 |
Определение группы крови
|
|
|
|
1. Прямой метод: с использованием стандартных сывороток: сыворотка 1 группы содержит агглютинины α и b;
сыворотка 2 группы – агглютинин b, сыворотка 3 группы – агглютинин α;
сыворотка 4 группы (контрольная) агглютининов не содержит.
Группу крови определяют в 2 сериях, на специальные тарелочки наносят сыворотки, которые смешивают с исследуемой кровью.
| Группа крови пациента (агглютиногены) | Изогемагглютинирующие сыворотки (агглютинины) | |||
| I (α b) | II (b) | III (α ) | IV (o) | |
| I (0) | - | - | - | - |
| II (A) | + | - | + | - |
| III (B) | + | + | - | - |
| IV (AB) | + | + | + | - |
2. Обратный метод: с использованием стандартных эритроцитов:
стандартные эритроциты 1-й группы агглютиногенов не содержат (0), 2-й группы – содержат агглютиноген А, 3-й группы – агглютиноген В, 4-й группы – агглютиногены и А и В. Исследуется сыворотка пациента.
| Сыворотка пациента (агглютинины) | Стандартные эритроциты (агглютиногены) | |||
| I (0) | II (A) | III (B) | IV (AB) | |
| I (α b) | - | + | + | + |
| II (b) | - | - | + | + |
| III (α ) | - | + | - | + |
| IV (о) | - | - | - | - |
3. Перекрестный метод: сочетание 1 и 2 методов.
4. С использованием моноклональных антител-цоликлонов: анти-А, анти-В, и анти-АВ. Это наиболее употребляемый метод в настоящее время.
Цоликло́ н — это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека. Моноклональные антитела для цоликлонов получают при помощи методов
генной инженерии. Название препаратов происходит от названия института, где изобрели и изготовили эти растворы — «Центральный Ордена Ленина Институт переливания крови» в Москве, сейчас — Гематологический научный центр Росздрава.
|
|
|
Анти-А и анти-В цоликлоны склеивают эритроциты, на поверхности которых находятся соответственно агглютиногены А и В, анти-АВ склеивает и те и другие.
| Группа крови пациента (агглютиногены) | цоликлон | ||
| Анти-А | Анти-В | Анти-АВ | |
| I (0) | - | - | - |
| II (A) | + | - | + |
| III (B) | - | + | + |
| IV (AB) | + | + | + |
Определение резус-фактора:
1. Реакция агглютинации на плоскости с помощью цоликлонов анти-D супер: Наносят большую каплю (около 0, 1 мл) реагента на пластинку или планшет. Рядом наносят маленькую каплю (0, 02-0, 03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой. Через
10 - 20 сек мягко покачивают пластинку. Несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 с, результаты реакции учитывают через
3 мин после смешивания. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.
Для определения резус-принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином).
2. Метод конглютинации с 10% желатином:
Используют реагенты, содержащие неполные поликлональные антитела (сыворотки анти-D) или неполные моноклональные антитела (цоликлоны анти-D).
В 2 пробирки вносят по 0, 02 - 0, 03 мл осадка эритроцитов, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки. Затем в первую пробирку добавляют 2 капли (0, 1 мл) желатина и 2 капли (0, 1 мл) реагента, во вторую (контрольную) пробирку добавляют 2 капли (0, 1 мл) желатина и 2 капли (0, 1 мл) физиологического раствора. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 мин или термостат на 30 мин при температуре +46 - 48°С. По истечении указанного времени в пробирки
|
|
|
добавляют по 5 - 8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1 - 2-кратного переворачивания пробирок.
Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что исследуемый образец крови резус положительный, отсутствие агглютинации – о том, что испытуемая кровь резус отрицательная. В контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать.
Для определения резус-принадлежности ускоренным методом в пробирке при комнатной температуре может быть использован универсальный реагент, представляющий собой сыворотку анти-D с неполными антителами, разведенную 33% полиглюкином.
Действие перелитой крови:
1. Заместительное действие – в случаях массивной кровопотери, хронической анемии. В этих случаях лечебный эффект переливания крови связан с увеличением ОЦК, увеличением дыхательной поверхности эритроцитов, улучшением кислородного обмена.
2. Гемостатическое действие – за счет вливания с кровью плазменных факторов свертывания крови.
3. Дезинтоксикационное действие – за счет вливания с кровью белков плазмы, абсорбирующих токсические вещества.
4. Иммунобиологическое действие – за счет содержания в донорской крови различных антител.
5. Стимулирующее действие – за счет белков плазмы, которые усиливают обмен веществ и стимулируют регенерацию тканей.
Нормативная база трансфузиологии:
1. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 2 апреля 2013 г. № 183н " Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов".
2. Приказ Минздрава РФ от 25 ноября 2002 г. № 363 " Об утверждении Инструкции по применению компонентов крови".
3. Федеральный закон Российской Федерации от 20 июля 2012 г. № 125-ФЗ " О донорстве крови и ее компонентов".
|
|
|
