В). После растворения цоликлоны переносят в прилагаемые к набору флаконы.
Определение групп крови цоликлонами анти-А и анти-В имеет ряд преимуществ по сравнению с определением изогемагглютинирующими сыворотками: обеспечиваются более высокие качество агглютинации, достоверность и надёжность результатов, исключается возможность панагглютинации, заметно упрощается процедура определения и сокращаются сроки реакции (наступает уже в первые 1–2 с).
|
|
|
Техника
На планшет наносят по 1 капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А и анти-В. Рядом с этими каплями наносят по 1 маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Стандартные реагенты и капли крови смешивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин (табл. 2).
Таблица 2. Определение группы крови системы AB0 с помощью моноклональных АТ
| Группа крови | Моноклональные АТ | |
| Цоликлон анти-А | Цоликлон анти-B | |
| 0(I) | – | – |
| А(II) | + | – |
| В(III) | – | + |
| AB(IV) | + | + |
Примечание. + — наличие агглютинации, – — отсутствие агглютинации.
• Отсутствии агглютинации и с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе 0(I).
• Наличие агглютинации с цоликлоном анти-А, и отсутствие с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).
• Наличие агглютинации с цоликлоном анти-В, и отсутствие с цоликлоном анти-А указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).
• Наличие агглютинации в обеих луночках (как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В) указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе АВ(IV).
При подозрении на спонтанную агглютинацию у больных с группой крови AB(IV) проводят контрольное исследование, где вместо цоликлонов анти-А и анти-В используют изотонический раствор хлорида натрия. Реакция агглютинации должна быть отрицательной.
Определение гемоглобина
В настоящее время в качестве унифицированного признан цианметгемоглобиновый (гемиглобинцианидный) метод определения Hb крови.
Методика
Данный метод основан на том, что после взаимодействия с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) Hb окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), который под влиянием CN-ионов образует окрашенный в красный цвет комплекс — цианметгемоглобин (гемиглобинцианид). Концентрацию цианметгемоглобина измеряют на фотоэлектрокалориметре и расчёт концентрации Hb производят по калибровочному графику.
|
|
|
Ранее был широко распространён метод определения Hb с помощью гемометра Сали, представляющего собой небольшой штатив, в гнёздах которого расположены градуированная пробирка и 2 запаянные пробирки со стандартным окрашенным раствором. Градуированной пипеткой насасывают выступающую из прокола кожи кровь до отметки 0,02 (20 мкл) и осторожно выдувают в градуированную пробирку гемометра с 0,1 н раствором соляной кислоты, перемешивают стеклянной палочкой и вставляют пробирку в гнездо гемометра между пробирками со стандартным раствором. В пробирку с испытуемым раствором добавляют дистиллированную воду по каплям до тех пор, пока цвет испытуемого и стандартного растворов не совпадёт. По шкале пробирки определяют уровень жидкости, который соответствует концентрации Hb.
Определение глюкозы в моче (экспресс-метод)
Качественное определение глюкозы в моче (глюкознооксидазная проба)
В исследуемую мочу погружают индикаторную бумажку из набора «Глюкотест», пропитанную растворами ферментов (глюкозооксидаза и пероксидаза) и красителя (ортотолуидин). При наличии глюкозы в моче краситель в индикаторной бумажке изменяет окраску.
|
|
|
