 |
Схема постановки перекрёстной реакции агглютинации по кастеллани
|
|
|
|
Принцип метода:
Перекрёстная РА направлена на извлечение групповых антител методом адсорбции и основана на правиле - специфический антиген (АГ) изымает из сыворотки все антитела — и специфические только для него, и групповые; неспецифический АГ — только групповые.
В данной реакции наряду со специфическим антигеном используют родственные гетерологические АГ. Например, у больного брюшным тифом (Т) сыворотка крови дала агглютинацию со специфическим диагностикумом Т и с групповым паратифа А.
|
|
|
Оценка РА: в данном примере: больной страдает брюшным тифом.
Рис. 8. Схема постановки реакции Кастеллани.
Метод Нобля основан на использовании концентрированных ингредиентов (микробной взвеси, сыворотки больного) и применении механического фактора, ускоряющего агглютинацию (энергичное встряхивание пробирок), что позволяют получить результаты через 2-5 минут.
Таблица 4.
СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ НОБЛЯ
| Ингредиенты | Номер опыта | Контроль | |||||
| Сыворотки | Антигена | ||||||
| Физ. раствор, мл | 0,8 | 0,8 | 0,8 | 0,8 | 0,8 | 0,9 | 0,9 |
| Сыворотка больного в разведении 1:5, мл |  0,1
|  0,1
| 0,1
|  0,1
|  0,1
дез. р-р
| 0,1 | - |
| Разведение сыворотки | 1: 10 | 1: 20 | 1: 40 | 1: 80 | 1: 160 | ||
| Диагностикум (взвесь известных микробов 3-6 млрд. мт/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | - | 0,1 |
| Встряхивать 3-5 минут, дать постоять |
При оценке результатов реакции используют поправочный коэффициент 10, который отражает разницу между адсорбционными процессами в концентрированных растворах антител и в растворах обычной концентрации. Таким образом, разведение 1:20 по Ноблю соответствует 1:200 при обычной постановке развёрнутой РА.
|
|
|
Таблица 5.
РЕАКЦИЯ ВЕЙЛЯ ПРИ СЫПНОМ ТИФЕ
| п/п | Ингредиенты | Разведение сыворотки | Контроли | ||||||
| 1/25 | 1/50 | 1/100 | 1/200 | 1/400 | Сыворот ки | антигена | |||
| 1. | Физиологический раствор | - | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | - | 0,25 | |
| 2. | Сыворотка больного (1:25) | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | дез р-р | 0,25 (1:5) | - |
| 3. | Антиген из риккетсий Провачека (50 млн.м.т./мл) | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | - | 0,25 | |
Пробирки встряхнуть, поместить в термостат на 24 часа и 2 часа при комнатной температуре.
Диагностическим титром РАР считают положительный результат в разведениях 1:100 – 1:160.
Максимальные титры антител при первичном сыпном тифе доходят до 1:1280 – 1:3200, при повторном (болезнь Бриля) – до 1:640 (чаще 1:160 – 1:640).
Агглютинины у реконвалесцентов в 88,5 % сохраняются 1 – 3 месяца. После чего они сохраняются в титрах 1:50 – 1:400 – у небольшого числа переболевших, а через год полностью исчезают из кровотока.
Диагностический титр у детей – 1:100, у взрослых – 1:200.
Анамнестическая реакция редко бывает положительной в титре 1:20.
РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ.
Реакции преципитации (РП) предложены Краусом (1897) и основаны на феномене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых, либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии антигена с антителом. РП позволяют быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества антигена. Они очень чувствительны, их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси антигенов. Метод имеет несколько разновидностей.
1. Реакция кольцепреципитации
2. Реакция микропреципитации
3. Реакция флокуляции
4. Реакция преципитации в геле
5. Реакция преципитации в агаре
6. Иммуноэлектрофорез.
Реакция кольцепреципитации. Как вариант этой реакции широко известна реакция Асколи. Она применяется для поиска антигена возбудителя сибирской язвы в материале (например, на шкурках животных).
|
|
|
Постановка реакции осуществляется в тонких пробирках и заключается в том, что вначале в пробирку вносится сыворотка, содержащая антитела к возбудителю сибирской язвы, на нее сверху осторожно наслаивается термопреципитиноген, так, чтобы жидкости не перемешивались. При нахождении антигена в субстрате (спор возбудителя сибирской язвы) в месте соприкосновения двух жидкостей возникает кольцо преципитации (мутное кольцо). Схема реакции представлена на рис. 9.
Рис.9. Выявление АГ в реакции кольцепреципитации.
|
|
|
