 |
Интенсивность образования агглютината
|
|
|
|
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
Иммунные реакции используют при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы (от лат. Serum – сыворотка и logos – учение), т.е. методы изучения взаимодействия антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также в тканях организма. Обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микробов, различных биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др.
Иммунные реакции подразделяются на простые и сложные. Для их постановки необходимы основные два компонента: антиген и антитело. К простым реакциям, применяемым для диагностики, относятся реакции агглютинации, реакции преципитации, реакции нейтрализации. К сложным реакциям – иммунофлюоресцентный метод, радиоиммунный метод, иммуноферментный метод, иммунохемилюминесцентный метод исследования, метод иммуноблотинга.
РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ.
Реакция агглютинации (РА) позволяет выявить корпускулярные антигены и антигены, локализованные на поверхности сравнительно крупных частиц (эритроциты, частицы латекса, микроорганизмы). Механизм реакции агглютинации описывает «теория решетки», согласно которой двухвалентное антитело взаимодействует одним активным центром с детерминантой одной молекулы антигена, а вторым активным центром - с детерминантой второй молекулы антигена. В результате подобного взаимодействия происходит «склеивание» антигенов, то есть образуется агглютинат. Агглютинат может быть двух типов - мелкозернистый и крупнохлопчатый. Мелкозернистый – это результат взаимодействия мелких бактерий, крупнохлопчатый – бактерий, имеющих жгутики.
|
|
|
Все реакции агглютинации подразделяются на два типа:
- ориентировочные (ОРА), которые выполняются на стекле,
- развернутые (РРА) – выполняются в пробирках с титрованием сыворотки.
Ориентировочные реакции также могут иметь две цели:
Идентификация микробного вида (с использованием известной иммунной сыворотки).
Поиск антител в сыворотке крови пациента с использованием известного микробного диагностикума.
ОРИЕНТИРОВОЧНЫЕ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ.
Схема постановки ориентировочной реакции агглютинации – ОРА представлена на рис. 1.
Рис. 1 Ориентировочная реакция агглютинации.
Рис.2. Схема ориентировочной реакции агглютинации.
Этапы выполнения реакции:
· На обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора.
· Внести петлей исследуемую культуру бактерий, равномерно распределить в капле физиологического раствора
· Добавить каплю специфической агглютинирующей иммунной сыворотки
· Учесть результат реакции.
Положительной считается реакция, когда в капле происходит просветление жидкости и формирование агглютината.
Таблица 1.
ИНТЕНСИВНОСТЬ ОБРАЗОВАНИЯ АГГЛЮТИНАТА
| + + + + | Полная агглютинация: очень большой осадок, полное просветление жидкости. Результат положительный |
| + + + | Неполная агглютинация: осадок такой же, надосадочная жидкость над осадком слегка мутновата. Результат положительный |
| + + | Слабая агглютинация: осадок небольшой, жидкость непрозрачная. Результат слабоположительный |
| + | Следы агглютинации: осадок маленький, надосадочная жидкость непрозрачная. Сомнительный результат реакции |
| - | Отрицательная реакция: осадка нет, взвесь равномерно мутная. |
|
|
|
Реакция агглютинации имеет несколько модификаций: это реакция Минкевича и реакция Хеддельсона.
Реакция Минкевича позволяет определить наличие противотуляремийных антител у инфицированного пациента.
Необходимые ингредиенты:
· Капля крови пациента, взятая при помощи скарификатора из пальца больного
· Дистиллированная вода
· Туляремийный диагностикум.
Этапы выполнения реакции:
1. На обезжиренное стекло нанести каплю крови пациента
2. Добавить каплю дистиллированной воды для лизиса эритроцитов
3. Внести каплю туляремийного диагностикума
4. Учесть результаты.
Положительной считается реакция, если в капле образуются зерна агглютината.
Рис. 3. Реакция Минкевича.
|
|
|
