Эпизоотологические особенности

Источник инфекции - инфицированная птица, выделяющая вирус с фекалиями или передающая его потомству с яйцом, т. е. наблюдается вертикальная или трансовариальная передача. К настоящему времени мнения относительно источников и путей передачи данной инфекции мнения не всегда однозначны. Анализ таких сообщений позволяет составить следующее представление об эпизоотических особенностях EDS-76. Во-первых, в естественных условиях резервуар возбудителя болезни домашние и дикие утки всех пород. При исследовании стада уток в 85% случаев выявляли ПА, ВНА и анти-ГА к шт. ВС-14, а из клоаки 10 клинически здоровых утят белой пекинской породы выделил изоляты, не отличающиеся от шт ВС-14. Это свидетельствует о широком распространении вируса EDS-76 среди уток, причем в естественных условиях он всегда передается от утки к утке, но нет прямых доказательств передачи его посредством контакта от уток курам, хотя в хозяйствах у кур антигемагглютинины обнаруживались лишь после того, как их выявляли у уток. У кур в этих случаях AT обнаруживались очень редко и в низких титрах (максимально 1:20). В коммерческих утиных стадах США обнаруживали анти-ГА к шт. 127 Вопрос о естественном носительстве этого вируса утками, курами, гусями и птицами других видов подтверждается большим числом однозначных по существу примеров. В естественных условиях куры-реконвалесценты продолжительное время остаются вирусоносигелями, и активизация персистирующего вируса - следствие стрессового воздействия на организм, обусловленного началом яйцекладки. Слабая горизонтальная передача вируса EDS-76 показана как в экспериментальных, так и полевых условиях. Это подтверждается тем, что иногда EDS-76 долго регистрируется в одной части помещения, тогда как другие части свободны от инфекции. Поэтому перегородки между группами птицы могут быть препятствием для распространения инфекции EDS-76. При напольном содержании болезнь распространяется в течение 1-15 дн. В этих условиях возбудитель передается контактным путем через обслуживающий персонал, предметы ухода, транспорт и т.д.. При скармливании зараженных яиц здоровым птицам, последние заболевают. Когда вирус EDS-76 есть в хозяйстве и наблюдается литье яиц, большинство, если не все птицы неблагополучной фермы серопозитивны, что также доказывает горизонтальную передачу вируса. Птица может инфицироваться при транспортировке в плохо дезинфицированных грузовиках, при использовании корма из инфицированных мест, а также через предметы ухода, особенно через контаминированные подложки для яиц. Основной путь передачи инфекции не только горизонтальный, но и вертикальный - через яйца, снесенные инфицированными птицами. Отмечают случаи распространения возбудителя болезни со спермой петухов. Подтверждена вертикальная передача вируса выделением шт. В61 из печени вылупившихся цыплят. Экспериментально доказана вертикальная передача вируса потомству в первую неделю после заражения.

Клинические признаки болезни у кур, как правило, не проявляются. Лишь некоторые авторы отмечали отдельные случаи про­страции, взъерошенности перьев, анемии, диареи, анорексии и угнетения во время яйце­кладки. У 10-70% больных птиц наблюдалась также синюшность сережек и гребня. Основ­ной характерный клинический признак инфекции в стаде - снижение яйценоскости до 15% и более. По данным Е Gough, этот процент достигал 30, а по данным I Brugere-Picoux – 50. Пик яйцекладки может задерживаться до 4-5 нед, восстанавливаться через 4-6 нед, но первоначального уровня уже не достигает. Указанные признаки в неблагополучном стаде сохраняются 2-12 нед. Кроме того, для кур яичных пород характерно изменение внут­реннего качества яиц белок их становится водянистым и мутным с беловатыми хлопьями.

Симптомы EDS-7 6 также наблюдали и среди молодых мускусных уток, находившихся среди пекинских уток. В начале болезни заметно увеличение числа бесцветных яиц с тонкой и шероховатой скорлупой или яиц с трещинами. Затем следовала продукция яиц вообще без скорлупы ("литье яиц"). Это чаще проявлялось у несушек в 25-35-нед возрасте, хотя птица всех возрастов была подвержена этому синдрому. Нарушение яичной продуктивности про­являлось двояко: либо невозможностью достичь ожидаемого пика продуктивности, либо па­дением яйценоскости сразу после достижения пика. Снижение продуктивности может коле­баться в пределах 3-55%, наиболее резкое падение ее происходит в том случае, если птица достигла пика продуктивности или инфекция в стаде быстро распространяется. При медлен­ном распространении инфекции обычно отмечается небольшое снижение яйценоскости, но продолжающееся более продолжительное время.

Птица, пораженная EDS-76, обычно внешне выглядит здоровой и лишь в некоторых случаях разбитые и водянистые яйца, временное снижение аппетита или сонливость птицы наводят на подозрение в хозяйстве инфекции EDS-76.

Интересно, что в группах птиц, где выявляются антигемагглютины, нет признаков бо­лезни, свойственных синдрому EDS-76, но в тех группах птиц, где их нет или они выявля­ются в малых титрах, яйценоскость снижается Признаки болезни обычно проявляются на 30-й нед. при наступлении пика яйценоскости Это указывает на то, что вирус в латентной фазе находился в организме и ранее, но резко и активно начал проявляться на фоне физиоло­гического стресса - возрастания яйценоскости и увеличения гормонов.

Патологоанатомические изменения характеризуются отеком и инфильтрацией тканей матки и яйцевода, незначительным катаральным энтеритом, однако в ряде случаев при вскрытии трупов выраженные изменения отсутствуют При гистологическом исследовании установлена дегенерация кальцифирующих желез, их мононуклеарная инфильтрация, лимфоидная гиперплазия различной степени в печени, селезенке и других органах, атрофия маточных желез, инфильтрация гетерофилов, лимфоцитов и плазмоцитов, сопровождаю­щаяся обширным отеком. Заражение кур 110-135-дневного возраста внутремышечно и интратрахеально вирусом EDS-76 (шт. В8/78) ведет к поражениям различных отделов яй­цевода и кишечника При внутримышечном введении вируса патологические изменения от­мечались в мышечной ткани.

Что касается механизма повреждения яичной скорлупы, то он до сих пор не ясен. Гисто­логические исследования яйцевода не показали глубоких изменений, при исследовании сы­воротки обнаружено только уменьшение щелочной фосфатазы - энзима, который входит в комплекс механизмов формирования скорлупы.

Вирус EDS-76 в эмбрионах уток вызывает повышение содержания некоторых-ферментов (альделазы и холинэстеразы), что коррелирует с размножением вируса. Далее иссле­дователи проследили за поведением некоторых трансфераз и обнаружили повышение их ак­тивности, особенно аминотрасферазы и пироватоксидазы. На примере вируса EDS-76 были. По мнению A.Bartha и др., инфицирование куриных стад вирусом произошло в результате применения вакцины против болезни Марека из шт. "Респенс", репродуцируемого в культуре клеток утиных фибробластов

ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на оновании лабораторных исследований с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патологических изменений Для выяснения причины болезни используют методы ранней и ретроспективной диагностики

Метод ранней диагностики

Выделение вируса. Из патологического материала (клоаки печени, селезенки, яйцевода, лейкоцитов, крови, фекалий) более успешно вирус выделяют в первые 10 дн инфицирования. Используют для этого утиные эмбрионы или культуру клеток почек, печени эмбрионов уток и гусей, утиных и гусиных фибробластах, а также клетки гепатоцитов КЭ. Однако ФЭК и сами эмбрионы для этой цели не пригодны. Для выделения вируса необходимо не менее 3-х последовательных пассажей. Материалом, взятым с помощью тампона из клоаки, глотки, яйцевода, кусочками печени и селезенки, а также лейкоцитами заражают чувствительную культуру клеток. Проводят не менее 3-х последовательных пассажей с 7-10 дн интервалом. Присутствие в среде вируса EDS-76 устанавливают с помощью РГА. Обычно в сыворотке у всех экспериментально зараженных птиц в РЗГА выявлялись антигемагглютинины. В опытах, где имелась одна зараженная птица среди группы здоровых контактных птиц, последние, как правило, становились серопозитивньми, однако выделить вирус от них не удавалось, и инфекция далее не передавалась следующей партии контактно подсаженных птиц.

Индикация выделенного вируса. Вирус EDS-76, как правило, типируют в РЗГА и РН на утиных эмбрионах или в культуре клеток утиного происхождения. Учитывая, что между шт. вируса EDS-76, выделенными в различных странах, отсутствует антигенное различие, в качестве специфических сывороток для типирования вновь выделенного вируса используют антисыворотки к штаммам 127, ВС-14, Е-7, В8/78, 3877 и JPA-1.

Антисыворотку к штаммам готовят на SPF-курах-несушках и кроликах и используют для непрямого метода иммунофлюоресценции с меченой кроличьей или козьей антикуриной сывороткой конъюгированной ФИТЦ.

Первые изменения в инфицированной культуре клеток утиньк фибробластов отмечают уже через 48 ч после заражения, когда в пограничных районах, зонах клеточного монослоя, появляются отчетливые и частые уплотнения. Через 72 ч после заражения появляется множество округлившихся клеток и мертвых клеток, плавающих в среде; монослой начинает сжиматься и в нем появляются большие дыры. К 96-му часу монослой зараженных клеток, содержащих соединившиеся гранулы, формирует длинные тяжи. Таким изменениям подвергаются эпителиальные клетки. Однако фибробласты между эпителиальными островками не поражены. Часто в среде культивирования присутствует большое число округлых, свободно плавающих клеток. В этом, собственно, и состоит цитопатический эффект, индуцируемый шт. 127.

Окраска зараженного монослоя гематоксилин-эозином позволяет выявлять внутриядерные включения.

ЭМ. Через 24 ч после заражения культуры клеток утиных фибробластов вирионы и несколько типов включений выявляются в ядрах клеток. Размер частиц составлял 70-75 нм в диаметре. Отмечали 2 основных типа их. Некоторые из них имели электронноплотную сердцевину (нуклеотид) 50 нм в диаметре, отделенную от внешнего капсида светлым пространством. Другие частицы имели электронно-светящийся (яркий, прозрачный) центр, содержащийся в мембране, соединенной с капсидом. Эта внутренняя структура (40 нм) была также отделена светлым пространством от внешнего капсида.

Серодиагностика. Помимо выделения и идентификации вируса с помощью РГА-РЗГА и ИФ у птиц подозрительного стада исследуют сыворотки на присутствие специфических антител. Это делается в 3-х случаях: когда изучают динамику AT в результате экспериментального заражения птицы: при широких полевых серологических обследованиях птицы с целью установления наличия инфекции в стаде, используя принцип парных сывороток; и в случаях установления иммунологического статуса птицы после применения вакцины. Во всех случаях применяют серологические исследования (РЗГА, РДП, РН и ИФА), для чего врачу-диагносту необходимо в качестве контроля иметь под рукой заведомо положительные сыворотки. Тест ингибиции ГА (РЗГА) с желтком яиц. Предложен в 1985 г. Он имеет ряд преимуществ перед аналогичной РЗГА с испытуемой сывороткой крови.

РН. Её ставят в утиных эмбрионах и в культурах клеток печени и почки эмбрионов уток и утиных фибробластов и имеет важное значение для типирования вируса в сомнительных случаях. Для этого монослойную культуру, выращенную в пробирках на среде Игла, инокулируют смесью вирус-сыворотка, которую предварительно выдерживают (30 мин) при комнатной температуре (22°С) и инокулируют по 0,2 мл в 5 пробирок с культурой клеток. Данная реакция может быть использована для определения различий между типичными аденовирусами птиц, поскольку этот метод недостаточно чувствителен для обнаружения сходных антигенов. С помощью РДП проводят серологическое исследование стада кур на EDS-76, но она менее чувствительна, чем РЗГА, и в РДП невозможно обнаружить низкий уровень AT. РДП удобно ставить и с экстрактом желтка.

На основании сравнительных исследований по обнаружению AT к вирусу ССЯ-76 в РЗГА и ИФА была установлена более высокая чувствительность последнего. Он выявлял положительных сывороток на 7% больше, чем РЗГА.