 |
Определение групп крови моноклональными антителами (цоликлонами)
|
|
|
|
Определение групп крови моноклональными антителами (цоликлонами)
Этот способ применяется в настоящее время. Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью биотехнологии. Цоликлон- бесцветная прозрачная жидкость, это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов.
Разработаны стандартные реагенты: цоликлоны анти-А, анти-В и анти АВ, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Для определения резус-фактора применяется цоликлон анти D.
Техника проведения.
Цоликлоны анти-А и анти-В и анти АВ наносят на белый планшет по одной большой капле (0, 1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В, анти АВ. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агглютинации в течение 2-3 минут. Оценка результатов очень проста.
Возможны четыре варианта определения результатов:
а) Агглютинация во всех трех каплях цоликлонов – это значит, что исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В) и кровь принадлежит к группе АВ (IV). В целях исключения панагглютинации, которая может наблюдаться у отдельных больных (миеломная болезнь, ожоговая болезнь), а также в пуповинной крови новорожденных, в случае установления группы крови АВ (IV) необходимо провести контрольное исследование: одну каплю (0, 1 мл) изотонического раствора натрия хлорида смешать с маленькой каплей (0, 01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна отсутствовать.
б) Агглютинация с цоликлонами анти-А и анти-АВ – это означает, что исследуемые эритроциты содержат только антиген А и кровь принадлежит к группе А (II).
|
|
|
в) Агглютинация с цоликлонами анти-В и анти-АВ – это означает, что исследуемые эритроциты содержат только антиген В и кровь принадлежит к группе В (III).
г) Агглютинация отсутствует во всех трех каплях цоликлонов - это значит, что исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В, и кровь принадлежит к группе 0(I).
Оценка результатов определения групп крови при помощи цоликлонов приведена в таблице:
| Группа крови | цоликлон «анти-A» | цоликлон «анти-B» | цоликлон «анти-АВ» |
| 0(I) | - | - | - |
| A(II) | + | - | + |
| B(III) | - | + | + |
| AB(IV) | + | + | + |
(Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие. )
Основные ошибки при определении группы крови:
- выявление агглютинации там, где ее нет. Это возникает при подсыхании смеси сыворотки (цоликлона) с кровью, образовании псевдоагглютинации, при низкой температуре в помещении (12 °С и ниже);
- неточное обозначение группы на этикетках стандартных сывороток (цоликлонов); - небрежное обращение с пипетками;
- недостаточная внимательность при смешивании крови с сыворотками (цоликлонами); - неточное соотношение сыворотки (цоликлона) и крови; - недостаточное время наблюдения;
- замедление агглютинации при температуре в помещении свыше 26 °С - возможно ошибочное решение о 0 (I) группе крови;
- монетные столбики, которые принимают за агглютинацию.
Для профилактики ошибок следует применять свежие сыворотки (цоликлоны) с действующим сроком годности, соблюдать соотношение сывороток (цоликлонов) и крови (10: 1), следить за температурой в помещении. Сыворотки (цоликлоны) необходимо хранить в холодильнике при температуре 4-6 °С. После смешивания сывороток (цоликло-нов) с исследуемой кровью результат оценивают через 3-5 мин.
Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D
На планшете смешивают большую каплю (0, 1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0, 01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.
|
|
|
- если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
- если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)
Оценка совместимости крови донора и реципиента
Ранее действовало правило Оттенберга. - Оттенберг ввел правило в соответствии с которым возможно переливание разногруппной крови, а представители группы АВ (IV) являются универсальными реципиентами,
Но современными исследованиями установлено, что правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0, 5 литра донорской крови.
В связи с современными достижениями иммунологии и клинической практики в современной хирургии действует правило, согласно которому можно переливать только одногруппную и однорезусную кровь, за исключением экстренных случаев. Переливание иногруппной крови у детей запрещено вообще.
Перед гемотрансфузией обязательно проводится ряд проб.
Пробы на индивидуальную совместимость проводятся в процессе подготовки к гемотрансфузии. Ставят две реакции: пробу на индивидуальную совместимость по системе АВО и по резус-фактору. Предварительно для постановки реакций у реципиента из вены берут кровь, которую разделяют сгусток и сыворотку (отстаиванием или центрифугированием). После этого – проводится биологическая проба.
а) Проба на индивидуальную совместимость по системе АВО
На белую поверхность (тарелку, пластинку) наносят крупную каплю {0, 1 мл) сыворотки крови реципиента и маленькую капельку (0, 01 мл) крови донора из флакона и смешивают их между собой, периодически покачивая тарелку (пластинку). Реакция проводится при температуре 15 - 25°С, результаты оценивают через 5 минут: отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по системе АВО. Появление агглютинации указывает на их несовместимость — такую кровь данному больному переливать нельзя.
б) Проба на индивидуальную совместимость по резус-фактору
|
|
|
После того как установлена совместимость крови донора и реципиента по системе АВО, необходимо установить совместимость в отношении резус-фактора. Проба на совместимость по резус-фактору может быть проведена в одном из двух вариантов:
- проба с использованием 33% полиглюкина;
- проба с использованием 10% желатина.
В клинической практике наибольшее распространение получила проба с полиглюкином. Проба с использованием 33% полиглюкина Реакция проводится в центрифужной пробирке без подогрева в течение 5 минут. На дно пробирки вносят 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю донорской крови и 1 каплю 33% раствора полиглюкина. После этого содержимое перемешивают, наклоняя пробирку и вращая ее вокруг оси, распределяя содержимое по стенкам ровным слоем.
Пробирку вращают в течение 5 минут, после чего добавляют 3-4 мл физиологического раствора и аккуратно перемешивают, 2-3 раза наклоняя пробирку до горизонтальной плоскости (не взбалтывая! ). После этого оценивают результат: наличие агглютинации эритроцитов свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента по резус-фактору, такую кровь переливать нельзя. Равномерное окрашивание содержимого в пробирке, отсутствие реакции агглютинации указывает на совместимость крови донора и реципиента по резус-фактору.
|
|
|
