 |
17. Проведение стерилизации адекватными методами
|
|
|
|
17. Проведение стерилизации адекватными методами
1. Прокаливание на огне - применяют для поверхностной стерилизации негорючих и теплоустойчивых предметов, причем непосредственно перед их использованием. Так стерилизуют шпатели, пипетки, никелированные или платиновые петли или иглы, предметные и покровные стекла, и т. д.
2. Кипячение - этот вид стерилизации широко применяется для обработки шприцев, инструментария, стеклянной и металлической посуды.
3. Сухожаровая стерилизация - стерилизуют сухим жаром только сухие предметы (посуду, перевязочный материал и т. д. ). Режим стерилизации для стеклянной лабораторной посуды 180о - 1 час, для бумаги и ваты - 160о.
4. Стерилизация паром под давлением - наиболее надежный способ стерилизации. Режим стерилизации: а) 1 атм, 120о, 20 минут (простые среды, жидкости, приборы, особенно имеющие резиновые части, пробки, бактериальные свечи и фильтры), б) 1: 5 атм, 126 о, 1 ч (чашки и пробирки, содержащие культуры м/о, инструменты после работы с бактериями, образующими споры), в) 0, 5 атм, 112о, 10-15 минут (среды, содержащие нативный белок или углеводы).
5. Стерилизация текущим паром - при этом методе стерилизации убиваются только вегетативные формы бактерий; споры выживают, но они прорастают в течение 1-2 суток, и образовавшиеся вегетативные формы убивают стерилизацией на 2-й и 3-й день. Текущим паром стерилизуют материалы, которые портятся и разлагаются при стерилизации под давлением: некоторые питательные среды растворы углеводов. Режим: 30 минут с момента появления пара, повторяют 3 дня подряд.
6. Стерилизация ультрафиолетовым облучением проводят с помощью любого источника ультрафиолетовых лучей. Бактериальные лампы можно применять для обеззараживания воздуха и поверхностей разных помещений (в том числе стен, пола, потолка, бактериологических лабораторий). Различных предметов и оборудования, воды и пищевых продуктов и т. д.
|
|
|
7. Стерилизация при помощи бактериальных фильтров проводят в тех случаях, когда стерилизуемые растворы (среды) не переносят нагревания. Бактериальные фильтры применяют для очистки жидкостей от микроорганизмов.
8. Химическая стерилизация имеет ограниченное применение. Для предупреждения пророста (бактериального загрязнения) питательных сред их консервируют прибавлением хлороформа, толуола, иногда эфира. Для освобождения от консерванта среду нагревают на водяной бане 56оС.
18. Приготовление маточного 10% раствора хлорной извести
Берут 1 кг хлорной извести, помещают в эмалированное ведро и измельчают. Затем заливают холодной водой до объема 10 л, хорошо перемешивают, закрывают крышкой и оставляют на сутки в прохладном месте. После этого образовавшийся 10% осветленный раствор осторожно сливают и отфильтровывают через несколько слоев марли или процеживают через плотную ткань. Хранят в бутылях из темного стекла, закрытых деревянной пробкой, в прохладном месте, не более 3 суток. Рабочие растворы необходимой концентрации готовят из основного раствора непосредственно перед употреблением. Количество основного раствора, необходимое для приготовления 1-5% рабочих растворов хлорной извести, приведено в таблице.
19. Схема приготовления растворов хлорной извести
| Концентрация хлорной извести в рабочих растворах, % | Количество основного раствора (10%) для приготовления рабочего раствора, мл. | |
| На 1 л | На 10 л | |
20. Приготовление растворов хлорамина
Хлорамин хорошо растворяется в воде при комнатной температуре, поэтому растворы его готовят непосредственно перед употреблением. Соотношение между процентной концентрацией раствора и количеством хлорамина на 1 литр приведено в таблице:
|
|
|
Схема приготовления растворов хлорамина:
| Концентрация, % | Количество хлорамина, г |
| 1, 0 | |
| 3, 0 | |
| 5, 0 |
Хлорамин взвешивают и растворяют в воде в стеклянной или эмалированной посуде.
21. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
Метод бумажных дисков
Взвесь изучаемой культуры засевают «газоном». Примерно 2 мл (40 капель жидкой культуры) если культура с плотной среды, ее эмульгируют в стерильном изотоническом растворе наносят на поверхность агара и тщательно распределяют жидкость по поверхности среды. Чашку слегка наклоняют и пипеткой отсасывают избыток культуры, выливая ее в дезинфицирующий раствор. Туда же помещают пипетку.
Засеянные чашки подсушивают 30-40 минут при комнатной температуре. Затем на поверхность засеянного агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков. Каждый диск слегка прижимают браншами пинцета, чтобы он плотно прилегал к поверхности агара. Диски накладывают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. На одну чашку следует помещать не более 6 дисков. Чашки ставят в термостат сразу после наложения дисков и инкубируют в течение 18-20 часов при 35-37 С, перевернутыми кверху дном.
Учет результатов. Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска. Чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность. С помощью линейки измеряют диаметр зон задержки роста вокруг дисков, включая диаметр самих дисков.
Оценку результатов проводят по таблицам, которые содержат пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых, чувствительных штаммов.
Полученные значения диаметров зон задержки роста сравнивают с пограничными значениями в таблице и относят изучаемые штаммы к одной из трех категорий чувствительности.
В ответе указывают, какой чувствительностью обладает исследуемый штамм, а не размер зоны задержки роста. Наличие роста вокруг диска свидетельствует об устойчивости данного микроба к антибиотику. Зона задержки роста диаметром 15 мм является показателем малой чувствительности микроба к антибиотику. При диаметре зоны 15-20 мм микроб обладает средней чувствительностью. Зона более 25 мм указывает на высокую чувствительность к антибиотику.
|
|
|
|
|
|
