 |
Особенности заливки в целлоидин крупных объектов
|
|
|
|
Целлоидин — хорошо растворяющаяся в эфире нитроклетчатка. В гистологической практике применяют 2 %, 4 % и 8 % растворы целлоидина, которые готовят из целлоидиновых пластин или отмытой от эмульсии и высушенной рентгеновской пленки.
Для приготовления 500 мл 2 % раствора целлоидина 10 г сухого целлоидина заливают 250 мл 100 % спирта и оставляют на 1 сут, затем добавляют 250 мл безводного эфира, который растворяет набухший в спирте целлоидин. Для приготовления 4 % и 8 % растворов количество целлоидина увеличивают соответственно в 2 и 4 раза. Растворы хранят в плотно закрытой посуде.
Заливка ткани в целлоидин стала в настоящее время менее популярной, чем парафиновая, и ее применяют главным образом для обработки труднорежущихся тканей и объектов больших размеров, с которых трудно получить хорошие парафиновые срезы. Целлоидиновую заливку используют также в тех случаях, когда необходимо избежать воздействия на исследуемый материал высоких температур
Целлоидиновая заливка, так же как и заливка в парафин, позволяет получать гистотопографические срезы. Пластины ткани органа толщиной 1 см кладут между двумя проволочными сетками (как для заливки в парафин), фиксируют, промывают и обезвоживают. Общая продолжительность процесса заливки в целлоидин крупных объектов 2—2,5 мес. С помощью целлоидиновой заливки можно получить гистотопографические срезы толщиной около 20 мкм.
Заливка в целлоидин-парафин
Этот метод рекомендуется для обработки объектов, которые легко сжимаются при парафиновой заливке, например органов кроветворения, мезенхимной ткани, а также органов и тканей, имеющих многослойное строение (трахея, кожа и др.).
|
|
|
Используют также смесь целлоидина с касторовым маслом (1:1), пребывание в которой объектов в течение 1—2 дней улучшает их пропитывание. Затем для удаления касторового масла материал промывают в трех порциях хлороформа.
20. ДЕКАЛЬЦИНАЦИЯ КОСТНОГО МАТЕРИАЛА
В период становлення гистологической техники для демонстрации применяли шлифованные распилы кости. Однако зтот метод оказался малопригодным для гистологических исследований, так как в зтих очень толстых срезах была плохо различима структура костной ткани й при шлифовапии разрушались клеточные элементы. Для получения гистологических срезов костной ткани необходимо растворить соли кальция, т.е. декальцинировать материал, сохранив клеточнь злемент й органический матрикс кости.
Декальцинацию проводят после полной фиксации ткани, обычно в некислых фиксаторах. После декальцинации в кислотах необходимо проводить деацидификацию с помощью щелочных растворов или по крайней мере путем промывания в двух сменах спнрта. Нельзя допускать длительного промывания в проточной воде, так как зто способствует набуханню коллагеновых волокон, особенно если промывание проводится сразу после обработки в кислых растворах.
При проведений декальцинации надо учитывать следующие положення.
1. Продолжительность декальцинации в кислотах должна быть по возможности уменьшена, так как при длительном воздействни кислоты ухудшается способность тканей окрашиваться. В связи зтим декальцинации подвергают небольшие й тонкие кусочки костной ткани (толщиной 0,5— 1 см).
2. С целью уменьшения продолжительности декальцинаци необходимо брать большое количество декальцинирующей жид кости (ее обьем должен в 25—50 раз превосходить объем всех вместе взятых декальцинируемых кусочков костной ткани), чаще менять ее (каждые 24—48 ч) и встряхивать сосуд, в котором протекает реакция.
3. Продолжительность декальцинации не может быть установлена заранее, так как содержание солей кальция в декальцинируемой ткани может колебаться в очень широких пределах. Критерии окончания декальцинации — см. ниже.
|
|
|
4. Если декальцинацию проводили с помощью трихлоуксусной й пикриновой кислот, то кусочки промывают 80—90 % спиртом, после декальцинации неорганическими кислотами их промывают водой. В последнем случае во избежание набухання соединительной ткани перед промыванием обьект необходимо на 24 ч поместить в жидкость, уменьшающую набухание, например в 5 % раствор алюмокалиевых квасцов. Затем следует тщательно промыть материал в проточной воде в течение 24—48 ч.
5. Если декальцинируемая ткань содержит много жира (костный мозг), то ее необходимо предварительно обезжирить выдерживая обьект несколько дней в 96 % й 100 % спиртах, лучше в термостате при 37 °С.
6. 06'ьектынебольших размеров или такие, в которых костная ткань имеет тонкую структуру, можно предварительно залить в целлоидин.
7. Процесе декальцинациипротекает быстрее в термостате при37 °С, однако кислотная дскальцинация в зтих условияхобычносопровождается возникновением различных артефактов.
8. После декальцинации кусочки кости можно резать на замораживающем микротоме или залить- -в парафин или целлоидин.
В зависимости от используемых реагентов различают кислотную и бескислотную декальцинацию.
|
|
|
