 |
5. Техника приготовления мазка из бульонной культуры
|
|
|
|
5. Техника приготовления мазка из бульонной культуры
Обезжиренное предметное стекло прожигают в пламени горелки и охлаждают. На предметное стекло, помещенное на подставку (чашку Петри, штатив) наносят культуру. Пробирку с культурой держат большим и указательным пальцем левой руки. Петлю держат в правой руке. Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку к ладони и осторожно вынимают ее из пробирки. Движения должны быть плавными и спокойными. Горло пробирки обжигают в пламени горелки. Вводят петлю в пробирку. Охлаждают петлю о стенку пробирки и затем погружают ее в культуру. Вынимают в петлю, не касаясь ее стенок пробирки. Закрывают пробку, предварительно проведя ее через пламя горелки. Ставят пробирку в штатив. Петлей наносят культуру на предметное стекло, круговыми движениями равномерно распределяя ее. Затем петлю прожигают в пламени горелки. Мазок оставляют для высыхания.
Внимание! Мазок должен быть равномерно растертым, тонким и небольшим (с двухкопеечную монету).
6. Техника приготовления мазка из агаровой культуры
Обезжиренное предметное стекло прожигают в пламени горелки. На охлажденное предметное стекло наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия. Пробирку о изучаемой культуре держат между указательным и большим пальцами левой руки. Бактериологическую петлю берут правой рукой и прожигают ее в пламени горелки. Не выпуская петли из правой руки, мизинцем прижимают пробку к ладони правой руки и спокойно вынимают из пробирки. Движения не должны быть резкими и размашистыми. Во время манипуляции с пробиркой пробка находится в руке. Прожигают горло пробирки в пламени горелки. Вводят петлю в пробирку. Охлаждают петлю о стенку пробирки, чтобы петля не убила выросшую культуру. Захватывают петлей часть культуры и выводят ее из пробирки, не касаясь стенок. Держа петлю с культурой, закрывают пробирку пробкой над пламенем горелки. Ставят пробирку в штатив. Петлю с культурой опускают на стекло и растирают материал рядом с каплей изотонического раствора хлорида натрия, а затем постепенно эмульгируют в этом растворе. Остатки культуры на петле сжигают в пламени горелки. Мазок оставляют для высыхания.
|
|
|
Внимание! Мазок должен быть тонким, равномерно растертым и небольшим.
7. Окраска препарата простым методом
Фиксированный мазок помещают на подставку для окраски исследуемым материалом вверх.
Пипеткой наносят раствор красителя, чтобы покрыть весь мазок. При истечении указанного времени краситель осторожно сливают, препарат промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
При этом методе используют лишь один краситель.
Щелочным синим Леффлера окрашивают в течении3-5 минут или фуксином Пфейфера 1-2 минуты.
На окрашенный препарат наносят каплю кедрового масла и микроскопируют с помощью иммерсионной системы.
Для окраски мазков применяют следующие красители:
1. красные (фуксин основной, фуксин кислый, нейтральный красный, конго красный)
2. синие (метиленовый и толуидиновый)
3. фиолетовые (генциановый, метиловый, кристаллический)
4. коричнево-желтые (везувин, хризоидин)
5. зеленые (бриллиантовый, малахитовый)
8. Окраска по Граму
9. На фиксированный мазок наносят несколько капель раствора генцианового фиолетового на 1-2 минуты
10. Не промывая препарата водой, сливают краситель и наносят раствор Люголя на 1 минуту до полного почернения.
11. Сливают раствор Люголя, не промывая водой, наносят 96% спирт на 20-30 секунд. Обесцвечивание производят до отхождения фиолетовых струй красителя.
|
|
|
12. Препарат тщательно промывают водой для удаления спирта.
13. Докрашивают препарат фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Краситель смывают водой, препарат высушивают и микроскопируют при помощи иммерсионной системы.
Грам (+) микробы окрашивают в фиолетовый цвет, грам (-) окрашивают в красный (розовый).
9. Варка питательных сред
Взять 39, 5 г. порошка размешать в 1 литре дистиллированной воды, кипятить 2 минуты до полного расплавления агара, фильтровать через ватно-марлевый фильтр, разлить в стерильные флаконы и стерилизовать автоклавированием при температуре 121оС в течение 15 минут. Среду охладить до температуры 45-50оС, разлить в стерильные чашки Петри слоем 4-6 мм. После застывания среды чашки подсушить при температуре (37±1)оС в течение 40-60 минут.
10. Разлив питательных сред в чашки Петри
Среды перед разливом расплавляют на водяной бане и остужают до 45-50оС. Разливают среды в стерильные чашки в асептических условиях.
Сосуд со средой берут в правую руку и, держат его у огня, левой рукой вынимают пробку (зажав ее мизинцем и ладонью). Обжигают горлышко сосуда, 1 и 2 пальцами левой руки (большим и указательным) слегка приоткрывают крышку, вводят под нее горлышко флакона, не прикасаясь им к краю чашки. В каждую чашку наливают по 15-20 мл. среды (слоем 2-3 мм) распределяя ее равномерно по дну чашки. Если при этом на поверхности среды образуются пузырьки воздуха, к ним, до того как среда застынет, подносят пламя спички или горелки - пузырьки исчезнуть. Затем чашку закрывают и дают среде застыть.
|
|
|
